980 санпин: «СанПиН 2.1.5.980-00. 2.1.5. Водоотведение населенных мест, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод. Санитарные правила и нормы» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.06.2000) (с изм. от 04.02.2011, с изм. от 25.09.2014)
Санитарные правила устройства и содержания кладбищ – РТС-тендер
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель Главного государственного
санитарного врача СССР
А. И. Заиченко
10 февраля 1977 г.
№ 1600-77
Санитарные правила
устройства и содержания кладбищ*
1. Отвод участка под кладбище и его устройство
1.1. Согласно Строительным нормам и правилам (СНиП П-60-75) «Планировка и застройка городов, поселков и сельских населенных пунктов» кладбища и крематории должны размещаться в пригородной зоне города или другого населенного пункта, на расстоянии не менее 300 метров от жилых и общественных зданий и зоны отдыха (п. 6.30 и таблица № 31).
1.2. Площадь участка, отводимого под кладбище, рассчитывается исходя из норм СНиП П-60-75 (табл. № 31) — 0,01 га на 1000 человек (на первую очередь и на расчетный срок).
1.3. Отвод земельного участка под кладбище, проекты устройства новых кладбищ, расширения и реконструкции действующих — подлежат согласованию с местными учреждениями санитарно-эпидемиологической службы.
1.4. Месторасположение кладбищенского участка и его размеры предусматриваются в проекте планировки и застройки населенного пункта с учетом возможности использования территории кладбища после его закрытия под устройство парка или сада для общественного использования населением. При отсутствии проекта планировки и застройки участок для кладбища отводится с учетом местных условий при соблюдении указанного в п. 1.1. разрыва от жилой застройки.
_____________
* В настоящие санитарные правила включены также санитарные требования по захоронению, эксгумации и перевозке трупов умерших и останков умерших.
1.5. В сельских населенных пунктах, где источником водоснабжения являются колодцы, каптажи и другие устройства для децентрализованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, при расположении кладбища выше по потоку грунтовых вод, питающих эти источники, размер санитарно-защитной зоны между кладбищем и населенным пунктом при санитарно-гигиеническом обосновании может быть увеличен до 500 метров. В сельских населенных пунктах, пользующихся колодцами и другими источниками грунтовых вод, при расположении кладбищ ниже по грунтовому потоку санитарно-защитная зона между кладбищем и населенным пунктом может быть уменьшена до 100 метров.
На территории санитарно-защитной зоны от проектируемых и действующих кладбищ запрещается строительство жилых и общественных зданий.
1.6. Прокладка городской (поселковой) сети централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения по территории кладбища запрещается. Кладбище должно иметь самостоятельную систему водоснабжения для поливочных целей.
1.7. Не разрешается устройство кладбищ на территориях:
первого и второго поясов зон санитарной охраны источников водоснабжения, минеральных источников, первой и второй зоны округа санитарной охраны курорта;
на берегах морей, озер, рек и других открытых водоемов, используемых населением для хозяйственно-бытовых нужд, купания и других культурно-оздоровительных целей.
1.8. Участок, отводимый под кладбище, должен удовлетворять следующим требованиям:
а) иметь уклон в противоположную сторону от населенного пункта и открытых водоемов, используемых для хозяйственно-бытовых целей;
б) не быть подверженным оползням и обвалам;
в) не затопляться при паводках:
г) грунтовые воды на участке должны быть не менее чем в двух метрах от поверхности почвы при наиболее высоком их стоянии.
Примечание: при отсутствии участков, удовлетворяющих этому требованию, отводимый под кладбище участок должен дренироваться
д) иметь сухую пористую почну (песчаную, супесчаную, слабоглинистую и т.п.), обеспечивающую достаточную воздухопроницаемость и быстрое просыхание. Необходимо избегать участков торфянистых и с тяжелыми глинами;
е) иметь удобные, благоустроенные, озелененные подъезды.
1.9. При определении размера участка под кладбище следует исходить из установленного Строительными нормами и правилами (глава П-60-75) норматива 0,01 га на 1000 человек. Общую площадь мест захоронения следует принимать из расчета 65-70% от общей площади кладбища.
1.10. Устройство кладбища должно осуществляться по утвержденному в установленном порядке проекту, в котором, в частности, должно быть предусмотрено:
а) выделение участков (кварталов) для захоронения и очередность их использования;
б) направление, размеры и благоустройство проездов и пешеходных дорожек;
в) размещение и характер зеленых насаждений;
г) строительство необходимых для правильного функционирования кладбища зданий и сооружений (контора, сторожка, водопровод, специальное здание для предпохоронного сохранения трупов с траурным залом, цветочный магазин, общественные туалеты, ограждение и др.).
д) озеленение кладбища (создание защитных посадок по периметру кладбища и декоративных насаждений по основным аллеям и местам захоронения с учетом обеспечения достаточного проветривания и инсоляции). Площадь зеленых насаждений должна составлять не менее 20% общей площади кладбища.
При устройстве сельского кладбища обязательно выполнение требований подпунктов «а», «б», «в», «д», а также подпункта «г» в части строительства общественного туалета и ограждения территории кладбища.
1.11. Территория кладбища должна быть огорожена по периметру и спланирована таким образом, чтобы обеспечить быстрое удаление поверхностных вод.
1.12. Перед въездом на кладбище в городах, промышленных центрах и других крупных населенных пунктах должны предусматриваться площадка для стоянки автомобильного транспорта.
2.
Эксплуатация и содержание кладбищ.
Захоронение и перевозка трупов умерших
2.1. Ввод кладбища в эксплуатацию производится по согласованию с местными органами санитарно-эпидемиологической службы.
2.2. Захоронение производится в отдельных могилах на каждого умершего. На каждую могилу отводится участок 5 кв. м. Расстояние между могилами по длинным сторонам должно быть не менее 1 метра, по коротким — не менее 0,5 метра.
2.3. Длина могилы должна быть не менее 2 метров, ширина — 1 метр, глубина — 1,5 метра с учетом местных почвенно-климатических условий. При захоронении умерших детей размеры могил могут быть соответственно уменьшены. От дна могилы до уровня стояния грунтовых вод должно быть не менее 0,5 м. Над каждой могилой должна быть земляная насыпь высотой 0,5 м от поверхности земли или надмогильная плита. Насыпь должна выступать за края могилы для защиты ее от поверхностных вод. Ограждение могил нежелательно.
Примечания. 1. При захоронении тела умершего в сидячем положении слой земли над трупом, считая с надмогильной насыпью, должен быть не менее 1 метра.
3. Захоронение трупов умерших в семейных склепах нежелательно. В отдельных случаях, когда по местным традициям допускается устройство семейных склепов, захоронение умерших должно производиться в металлических (оцинкованных), герметично запаянных гробах.
2.4. Устройство братских могил, как правило, не разрешается. В исключительных случаях захоронение в братских могилах может быть допущено по согласованию с местными органами санитарно-эпидемиологической службы при соблюдении следующих правил:
а) расстояние между гробами в братских могилах должно быть не менее 0,5 м;
б) при захоронении в два ряда верхний ряд должен отстоять от нижнего не менее чем на 0,5 м;
в) гробы верхнего ряда должны быть расположены над промежутками между гробами нижнего ряда;
г) глубина братских могил при захоронении в два ряда должна быть не менее 2,5 м и дно могилы выше уровня стояния грунтовых вод — не менее чем на 0,5 м.
2.5. Захоронение производится при предъявлении соответствующего документа из местного ЗАГСа.
2.6. Перевозка или переноска умерших к местам захоронения совершается, как правило, в гробах.
Примечание: при захоронении трупов умерших в сидячем положении переноска их к месту погребения совершается на специальных носилках, а перевозка трупов вдали от предполагаемых мест погребения - в гробах.
2.7. Процесс погребения умерших в лечебных учреждениях или поступивших в патолого-анатомическое отделение для вскрытия (в том числе погибших в результате несчастных случаев) совершается, как правило, непосредственно из патолого-анатомического отделения, без завоза тела умершего домой.
Примечания: 1. В случае смерти, последовавшей в лечебном учреждении, труп умершего из патолого-анатомического отделения может по желанию родственников завозиться (не более чем на одни сутки) домой для прощания с покойным. В этих случаях труп должен быть предварительно забальзамирован (формалин, спирт и другие вещества, пригодные для этой цели) и охлажден. Охлаждение, по возможности, целесообразно продолжить и в домашних условиях.
2. Перевоз трупа умершего должен производиться в гробу, на дно которого необходимо положить вещества, хорошо впитывающие влагу (сухие опилки, мелкая деревянная стружка, торф и др.).
3. Запрещается завозить трупы умерших домой, если причиной смерти явились особо опасные инфекции (чума, холера, натуральная оспа, сибирская язва), а также когда условия запрещения устанавливаются патолого-анатомами (сильное разложение трупа, смерть, последовавшая в результате транспортных аварий и др.).
4. Порядок погребения умерших от особо опасных инфекций определяется специальными правилами Министерства здравоохранения СССР.
2.8. Захоронение умерших производится не ранее, чем через 24 часа после наступления смерти.
Примечание: Захоронение умерших допускается и в более ранние сроки, если труп подвергся патолого-аиатомическому вскрытию или судебно-медицинскому исследованию.
2.9. Перевозка трупов умерших к месту погребения (в случаях, когда смерть последовала не по месту жительства покойного) разрешается любыми транспортными средствами (железнодорожный, авиационный, автомобильный и др.) по получении специального разрешения на перевоз от соответствующего транспортного ведомства.
Для оформления перевозки трупа умершего с места, где последовала смерть к месту погребения в другом районе или городе страны, необходимо получить справку-разрешение на перевоз от местной санитарно-эпидемиологической станции (по месту смерти) по предъявлении заключения лечебного учреждения о причине смерти.
2.10. Перед перевозкой труп должен быть забальзамирован для длительного хранения. От момента наступления смерти до погребения в этих случаях должно пройти не более пяти суток.
2.11. При перевозке умершего железнодорожным или авиационным транспортом труп должен быть помещен в оцинкованный, герметично запаянный гроб, изнутри заполненный веществом, впитывающим влагу. Металлический гроб помешается в деревянный, плотно сколоченный ящик для транспортирования в багажном отделении.
2.12. При перевозке трупов умерших от особо опасных инфекций не разрешается открывать гроб для прощания.
2.13. Для ускорения процессов разложения и минерализации захоронение трупов умерших целесообразно производить в деревянных гробах, за исключением случаев, связанных с перевозкой и перезахоронением трупов и останков умерших.
2.14. Перезахоронение останков умерших допускается не ранее одного года с момента погребения в песчаных грунтах и не ранее трех лет в сырых грунтах, где процессы разложения и минерализации замедлены. Эксгумацию (извлечение) останков из могилы желательно производить в зимнее (холодное) время года, днем, в присутствии представителей органов коммунального хозяйства, милиции и местного учреждения санитарно-эпидемиологической службы.
Разрешение на извлечение останков из могилы и перенос их на другое место захоронения оформляется исполкомами местных Советов депутатов трудящихся.
Районная санитарно-эпидемиологическая станция дает заключение о возможности эксгумации останков по предъявлении соответствующих документов, разрешающих эксгумацию и перевоз останков на другое место захоронения, и справки лечебного учреждения о причине смерти эксгумируемого.
Перевоз останков осуществляется с соблюдением требований, изложенных в пп. 2.9 и 2.11 настоящих правил.
Примечание. Исключение из вышеуказанных правил допускается в особых случаях, в частности, когда эксгумация останков производится по требованию следственных органов и прокуратуры и др.
2.15. Могила после извлечения останков должна быть немедленно засыпана и поверхность почвы спланирована.
2.16. Извлечение останков умершего из братской могилы для перезахоронения не разрешается. Исключение может быть допущено лишь в случаях извлечения для перезахоронения останков всех захороненных в братской могиле по согласованию с местными учреждениями санитарно-эпидемиологической службы.
2.17. Территория кладбища (проезды, дорожки, другие места общественного пользования) должна регулярно поливаться в летнее время, посыпаться песком зимой, регулярно убираться (очищаться от мусора и опавших листьев), а зеленые насаждения поддерживаться в хорошем состоянии.
Могилы должны содержаться в порядке (исправление провалов почвы, подсыпка грунта, озеленение и т.п.).
2.18. Использование закрытого кладбища или отдельного участка на действующем кладбище для вторичного погребения может быть допущено не ранее, чем через 20 лет после последнего захоронения (кладбищенский период).
Примечание. В отдельных случаях, если кладбище размещено в благоприятных почвенных условиях, этот срок по согласованию с местными учреждениями санитарно-эпидемиологической службы может быть уменьшен до 15 лет.
Вопрос об использовании закрытого кладбища для вторичного погребения должен быть согласован с местными учреждениями санитарно-эпидемиологической службы.
2.19. Территория ликвидируемого кладбища (по истечении кладбищенского периода) должна использоваться в качестве зеленого массива для общественного пользования. Ликвидация могил в этом случае, как правило, производится без вскрытия останков захороненных, путем снятия надгробий.
В отдельных случаях, по прошествии полного кладбищенского периода, территория ликвидируемого кладбища по согласованию с местными учреждениями санитарно-эпидемиологической службы может быть использована для других целей.
В случае необходимости ликвидации действующего кладбища необходимо вскрытие всех останков и перезахоронение их на другое кладбище, с соблюдением правил по эксгумации и перезахоронению, изложенных в настоящем документе.
2.20. Ответственность за выполнение настоящих правил возлагается на органы, в ведении которых находятся кладбища.
2.21. Настоящие санитарные правила устройства и содержания кладбищ изданы взамен отмененных «Санитарных правил устройства и содержания кладбищ» № 343-60.
С 01 марта 2021 года новый СанПиН 1.2.3685-21
С 01 марта 2021 года вступает в силу новый СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания», срок действия ограничен 01.03.2027.
Новые санитарные правила объединили в себе множество ранее действующих гигиенических нормативов и санитарных норм в единый документ.
Общее количество упраздненных актов – 123, среди них:
- СанПиН 2.2.1/2.1.1.1278-03 «Гигиенические требования к естественному, искусственному и совмещенному освещению жилых и общественных зданий»
- СанПиН 2.2.4.3359-16 «Санитарно-эпидемиологические требования к физическим факторам на рабочих местах»
- ГН 2.2.5.2308-07 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны»
- ГН 2.2.5.3532-18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны»
- СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. Гигиенические требования к обеспечению безопасности систем горячего водоснабжения»
Новый документ содержит сведения о допустимых нормах концентрации вредных, загрязняющих, отравляющих веществ в атмосферном воздухе, в воздухе рабочей зоны, нормы предельно допустимых веществ на поверхности оборудования, нормативы качества и безопасности воды, в том числе показатели ее радиационной безопасности, предельно допустимые концентрации веществ в системах водоснабжения, показатели степени загрязнения почвы населенных мест и сельскохозяйственных угодий и т. д.
Также установлены предельно допустимые уровни физических факторов на рабочих местах. В частности, допустимые величины параметров микроклимата в помещениях, уровень производственной вибрации, дозы излучения, параметры освещения на рабочих местах. Имеется раздел, устанавливающий гигиенические нормативы к физическим факторам жилых помещений.
Отдельно предусмотрен раздел, устанавливающий гигиенические нормативы по устройству, содержанию и режиму работы организаций воспитания и обучения, отдыха и оздоровления детей и молодежи, в том числе требования к шрифтовому оформлению школьных учебников и электронных пособий с разбивкой на классы и другие нормы.
Подробно можно ознакомиться здесь.
Что такое специальная оценка условий труда (СОУТ) | Страница 16
Вы правильно поставили вопрос «Чем обоснованы доводы эксперта?» и это в данном случае основное.из действующего порядка 549н30 лет назад я перешёл из ВНИИ в администрацию края начальником отдела ГЭУТ. После того как на основе опыта работы в НИИ «вошёл в тему», я собрал госэкспертов и задал им один вопрос «Может ли госэксперт иметь своё мнение?», попросил ответ обосновать. Все ответили, что госэксперт может иметь своё мнение, но обоснование у каждого было своё. После этого я всем госэкспертам указал, что своего мнения у них не может быть и в своих Заключениях они свои выводы должны обосновывать только официальными документами, а также в Заключениях не должно быть таких слов: «по моему мнению», «я считаю», «возможно», «мне кажется» и тому подобное, хотя до меня в ГЭУТ это практиковалось. Когда я был на работе, я не пропускал ни одного Заключения, если госэксперт не подтверждал документально свои выводы. Благодаря этому за 20 лет моей работы в ГЭУТ, все 100% судебных решений были приняты на основании выводов госэкспертов. А сейчас !?!?!?!?
Мне жалко этих работников, которые из-за глупости работников кадров и непрофессионализма госэкспертов даже через суд не могут получить то, что заработали.
Извините, ударился в воспоминания – это возврастное.
36.Во всех случаях выявления несоответствия государственным нормативным требованиям охраны труда документов, представленных в составе оснований для государственной экспертизы условий труда или полученных по запросу в соответствии с пунктом 13 настоящего Порядка, в проекте заключения государственной экспертизы условий труда приводится подробное описание выявленного несоответствия с обязательным указанием наименования и реквизитов нарушаемого нормативного правового акта, содержащего государственные нормативные требования охраны труда.
37.Проект заключения государственной экспертизы условий труда составляется в двух экземплярах, подписывается государственным экспертом (членами экспертной комиссии) и утверждается руководителем государственной экспертизы.
38.Члены экспертной комиссии в случае несогласия с выводами, содержащимися в проекте заключения государственной экспертизы условий труда, вправе изложить в письменной форме свое особое мнение и приложить его к проекту заключения государственной экспертизы условий труда.
Особое мнение члена экспертной комиссии подлежит рассмотрению на заседании экспертной комиссии под председательством руководителя государственной экспертизы, по результатам которого может быть принято решение о внесении изменений в проект заключения государственной экспертизы условий.
из ранее действующего ПП 244
По окончании государственной экспертизы условий труда составляется экспертное заключение (в двух экземплярах), которое подписывается лицом (лицами), проводившим экспертизу, и руководителем экспертизы.
Если исполнители не пришли к общему мнению, то каждый из них обязан изложить в письменной форме причины своего несогласия с мнением других для рассмотрения их руководителем экспертизы.
12.Экспертное заключение должно содержать обоснованные выводы о соответствии (несоответствии) условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда.
Оба экземпляра экспертного заключения утверждаются органом исполнительной власти.
Решение экспертной комиссии принимается большинством голосов ее членов, фиксируется в протоколе заседания экспертной комиссии, который утверждается руководителем государственной экспертизы.
ПОЛОЖЕНИЕ
О ГОСУДАРСТВЕННОЙ ЭКСПЕРТИЗЕ УСЛОВИЙ ТРУДА РСФСР, утв.
Постановлением Совмина РСФСР от 03.12.90 N 557 слово «мнение» в любых словоформах отсутствует
под словом «эксперт» понимается эксперт аккредитованной организации, а не государственный гражданский служащий субъекта
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 27.04.2009 N 24
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ
ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
ГЛАВНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ САНИТАРНЫЙ ВРАЧ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПОСТАНОВЛЕНИЕ
от 27 апреля 2009 г. N 24
ОБ УТВЕРЖДЕНИИ САНПИН 2.3.2.2508-09
В соответствии с Федеральным законом от 30.03.1999 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст. 1650; 2002, N 1 (ч. I), ст. 1; 2003, N 2, ст. 167; N 27 (ч. I), ст. 2700; 2004, N 35, ст. 3607; 2005, N 19, ст. 1752; 2006, N 1, ст. 10; N 52 (ч. I), ст. 5498; 2007, N 1 (ч. I), ст. 21; N 1 (ч. I), ст. 29; N 27, ст. 3213; N 46, ст. 5554; N 49, ст. 6070; 2008, N 29 (ч. I), ст. 3418; N 30 (ч. II), ст. 3616; N 24, ст. 2801; N 44, ст. 4984; N 52 (ч. I), ст. 6223; 2009, N 1, ст. 17) и Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.2000 N 554 «Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании» (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст. 3295; 2004, N 8, ст. 663; N 47, ст. 4666; 2005, N 39, ст. 3953).
Постановляю:
1. Утвердить СанПиН 2.3.2.2508-09 «Дополнения и изменения N 2 к санитарно-эпидемиологическим правилам и нормативам СанПиН 2.3.2.1293-03 «Гигиенические требования по применению пищевых добавок» <*> (приложение).
———————————
<*> Зарегистрированы Минюстом России 02.06.2003, регистрационный номер 4613, с дополнениями и изменениями, зарегистрированными Минюстом России 16.06.2008, регистрационный номер 11848.
2. Ввести в действие указанные санитарные правила с 10 июня 2009 г.
Г.Г.ОНИЩЕНКО
Приложение
Утверждено
Постановлением
Главного государственного
санитарного врача
Российской Федерации
от 27.04.2009 N 24
ДОПОЛНЕНИЯ И ИЗМЕНЕНИЯ N 2
К САНПИН 2.3.2.1293-03
ГИГИЕНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
ПО ПРИМЕНЕНИЮ ПИЩЕВЫХ ДОБАВОК
Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы
СанПиН 2.3.2.2508-09
Внести изменения и дополнения в СанПиН 2.3.2.1293-03.
1. В Приложение 1 «Пищевые добавки для производства пищевых продуктов» после строки с индексом «E238» внести временную норму по строке с индексом «E239» в следующей редакции:
Органическое вещество в воде озер Приамурья
Алекин О.А., Основы гидрохимии . Л .: Гидрометеоиздат, 1970.
. Google ученый
Алекин О.А., Семенов А.Д., Скопинцев Б.А. Руководство по химическому анализу вод суши . Л .: Гидрометеоиздат, 1973.
Google ученый
Амурская ихтиологическая экспедиция 1945–1949 гг., Тр. МОИП , 1952, т. 3, стр. 512.
Баринова С.С., Сиротский С.Е. Биогеохимические и продукционные характеристики фитопланктона реки Амур и водоемов его подчиненной системы // Биогеохимические руды, рассеяние химических элементов. Ореолы рассеяния химических элементов в экосистемах Дальнего Востока. Владивосток: Изд.ДВО АН СССР, 1991, с. 123–145.
Google ученый
Билибин Ю.А. Некоторые геоморфологические наблюдения в пределах Дальнего Востока. М .: Акад. АН СССР, 1959, т. 2. С. 488–496.
Google ученый
Главатский С.Н. Группы и типы озер Нижнего Приамурья, в Геология, геоморфология, полезные ископаемые Приамурья , Хабаровск: Приамурск .fil. ГО СССР, 1961, т. 1, вып. 72, стр. 158–167.
Google ученый
Доманицкий А.П., Дубровина Р.Г., Исаева А.И., Реки и озера Советского союза (справочные данные) . Л .: Гидрометеоиздат, 1971.
Google ученый
Драчев С.М., Борьба с загрязнением рек, озер и водохранилищ промышленными и бытовыми стоками , Москва: Наука, 1964.
Google ученый
Иванов И.Г., Почвообразование на юге Дальнего Востока , М .: Наука, 1976.
Google ученый
Красюков В.Н. Авторские права СССР № 1385041, Бюл. Изобрет. , 1988, вып. 12.
Махинов, А.Н., Приустьевые озера притоков Амура, Изв. РГО , 1992, т. 124, вып. 3. С. 276–282.
Google ученый
Мордовин А.М. Некоторые данные по химическому составу воды в озере Удыль // Природные воды Дальнего Востока, , Хабаровск: Дальневост. Научн. Центр Акад. АН СССР, 1973, с. 113–117.
Google ученый
Мордовин, А. Некоторые особенности формирования озер юго-восточной части Удыл-Кизинской низменности // Геоморфологические, ландшафтные и биогеохимические исследования в Приамурье. . Геоморфологические, ландшафтные и биогеохимические исследования в Москве. : Наука, 1968. С. 31–39.
Google ученый
Неудачин А.П., Неудачина И.И. Биогеохимическая характеристика озера Петропавловское // Биогеохимическая экспертиза состояния окружающей среды .70–84.
Google ученый
Ресурсы поверхностных вод СССР, в районе Дальний Восток, Нижний Амур (Дальний Восток, Нижний Амур). Л .: Гидрометеоиздат, 1970, т. 18, вып. 2.
Санитарные правила и нормы охраны поверхностных вод от загрязнения. СанПиН 2.1.980-00 (Санитарные правила и нормы защиты поверхностных вод от загрязнения. СанПиН 2.1.980-00), М .: Минздрав РФ, 2000.
Скопинцев Б.А. , Гончарова И.А. Использование соотношений различных характеристик органических веществ в природных водах для ее качественной оценки // Современные проблемы региональной и прикладной гидрохимии . Л .: ГИМИЗ. 1987, с. 95–117.
Google ученый
Уфимцев Г.Ф., Иванов А.В. Морфоструктура озерных котловин Нижнего Приамурья // Геоморфология .1984. No 4. 1. С. 91–97.
Шамов В.В., Осипенко Б.В., Мещенин И.Г. Оценка современного состояния окружающей среды озера Болонь // Биогеохимические и гидроэкологические исследования на Дальнем Востоке. . // Владивосток: Дальнаука, 1998. С. 116–132.
Google ученый
Манка Дж., Ребхум В., Бортиндер А., Экологическая характеристика организмов во вторичных стоках, Science , 1974, т. 8, вып. 4. С. 1011–1020.
Google ученый
Я был вынужден контролировать мир — Глава 980
Как раз когда они производили свои расчеты, вся площадь кипела из-за таблеток Лули! Я думал, что на этот раз смогу увидеть только три вида таблеток, но не ожидал, что кто-то другой их усовершенствует!Это лучше, чем Саньюань от Чу! Все один за другим посмотрели на Лу Ли и обнаружили, что это странное лицо.Многие люди начали роптать в душе, как могли на этот раз выйти два черных коня!
Ни один из фаворитов, которых они предсказывали, выиграет чемпионат, на этот раз чемпион упал на голову Лу Ли.
«Конечно».
Глядя на таблетки в руке, Лу Ли усмехнулся. Вначале я потратил два куска лекарственных средств, но в конце концов упорствовал. Лу Ли не особо верил в очистку таблетки.
Но, в конце концов, Лу Ли достал священный камень, который он получил несколько дней назад.Он сделал из нее некую жидкость из священного камня внутренней земли. Благодаря этой штуке качество медицины Дэна неуклонно повышается до этого уровня!
С эликсиром в руке чемпион стабилен.
«Ни за что! Почему он может делать такие таблетки?» Чу Юань ударил по сцене сердитым кулаком. Его глаза были красными, и он не мог в это поверить.
Он никогда не обращал внимания на Лу Ли и никогда не слышал о Лу Ли. Но реальность дала ему пощечину, качество таблеток, обработанных Лу Ли, было лучше, чем его собственные!
Чу Юань быстро взглянул на Су Яня на сцене и обнаружил, что тот недовольно смотрит на него, и его сердце стало более отчаянным.Су Янь, должно быть, очень недоволен своим выступлением. Похоже, его надежда попасть в санямен рухнет.
Это все из-за Лу Ли!
Глаза Чжоу Руо онемели, и до сих пор трудно смириться с этим фактом.
С первого раза, когда я встретил Лу Ли, она думала, что другая сторона была просто хвастливым засранцем. Он просто хотел подойти к себе таким образом. Поэтому Чжоу Руо не обращали друг на друга внимания все время и даже считали Лу Ли клоуном.
Но теперь Лу Ли действительно совершенствует три вида пилюль, и ее сила намного сильнее, чем у нее!
Подумайте о ней и Лу Ли, прежде чем играть, Чжоу Руо сердце более горькое.Неужели она действительно хочет преклонить колени перед Лу Ли на публике? В таком случае у нее нет лица, чтобы оставаться в этом городе.
«Черт побери! Почему он, Цзи Лисюань, вырвался, чтобы ругать, это больше для него! Ли с самого начала даже презирал его. Однако этот факт теперь говорит ему, что Лу Ли не только могущественен сам, но и не может соревноваться с ним в алхимии.
«Ты, ты усовершенствовал три вида пилюль!» — Осенняя ночь подбежала к Лу Ли, — воскликнул.
Лу Ли пожала плечами, протянула ей таблетку и с улыбкой сказала: «На какое-то время мне повезло. На самом деле, я не уверен. Я просто попробую. Я выиграл пари».
«Ну, я действительно недооцениваю тебя. Я не ожидал, что ты будешь фармацевтом третьего класса. Почему ты не сказал, когда мы впервые встретились?»
Услышав слова ночи Цююй со следом жалобы, Лу Ли неловко рассмеялся и сказал: «Сначала я просто хотел поучаствовать во встрече как фармацевт. Кроме того, даже если я скажу, что я аптекарь третьего класса, вы в это поверите?»
Осенняя ночь вдруг язык thia, если в то время он действительно не поверит, он будет думать только о том, что Лу Ли много говорит.
Лу Ли это не волновало, и он спокойно сказал: «Я действительно не знаю своего текущего уровня. Я только что попробовал пройти эту конференцию».
Через некоторое время другие люди на поле тоже закончили очистку один за другим.
Наблюдая, как Мо Ци и другие спускаются со сцены, все больше не разговаривают, взволнованы, ожидая, когда они сделают окончательный результат! Осенняя лунная ночь увидела, что Мо Ци дал себя, чтобы ударить взглядом в глаза, а затем сразу же понял, что подошел к Лу Ли низким голосом: «Подожди минутку, ты не можешь присоединиться к двери десяти тысяч лекарств?»
Услышав слова осенней лунной ночи, Лу Ли был озадачен.
Ваняомэнь — лучший фармацевт здесь. Присоединиться к ним полезно для других. Но для него это не очень полезно, поэтому Лу Ли не планировал присоединяться с самого начала.
Только слышишь, осенняя лунная ночь говорит так, в сердце рождаются сомнения.
«Почему? Вы в конфликте с ваньямэнь?»
Осенняя ночь кивнула, сжав губы: «Хотя поверхность смеха, но на самом деле мы тайно находимся друг в друге. Это Чу Юань, вероятно, культивируется wanyaomen. Они хотят каждый чемпион присоединится к wanyaomen.Таким образом, каждый почувствует, что ванямен всегда находится под давлением Союза фармацевтов. «
» Это всегда влияло на нас. На самом деле наша сила не слабая. Но все чемпионы присоединились к wanyaomen, и лучший выбор для многих талантов — wanyaomen, а не мы. Спустя долгое время мы уже не так хороши, как они. «
Услышав это, Лу Ли внезапно понял, что такая вещь существует. То, что Чу Юань делал раньше, сделало Лу Ли очень несчастным, поэтому он не любил ваньямэнь.К тому же осенняя лунная ночь все так сказала, я не могу к ним присоединиться.
После получения подтверждения Лу Ли осенняя лунная ночь внезапно расслабилась и стала втайне счастливой. Пока Лу Ли присоединяется к Союзу фармацевтов, к нему, безусловно, присоединится больше людей. Союз фармацевтов может стать сильнее только за счет поглощения свежей крови!
«Пора определиться с финальным чемпионом. Я верю, что все это знают. Чемпион — Лу Ли
. После объявления Гала вся аудитория была словно зажжена пороховая бочка, и раздался гром, похожий на звук!
Многие силы начали тайно обсуждать способы связаться с Лу Ли и установить с ним хорошие отношения.Такой молодой аптекарь Санпин, мы не должны упустить его! Люди, у которых есть дочери, начинают готовиться выдать своих дочерей замуж за Лу Ли, даже будучи наложницами!
Су Ян вышел на сцену и спокойно сказал: «Лули, ты можешь присоединиться к нашей секте Ваньяо. Если у тебя есть наше обучение, ты обязательно станешь алхимиком четвертого класса или даже алхимиком пятого класса в будущем. ! »
Лицо Мо Ци стало уродливым. Что ты имеешь в виду? Их Союз фармацевтов не может вырастить сильных фармацевтов!
Все они немедленно бросили на Лу Ли завистливые взгляды.Ваняомэнь — это сила многих людей. Как они могут уйти? Даже Яотун хочет! И такие люди, как Лу Ли, должны быть в центре внимания тренировок!
Чу Юань злобно уставился на Лу Ли. В этом была его слава, но теперь все испорчено!
Однако Лу Ли вздохнул и сказал: «Спасибо за вашу доброту, но я не хочу присоединяться к Wanyao. Но я и профсоюз фармацевтов — преданные друзья. Я надеюсь, что мы сможем повесить имя в профсоюзе. аптекарей, не так ли? »
« Ха-ха, конечно! Мальчик, ты, должно быть, принял хорошее решение! »Выслушав это, Мо Ци расхохотался, и его лицо было полно удовлетворения.
В настоящий момент лицо Су Янь постепенно мрачнеет. Это первый раз, когда кто-то отверг свои ворота Wanyao!
| Дата | Код ТН ВЭД | Описание продукта | Страна происхождения | Кол. Акций | Блок | Вес нетто [KGS] | Общая стоимость [долл. США] | Название импортера |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 31 марта 2017 г. | 0805102000 | 1.Апельсины «ВАЛЕНСИЯ» свежий уражай 2017года упаковано 2800 картонных коробок 20 поддонов по 140 ящиков, ГОСТ 4427-82 пп. 2.1, 2.2; СанПин РУз№0283-10 — масса: 21000 кг 2. Мест 20, картон.короб.Общее кол-во 2800. мест: 20 | ЕГИПЕТ | 21000 | кг | 21000 | 14.4 | |
| 30 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины «ВАЛЕНСИЯ» свежий уражай 2017года, фасованные в картонных коробках 5600 штук 40 поддонов по 140 ящиков, ГОСТ 4427-82 пп. 2.1, 2.2; СанПин РУз№0283-10 — масса: 42 000 кг 2. Места 40, картон.короб.Общее кол-во 5600. мест: 40 | ЕГИПЕТ | 42000 | кг | 42000 | 28.8 | |
| 30 марта 2017 г. | 0805205000 | 1) Мандарин FRESH HARVEST 2016 упакован в древесину. Ящик нетто 8,7 кг, ПП 10,4 кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 — масса: 19140 кг; 2) 2200 деревьев. ВСТАВКА: 1) УРОЖАЙ СВЕЖИХ МАНДАРИНОВ 2016, упакованные в древесину. Ящики ПО0 11,5 кг нетто, ПО 14 кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 | ПАКИСТАН | 36390 | кг | 36390 | 29.112 | |
| 30 марта 2017 г. | 0805205000 | 1) Мандарин FRESH HARVEST 2016 упакован в древесину. Ящик нетто 8,7 кг, ПП 10,4 кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 — масса: 38280 кг; 2) 4400 деревьев. ВСТАВКА: 1) УРОЖАЙ СВЕЖИХ МАНДАРИНОВ 2016, упакованные в древесину. Ящики ПО0 10 кг нетто, ПО 12кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82- | ПАКИСТАН | 56280 | кг | 56280 | 45.024 | |
| 30 марта 2017 г. | 0805205000 | 1) Мандарин FRESH HARVEST 2016 упакован в древесину. Ящик нетто 9,5 кг, ПП 11кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 — масса: 9310 кг; 2) 980 деревьев. ВСТАВКА: 1) УРОЖАЙ СВЕЖИХ МАНДАРИНОВ 2016, упакованные в древесину. Ящики ПО0 11,5 кг нетто, ПО 14 кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 — веранда | .ПАКИСТАН | 56503 | кг | 56503 | 45.202 | |
| 30 марта 2017 г. | 0805205000 | 1) Мандарин FRESH HARVEST 2016 упакован в древесину. Ящики ПО0 8,7 кг нетто, ПО 10,4 кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 — масса: 18444 кг; 2) 2120 деревьев. ВСТАВКА: 1) УРОЖАЙ СВЕЖИХ МАНДАРИНОВ 2016, упакованные в древесину. Ящики ПО0 9,5 кг нетто, ПО 11 кг. ВАЛОВОЙ; ГОСТ: 4428-82 | ПАКИСТАН | 49376 | кг | 49376 | 22.219 | |
| 28 марта 2017 г. | 0805205000 | 1. Мандарины свежие, уражай 2017года, сорт: «W.MURCOTT», фасованные в пластиковые ящики по 600 штук на 6 поддонов; Сорт: «ORTANIQUE», фасованный в пластиковые ящики по 1620 на 20 паллетах. ГОСТ 4428-82 1.1; СанПин РУз№0283-10 — масса: 20710 кг 2. Места 26, формация 2220 | ТУРЦИЯ | 20710 | кг | 20710 | 14.197 | |
| 28 марта 2017 г. | 0805205000 | . 1) Мандарины свежие, урожай 2017 г., упаковка Кол-во 2000 шт. В картон.коробке ГОСТ 4428-82 — масса: 20000 кг; 2) 2000 карт. коробки; | ПАКИСТАН | 20000 | кг | 20000 | 1.45 | |
| 24 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины «ВАЛЕНСИЯ» свежий уражай 2017года, фасованные в картонных коробках 5600 штук 40 поддонов по 140 ящиков, ГОСТ 4427-82 п.2.1; СанПин РУз№0283-10 — масса: 42 000 кг 2. Места 40, картон.короб.Общее кол-во 5600. мест: 40 | ЕГИПЕТ | 42000 | кг | 42000 | 28.8 | |
| 24 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины свежий урожай 2017 г .: Апельсин «ВАЛЕНСИЯ», фасованный в картонные коробки по 2096 на 24 поддона в картонных коробках 2232 по 26 поддонов Т.В. Гости 4427-82 п.2.1, п.1.1 ГОСТ 4428-82, СанПин Руз№ 0283 — масса: 39700 кг 2. Мест 52, картон.короб.Обще 4328. | ТУРЦИЯ | 39700 | кг | 39700 | 27.206 | |
| 24 марта 2017 г. | 0805205000 | 1. Мандарины «MANDORA», свежие, урожай 2017, фасованные в пластиковые ящики по 140 на 2 поддона. ГОСТ 4428-82 1.1; СанПин РУз№0283-10 — масса 1100 кг2. 2 места, 140 пл.ящикиОбщее кол. Мест: 2 | ТУРЦИЯ | 1100 | кг | 1100 | 0.754 | |
| 23 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины «ВАЛЕНСИЯ» свежий уражай 2017года, упакованные в картонные коробки 2700 20 поддонов (10 карт.кор, поддон 140, поддон 10 130 карт.кор.) ГОСТ 4427-82 Раздел 2.1; СанПин РУз№0283 -10 — масса: 20250 кг 2. Места 20 2700 карт.короб.Общее кол. мес | ЕГИПЕТ | 20250 | кг | 20250 | 13.875 | |
| 23 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины «ВАЛЕНСИЯ» свежий уражай 2017года, упакованные в картонные коробки по 2800, ГОСТ 4427-82 п.2.1; СанПин РУз№0283-10 — масса: 21 000 кг 2. Мест 26, картон.короб.Общее кол-во 2800. мест: 26 | ЕГИПЕТ | 21000 | кг | 21000 | 14.4 | |
| 23 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины свежие урожая 2017 г .: Апельсины «ВАШИНГТОН», упакованные в картонные коробки по 2128 на 26 поддонов ТВ. Гости 4427-82 п.2.1, СанПин Руз№0283 — вес: 20 400 кг 2. Мест 26, картон.короб 2128. Общее кол. мест: 26 | ТУРЦИЯ | 20400 | кг | 20400 | 13.98 | |
| 20 марта 2017 г. | 0805102000 | 1. Апельсины «ВАЛЕНСИЯ» свежий уражай 2017года, упакованные в картонные коробки 2700 20 поддонов (10 карт.кор, поддон 140, поддон 10 130 карт.кор.) ГОСТ 4427-82 Раздел 2.1; СанПин РУз№0283 -10 — масса: 20250 кг 2. Места 20 2700 карт.короб.Общее кол. мес | ЕГИПЕТ | 20250 | кг | 20250 | 13.875 |
Динамический транскриптом, доступный геном и профили цистрома PGR в миометрии человека
Введение
Миометрий — мышечный компонент матки, состоящий в основном из гладких мышц и сосудистых клеток. Основная функция миометрия — поддерживать структурную целостность матки во время беременности и обеспечивать силу сокращения во время родов. Гладкомышечные клетки миометрия увеличиваются в количестве и в размере, а также переходят от синтетического состояния к сократительному во время беременности [1, 2].Эти клетки должны оставаться в состоянии покоя перед родами и производить фазовые сокращения на стадии родов [3]. После родов процесс инволюции уменьшает размер матки до небеременного состояния [4, 5]. Нарушения, связанные с миометрием, могут приводить к преждевременным родам, дистоции, аденомиозу и лейомиоме, которые создают серьезное бремя для здоровья матери и ребенка.
Стероидные гормоны прогестерон, эстроген и глюкокортикоид были показаны для регуляции экспрессии генов и пролиферации клеток гладкой мускулатуры миометрия [6–10].Эстроген модулирует гены, связанные с сокращением, и вызывает гиперплазию гладкомышечных клеток миометрия на ранних сроках беременности, активируя путь PI3K / mTOR и подавляя экспрессию миостатина [7, 8, 11, 12]. Эстроген также поддерживает рост клеток-предшественников миометрия [13] и работает вместе с прогестероном, способствуя пролиферации клеток боковой популяции лейомиомы посредством регуляции паракринной передачи сигналов WNT от зрелых клеток миометрия. [14]. С другой стороны, передача сигналов прогестерона подавляет экспрессию генов, которые связаны с пролиферацией клеток в культивируемых клетках миометрия человека, и отрицательно влияет на пролиферацию гладких мышц сосудов [9, 15, 16].Напротив, глюкокортикоиды подавляют пролиферацию клеток лейомиомы матки, клеток гладких мышц сосудов и клеток гладких мышц дыхательных путей, но не влияют на развитие клеточного цикла в культивируемых клетках гладких мышц матки [6, 17, 18]. Роль прогестерона и глюкокортикоидов в миометрии на ранних сроках беременности остается неизвестной.
Прогестерон также является одобренным FDA токолитическим средством для предотвращения преждевременных родов [19]. Передача сигналов прогестерона в первую очередь опосредуется рецептором прогестерона (PGR) и чувствительна к эндокринным разрушителям окружающей среды [16, 20].Механизмы, которые контролируют передачу сигналов прогестерона, включают метаболизм прогестерона, регуляцию транскрипции и посттрансляционные модификации PGR, а также взаимодействие между PGR и корегуляторами [21-25]. Перед родами передача сигналов прогестерона миометрия подавляет воспалительную и сократительную активности через путь ZEB1 / ZEB2-miR-200-STAT5b, PGR-AP-1, содержащий репрессивный комплекс транскрипции и зависимую от цАМФ-DUSP1 регуляцию фосфорилирования PGR [23, 26, 27] . При переходе к стадии родов, появляющиеся сообщения предполагают, что повышенное соотношение изоформы A PGR в стихе B может изменить эффект передачи сигналов прогестерона с репрессивного на индуктивный на транскрипцию генов труда, таких как GJA1, и дополнительно способствует соединению щелевых соединений в миометрии [ 27–29].Эти данные демонстрируют универсальность передачи сигналов прогестерона в биологии миометрия, проявляющуюся в активности его родственного рецептора PGR.
Это исследование фокусируется на физиологических изменениях между миометрием небеременных и доношенных беременных. Профили транскриптома, открытых участков хроматина и цистрома PGR в образцах миометрия человека на обеих стадиях документируются для выявления генетических путей и потенциальных основных механизмов, которые могут быть ответственны за структурную и функциональную адаптацию к беременности.Общие и отличные молекулярные особенности миометрия на этих двух стадиях не только обеспечивают клиническую значимость известных путей, но также предполагают новые механизмы, которые могут способствовать ремоделированию миометрия в поддержку беременности.
Материалы и методы
Образцы миометрия человека
Разрешение на работу с образцами тканей человека для всех экспериментов было получено от Институционального наблюдательного совета Медицинского колледжа Бейлора (BCM H-22119, утверждено 07.05.2008).Все образцы были получены из Гинекологического хранилища тканей для BCM, которому ранее было предоставлено разрешение на регулярный сбор образцов тканей женских половых путей в соответствии с отдельным протоколом IRB (H-33461). Письменное информированное согласие доступно для всех образцов, используемых для выполнения описанной работы.
Для целей этих экспериментов образцы миометрия были взяты у не рожающих беременных доношенных (TP; расчетный срок гестации 38–42 недели), перенесших кесарево сечение по обычным клиническим показаниям.Все образцы миометрия беременных женщин были взяты с краев гистеротомии после родов. Образцы не собирались у женщин, у которых в течение 6 часов после операции было увеличено количество родов, вызванных питоцином, или у женщин, ранее получавших 17-гидроксипрогестерон для лечения преждевременных родов. Кроме того, не собирались образцы у женщин, беременность которых осложнялась другими заболеваниями (включая, помимо прочего, гестационный диабет> IB, хориоамнионит, гипертензию, вызванную беременностью, преэклампсию, HELLP-синдром или его варианты).Образцы негравидного миометрия (НП) были получены от здоровых женщин в пременопаузе, перенесших обычную клинически показанную гинекологическую операцию. Все образцы негравидного миометрия были взяты из здорового миометрия в пролиферативную фазу менструального цикла и из участков, которые исключали как серозную оболочку матки, так и эндометрий, и находились на расстоянии не менее 2 см от ближайшей лейомиомы. Любые образцы от женщин, принимавших прогестины до операции, были исключены из анализа.
После кратковременного промывания каждого образца в фосфатно-солевом буфере (PBS) кусочки миометрия либо мгновенно замораживали (ChIPSeq), либо консервировали, погружая их в ледяной RNAlater (RNASeq) с временем теплой ишемии менее 30 минут.Впоследствии все образцы хранили при температуре <-80 ° C до использования. Анализы для каждого отдельного образца перечислены в таблице S1.
Экстракция РНК
Образцы миометрия гомогенизировали с помощью гомогенизатора Bead Mill 24 (15-340-163, Fisher Scientific, Waltham, MA) в пробирках Bead Mill Tubes (15-340-154 Fisher Scientific, Waltham, MA) с 1 мл Trizol (15596026, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс). Тканевые остатки осаждали и удаляли центрифугированием при 12000 g в течение 10 минут при 4 ° C. После добавления 200 мкл 1-бром-3-хлорпропана образцы вручную встряхивали в течение 20 секунд с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 3 минут.Разделение фаз проводили центрифугированием при 12000 g в течение 18 минут при 4 ° C. РНК-содержащий водный слой сохраняли и затем смешивали с 500 мкл этанола крепостью 200 мкл. Затем смесь пропускали через колонку для связывания РНК в RNeasy Mini Kit (74104, Qiagen, Germantown, MD) с последующими этапами промывки и элюирования, описанными в руководстве производителя.
RNAseq
Три образца миометрия NP и три образца TP подвергали анализу RNAseq. Библиотеки, приготовленные из образцов миометрия, секвенировали примерно с 50 миллионами считываний парных концов 101 пар оснований на образец.Необработанные чтения были впоследствии обработаны фильтрацией со средним показателем качества выше 20. Затем чтения были согласованы с hg19 с помощью TopHat версии 2.0.4 [30]. Значения экспрессии RNAseq выражали в виде значений FPKM (количество фрагментов на килобазу экзона на миллион фрагментов). Дифференциальное выражение было рассчитано с использованием Cufflink версии 2.2.1 [31]. Дифференциально экспрессируемые гены определяются как абсолютное кратное изменение ≥ 1,4, скорректированное значение p <0,05 и наличие FPKM ≥ 1 по крайней мере в одном из образцов.Функциональный анализ списков генов был выполнен с использованием анализа пути изобретательности (IPA, www.ingenuity.com) и базы данных для аннотаций, визуализации и интегрированного обнаружения (DAVID) v6.8 [32, 33].
ATACseq
Три образца миометрия от небеременных (NP) и трех доношенных (TP) образцов миометрия были отправлены в Active Motif (Карлсбад, Калифорния) для службы подготовки библиотеки (каталожный номер 25079). Библиотеки были созданы с помощью набора для подготовки библиотеки ДНК Illumina Nextera и секвенированы с помощью Active Motif и ядра для секвенирования NIEHS с помощью систем Illumina HiSeq 2000 и NextSeq 500 с считыванием парных концов 42 п.н. на каждом образце.Необработанные чтения были первоначально обработаны адаптерами обрезки и фильтрацией со средним показателем качества выше 20. Чтения, прошедшие начальную обработку, были согласованы с эталонным геномом человека (hg19) с использованием версии 1.1.2 Bowtie [34]. После удаления считываний, сопоставленных с митохондриальной ДНК, однозначно сопоставленные дедуплицированные считывания в каждом образце были нормализованы понижающей дискретизацией до 91,5 млн отдельных считываний. Для последующего анализа использовались только первые 9 пар оснований каждого считывания. Области открытого хроматина (OCR) были впервые идентифицированы с помощью MACS2 [35] с отсечкой скорректированного p-значения 0.0001 с последующим объединением геномных интервалов в пределах 100 пар оснований друг от друга.
Анализ мотивов и аннотация пиков для соседнего гена в пределах 25 КБ были выполнены с помощью инструмента обнаружения мотивов гипергеометрической оптимизации Motif EnRichment (HOMER) [36]. Алгоритм двумерного геномного следа (BaGFoot) [37] был использован для идентификации связывающих мотивов, демонстрирующих изменение доступности хроматина, включая глубину следа и доступность фланкирования между двумя стадиями миометрия с настройками по умолчанию.
ChIPseq
Два образца миометрия NP и два образца TP были подвергнуты анализу ChIPseq.Иммунопреципитация хроматина, подготовка библиотеки и секвенирование выполняли с помощью Active Motif (номер по каталогу 25006 и 25046, Карлсбад, Калифорния) с использованием антитела против PGR (sc-7208, Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас) и пользовательской библиотеки Illumina со стандартом Адаптеры Illumina PE [38]. Система Illumina HiSeq 2000 использовалась для секвенирования следующего поколения. Идентифицированные считывания односторонних последовательностей длиной 50 нуклеотидов были сопоставлены с геномной сборкой hg19 с использованием Bowtie версии 1.1.2 с настройками по умолчанию.В последующем анализе использовались только те считывания, которые прошли фильтр чистоты Illumina и имеют средний балл качества 20 или выше, выровнены не более чем с 2 несовпадениями и однозначно сопоставлены с геномом. Кроме того, если не указано иное, повторяющиеся чтения были удалены с помощью инструмента MarkDuplicates, доступного в picard-tools-1.119. Сохраненные выравнивания чтения были отсортированы по координатам, расширены до 300 оснований, а затем случайным образом уменьшены до 9 миллионов интервалов на выборку с помощью пользовательских сценариев. MACS (версия 2.1.1.20160309) был использован для выполнения пикового вызова с отсечкой FDR на 0,0001, используя вход миометрия человека в качестве контроля. Функции HOMER «annotatePeaks.pl» и findMotifsGenome.pl с настройками по умолчанию использовались для аннотации пиков и анализа обогащения мотивов заданных диапазонов пиков [36]. BEDTools версии 2.27.1 был выбран для слияния и пересечения пиков в анализе перекрытия с настройками по умолчанию [39].
ChIP-qPCR
Два образца NP и два образца TP, независимо от образцов, используемых в ChIPseq, были подвергнуты анализу ChIP-qPCR.ChIP-qPCR выполняли с помощью Active Motif (Карлсбад, Калифорния) с использованием антитела против PGR (sc-7208, Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас). Последовательности праймеров для анализа ЧИП-КПЦР являются ENO1_cF: AGCCCTTCCCCAATCATTAC, ENO1_cR: TACGTTCACCTCGGTGTCTG, LDHA_cF: GTGCATTCCCGGTACGGTAG, LDHA_cR: AGCAGAACCAGAGGCAGTTG, PLCL1_cF: GGAGAATGCGGGTCATCTTG, PLCL1_cR: CAGGAAACAAGCAGGAGTAGG и Untr12 (каталог # 71001, Активный Motif, Карлсбад, Калифорния). События связывания PGR рассчитывали в соответствии с уравнением, опубликованным в руководстве пользователя по каталожному номеру Active Motif 12970399.
Количественная ОТ-ПЦР
Шесть образцов NP и девять образцов TP, независимо от образцов, используемых в RNAseq, были подвергнуты количественному анализу ОТ-ПЦР. кДНК получали с помощью набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit (0437
праймеры, используемые в настоящем исследовании, включают OXTR_F: GGGGAGTCAACTTTAGGTTCG, OXTR_R: TTCCTCGGGATGTTCAGC, GJA1_F: GCCTGAACTTGCCTTTTCAT, GJA1_R: CTCCAGTCACCCATGTTGC, ZEB1_F: CCTAAAAGAGCACTTAAGAATTCACAG, ZEB1_R: CATTTCTTACTGCTTATGTGTGAGC, PLCL1_F: CAGGAAAAGATTGTACAGTGTCAGA, PLCL1_R: TTTGCCCCCAAATTATGAAG, SLC2A1_F: GGTTGTGCCATACTCATGACC, SLC2A1_R: CAGATAGGACATCCAGGGTAGC, HK2_F: GCTGAAGGAAGCGATCCA, HK2_R: GTGTCGTTCACCACAGCAAC, ALDOB_F: GGCAAGGCTGCAAACAAG, ALDOB_R: CCCGTGTGAACATACTGTCCT, PGK1_F: CAGCTGCTGGGTCTGTCAT, PGK1_R: GCTGGCTCGGCTTTAACC, ENO1_F: TCCCAACATCCTGGAGAATAA, ENO1_R: ATGCCGATGACCACCTTATC, PKM2_F: ACGTGGATGATGGGCTTATT, PKM2_R: CCAAGGAGCCACCATTTTC, LDHA_F: GTCCTTGGGGAACATGGAG и LDHA_R: TTCAGAGAGACACCAGCAACA.Зонд 18S рРНК предоставлен ThermoFisher Scientific (4319413E, ThermoFisher Scientific, Waltham, MA). Все результаты ОТ-ПЦР были нормализованы к уровням экспрессии 18S рРНК внутреннего контроля.
Статистический анализ
Двусторонний t-критерий Стьюдента с равной дисперсией использовался для количественных анализов qPCR.
Депозит данных высокого содержания
Необработанные данные RNAseq, ChIPseq и ATACseq находятся в SuperSeries GSE137552 в Омнибусе экспрессии генов Национального центра биотехнологической информации Национальной медицинской библиотеки.
Результат
Адаптивный транскриптом миометрия для беременности
Предыдущие исследования показали, что экспрессия генов, связанных с родами OXTR и GJA1 увеличивается, а ZEB1 и PLCL1 снижают экспрессию при переходе от состояния к родам. миометрий беременной [40–43]. Однако уровни экспрессии этих генов в миометрии до родов остаются неясными. Изучив 6 образцов миометрия у небеременных (NP) и 9 доношенных беременных (TP), мы расширили эти результаты, продемонстрировав, что уровни мРНК генов OXTR, GJA1, ZEB1 и PLCL1 начинаются ниже в небеременном миометрии и повышаются к сроку. беременность (рисунок 1).Эти наблюдения предполагают, что транскриптом миометрия динамически находится между двумя состояниями миометрия при подготовке к родам.
Рис. 1. Уровни мРНК генов, связанных с родами, в миометрии небеременных и доношенных беременных.Относительные уровни мРНК с помощью qRT-PCR в тканях миометрия 6 (NP, точки) и 9 (TP, треугольники) людей. Ось Y обозначает относительные уровни мРНК. *, p <0,05 по двустороннему t-критерию. Оранжевые полосы обозначают среднее значение для каждой группы.
Полногеномная динамика транскриптома от стадии NP к стадии TP была дополнительно исследована с помощью RNAseq в когорте образцов миометрия, независимо от тех, что в вышеупомянутом исследовании маркерных генов (Таблица S1).Используя критерий среднего количества фрагментов на килобазу транскрипта на миллион картированных прочтений (FPKM), большее или равное 1, по крайней мере, в одном из шести образцов, в миометрии было обнаружено 15907 активных генов (Таблица S2). В каждой группе NP и TP миометрий каждый имеет 14899 и 15260 активных генов, соответственно (Таблица 1 и Таблица S2). Между этими двумя стадиями образцы NP и TP разделяют 14612 активных генов (Таблица S2). В то время как 95,7% генов, экспрессирующих NP и 93,4% TP, присутствуют на обеих стадиях (таблица 1), общие профили транскриптомов демонстрируют значительную разницу, о чем свидетельствует анализ основных компонентов, который показывает четкое разделение между образцами стадий TP и NP (рис. 2A).Эти данные предполагают, что зависимая от беременности динамика транскриптома в миометрии в первую очередь является результатом изменения уровней мРНК, а не состава экспрессирующих генов.
Рис. 2. Различия между тканями миометрия NP и TP на транскриптомном уровне.(A) Анализ основных компонентов транскриптомов NP (синий) и TP (красный). (B) Дифференциально экспрессируемые гены (DEG) между группами. Дифференциально экспрессируемые гены определяются как абсолютное кратное изменение ≥ 1,4, скорректированное значение p <0.05 и имеющий FPKM ≥ 1 хотя бы в одном из образцов.
Таблица 1.Транскриптом человеческого миометрия у небеременных (NP) и доношенных (TP) людей. Гены с FPKM ≥ 1 по крайней мере в одном из образцов в каждой группе определяются как выраженные.
Используя абсолютное кратное изменение больше или равное 1,4 и скорректированное значение p менее 0,05 в качестве отсечки, между двумя стадиями миометрия было идентифицировано 2890 дифференциально экспрессируемых генов (DEG) с относительно более высокой экспрессией 1043 и 1847 генов. в тканях NP и TP, соответственно (рис. 2B).Гены, связанные с родами, снова демонстрируют повышенную экспрессию к доношенной беременности в этой когорте образцов со средними кратными изменениями на уровне 156 для OXTR , 2,9 для GJA1 , 1,6 для ZEB1 и 2,6 для PLCL1 (таблица S2), что соответствует предыдущие наблюдения в другой когорте особей (рис. 1). Анализ онтологии генов на DEG показывает, что гены, экспрессируемые на более высоких уровнях на стадии NP, обогащены в терминах, связанных, среди прочего, с транскрипцией, связыванием РНК и активностью гистондеацетилазы, что отражает синтетическое состояние миометрия NP.Напротив, термины, связанные с врожденным иммунитетом, транспортом и метаболизмом протеаз и углеводов, чрезмерно представлены среди генов с более высокими уровнями экспрессии во время беременности (Таблица 2 и Таблица S3), демонстрируя молекулярный профиль сократительного состояния в пользу контроля воспаления, внеклеточного ремоделирование и повышенная потребность в энергии, а также подготовка к последующим родам. Дальнейшее изучение 2890o выявляет потенциальные изменения молекулярной активности между стадиями NP и TP, что предсказывается дифференциальной экспрессией нижестоящих генов-мишеней интересующих молекул.Анализ пути изобретательности (IPA) оценивает повышенную активность TGFβ, PDGF, ERK и STAT, связанных с расширением / ремоделированием миометрия, TNF и AP-1, связанными с управлением воспалением, а также передачу сигналов p53, связанных с сокращением миометрия (Таблица 3 и Таблица S4 ) [11, 44–49]. Изменения этих молекулярных активностей, по-видимому, эволюционно законсервированы, о чем свидетельствует аналогичное наблюдение, в котором сравниваются транскриптомные профили миометрия мыши между 18,5 днями после полового акта и девственными (GSE17021, Таблица 3 и Таблица S5).Примечательно, что большинство подмножеств DEG, которые соответствуют IPA курируемой глюкозе ниже по течению, демонстрируют изменения экспрессии генов, согласующиеся с ответом на лечение глюкозой (таблица 3, таблица S4 и таблица S5), что предполагает относительно более высокую утилизацию глюкозы на стадии TP. Этот результат также согласуется с вышеупомянутым обнаружением обогащения онтологии генов, как показано в Таблице 2. Более того, гены, которые кодируют ферменты пути гликолиза, включая SLC2A1, ALDOB, PGK1, ENO1, PKM2 и LDHA , показали повышенную мРНК. уровни к доношенной беременности в двух независимых когортах образцов (рис. 3 и таблица S2).Ген HK2, который кодирует гексокиназу для фосфорилирования глюкозы, также показал значительно более высокие уровни экспрессии в миометрии TP в первой когорте, несмотря на то, что вместо этого продемонстрировал тенденцию к увеличению во второй когорте (рис. 3). Более высокая экспрессия генов гликолитического пути и нижестоящих мишеней глюкозы вместе предполагает увеличение использования глюкозы в миометрии TP по сравнению с таковым на стадии NP. Взятые вместе, эти результаты иллюстрируют адаптивный транскриптом миометрия в ответ на беременность и при подготовке к родам в различных аспектах, таких как реорганизация структуры, управление воспалением и сокращением, а также метаболическая адаптация.
Рисунок 3. Экспрессия гликолитических генов.На диаграмме слева изображен путь гликолиза. (A) Результаты RNAseq. Желтым и синим цветом показаны соответственно высокий и низкий уровни экспрессии генов. N = 3 для НП и 3 для ТП. (B-H) Относительные уровни мРНК в тканях из той же когорты людей, как показано на фиг.1. Ось Y обозначает относительные уровни мРНК. *, p <0,05 по двустороннему t-критерию. Оранжевые полосы обозначают среднее значение для каждой группы. N = 6 для НП и 9 для ТП.
Таблица 2.Онтология обогащенных генов включает в себя дифференциально экспрессируемые гены (ДЭГ) NP и TP миометрия.
Таблица 3.Изменения молекулярной активности от NP к TP, предсказанные анализом пути изобретательности (IPA), основанным на результатах человеческого RNAseq и мышиных микроматриц (GSE17021, девственный миометрий против 18,5 dpc).
Динамика доступного генома в миометрии
Поскольку профили транскрипции миометрия адаптируются к беременности, мы затем исследуем доступность генома миометрия, чтобы проверить, различаются ли также профили областей открытого хроматина между состояниями NP и TP.Анализ доступного для транспозаз хроматина с использованием секвенирования (ATACseq) [50] был проведен на образцах миометрия трех человек на каждой стадии. Каждый NP и TP миометрий имеет 45501 и 85777 открытых участков хроматина (OCR), идентифицированных по крайней мере в одном из трех образцов в группе (рисунок 4 и таблица S6). Среди этих геномных областей 9564 (класс I) и 50840 (класс III) OCR присутствуют исключительно в состояниях NP и TP соответственно, тогда как 35937 OCR (класс II) могут быть обнаружены в обоих состояниях (рисунок 4).В каждом классе OCR HOMER идентифицировал обогащение 128, 82 и 121 мотивов связывания транскрипционного фактора в OCR класса I, II и III, соответственно (Таблица S7). Среди этих обогащенных мотивов 45, 3 и 13 мотивов демонстрируют обогащение, уникально присутствующее в OCR класса I, II и III, соответственно (Таблица 4). Гены, которые кодируют соответствующие факторы транскрипции для подавляющего большинства этих мотивов, обнаружены активными в тканях миометрия человека (Таблица S2), подразумевая, что на взаимодействия этих факторов транскрипции с геномной ДНК с высокой вероятностью может повлиять изменение структуры хроматина между двумя состояниями. тканей миометрия.
Рис. 4. Открытая область хроматина в миометрии.Число участков открытого хроматина (OCR), идентифицированных в 3 NP и 3 TP образцах с помощью ATACseq. OCR внутри каждой группы были объединены. Также отмечается количество общих и уникальных OCR между выборками NP и TP.
Таблица 4.Обогащенные мотивы в каждом классе участков открытого хроматина.
OCR класса I и III, расположенные в пределах 25 т.п.н. от сайтов начала транскрипции DEG, произвольно определяются как DEG-ассоциированные динамические OCR (таблица 5), что делает эти OCR потенциальными регуляторными элементами генов для связанных DEG, находящихся под контролем хроматина. структурные изменения.Среди связанных OCR и DEG положительная корреляция наблюдается между 2989 OCR и 1461 DEG, которые имеют повышенную экспрессию генов, сопутствующую повышенной доступности генома или пониженную экспрессию генов с пониженной доступностью генома (Таблица 5). Это наблюдение предполагает, что эти 2989 OCR могут функционировать как предполагаемые энхансеры для 1461 ассоциированных DEG. С другой стороны, отрицательная корреляция наблюдается между 1660 OCR и 980 DEG, которые демонстрируют снижение экспрессии генов с увеличением доступности генома или увеличение экспрессии генов с уменьшением доступности генома (Таблица 5).Эта обратная корреляция подразумевает роль этих 1660 OCR как предполагаемых репрессоров для 980 DEG. Анализ обогащения мотивов DEG-ассоциированных динамических OCR дополнительно выявляет кандидаты в регуляторы транскрипции, которые могут контролировать транскрипцию ассоциированных DEG и на действия которых, возможно, влияет изменение структуры хроматина между двумя состояниями миометрия (Таблица S8). Среди ДНК-связывающих белков, которые могут занимать эти обогащенные мотивы, рецептор эстрогена, рецептор глюкокортикоидов, рецептор прогестерона, факторы транскрипции MEF2C, NFAT, NFkB, AP-1 и STAT были изучены на предмет их роли в биологии миометрия [6, 51– 54]; а CTCF и YY1 известны своими функциями в регуляции конформации хроматина [55, 56].Присутствие этих мотивов в динамических OCRs предполагает, что изменения в структуре хроматина могут также оказывать влияние на действия этих регуляторов транскрипции и конформации хроматина в модуляции ассоциированных DEGs между двумя состояниями миометрия. Дальнейшее изучение связанных DEG с помощью анализа обогащения онтологии генов обнаружило сигнальные пути, которые потенциально подвержены структурным изменениям хроматина, включая GTPases семейства Rho, актиновый цитоскелет, щелевые соединения, eNOS, релаксин, PDGF и HIPPO передачу сигналов для ремоделирования миометрия и регуляции сокращения, а также гликолиз и адреномедуллин для контроля метаболизма и кровообращения (таблица 6 и таблица S9).Таким образом, эти находки идентифицируют потенциальные сигнальные пути и их предполагаемые регуляторы транскрипции в миометрии человека, которые могут иметь дополнительный механизм контроля через доступность генома.
Таблица 5. Связь между DEG и динамическими OCR.Области открытого хроматина I и III классов определяются как DEG-ассоциированные, если они расположены в пределах 25 т.п.н. от сайта начала транскрипции DEG. Положительная корреляция определяется, если 1. повышенная экспрессия гена и доступность генома в связанных областях открытого хроматина или 2.снижение экспрессии генов и доступность генома в связанных областях открытого хроматина. Отрицательная корреляция определяется, если: 1. сниженная экспрессия гена и повышенная доступность генома в связанных областях открытого хроматина или 2. повышенная экспрессия гена и пониженная доступность генома в связанных областях открытого хроматина. Все сравнения были сделаны TP над NP.
Таблица 6.Избранные пути, связанные с изменениями статуса открытого хроматина. Анализ канонических путей IPA.
Данные ATACseq также позволяют оценить следы факторов транскрипции в открытых областях хроматина.Алгоритм двумерного геномного следа (BaGFoot) позволяет идентифицировать мотивы, которые расположены в углубленных участках следа связывания с белком (Δfootprint depth) в открытых областях хроматина, увеличивая доступность ДНК (Δ-фланкирующую доступность) из одного состояния в другое [37]. Ткани миометрия NP и TP демонстрируют различные наборы обогащенных мотивов (Рисунок S1 и Таблица S10). Соответствующие факторы транскрипции, которые могут занимать эти мотивы и также экспрессируются ALX1, ARID3A, FOXC1, FOXJ2, FOXJ3, HLF, HMGA1, HOXA13, HOXA5, HOXD9, NFIL3, NKX3.1, PBX1, POU6F1, PRRX2, REL и TBP для миометрия TP. Напротив, экспрессирующие регуляторы транскрипции, которые могут связываться с обогащенными мотивами в миометрии NP, включают EGR1, MDB2, MECP2, NRF1, SP1, SP2, SP3, SP4, ZBTB7B, ZBTB4 и ZNF219. Наши данные предполагают, что взаимодействия между этими факторами транскрипции и их геномными сайтами-мишенями в миометрии, вероятно, подвержены изменению структуры хроматина на эпигеномном уровне, переходящем между двумя состояниями миометрия.
Занятость генома PGR в тканях миометрия
Так как PGR играет жизненно важную роль в передаче сигналов прогестерона, и обогащение его мотива ДНК обнаруживается в областях открытого хроматина миометрия, мы затем исследуем профили занятости генома PGR в обоих случаях. Этапы НП и ТП. Биопсии миометрия от двух отдельных людей на каждой стадии подвергались анализу PGR ChIP-seq. Выявление пиков с использованием данных внутри каждого отдельного образца определяет интервалы занятия 24095, 9778, 10717 и 8053 PGR в образцах миометрия NP1, NP2, TP1 и TP2, соответственно, после нормализации до той же глубины секвенирования при 9 миллионах считываний на образец (Таблица S11).Эти области связывания PGR, представленные на каждой стадии, составляют 48,3% и 15,0% областей открытого хроматина в миометрии NP и TP, соответственно. Занятие PGR обогащено промоторами и 5′-нетранслируемыми областями (UTR) во всех четырех образцах миометрия за счет дистальных межгенных областей (Таблица 7), что предполагает тесное взаимодействие между PGR и аппаратом транскрипции вокруг промоторов in vivo для регуляция экспрессии генов. Примечательно, что увеличение занятости миометрия PGR вокруг промотора наиболее заметно в небеременном состоянии (34.3% для NP1 и 35,4% для NP2). С другой стороны, такое обогащение относительно ниже в состоянии TP (26,4% для TP1 и 12,0% для TP2) со сравнительно более высоким процентом связывания PGR в дистальной межгенной области (таблица 7). Это открытие указывает на то, что перераспределение занятости генома PGR происходит одновременно с ремоделированием миометрия и транскриптомными изменениями при адаптации к беременности.
Таблица 7. Полногеномные PGR, занимающие сайты относительно генных тел.интервалов связывания PGR были аннотированы системой аннотаций цис-регуляторных элементов.Промотор определяется как область в пределах 3 т.п.н. выше сайта начала транскрипции. Под телом гена понимается интервал в пределах 3 т.п.н. ниже сайта терминации транскрипции.
Последовательности ДНК областей, занимающих PGR, показали значительное обогащение консенсусного мотива связывания PGR [57] во всех четырех образцах миометрия по сравнению с фоновым геномом (обогащение p , значение 1 × 10 −18 [NP1], 1 × 10 −686 [NP2], 1 × 10 −1105 [TP1], 1 × 10 −1059 [TP2], Таблица S12), в то время как мотив консенсуса PGR можно найти чаще в TP чем интервалы связывания PGR миометрия NP (21.33% [TP1] и 26,20% [TP2] против 5,01% [NP1] и 18,57% [NP2], таблица S12). Избыточное представительство связывающих мотивов для факторов транскрипции, которые имеют известные признаки в миометрии, также наблюдается во всех образцах миометрия, включая NR3C1 (рецептор глюкокортикоидов) [6, 58], ATF3 [59], FOSL1 [60], JUN [60] , KLF9 [61, 62], NF k B [63, 64] и STAT5 [54] (Таблица S12). Точно так же ДНК-связывающие мотивы для кофактора PGR FOSL2 [27, 57], регулятора дифференцировки гладких мышц TCF21 [65] и главного регулятора гладких мышц SRF (CArG) [66, 67] также чрезмерно представлены во всех образцах ( Таблица S12).Эти данные в совокупности показывают, что PGR может взаимодействовать с ДНК посредством как зависимых от консенсусных мотивов, так и независимых способов, и такое взаимодействие является динамичным во время ремоделирования миометрия. Более того, наши наблюдения in vivo обеспечивают клиническую релевантность предыдущим результатам in vitro о том, что PGR взаимодействует с другими известными факторами транскрипции миометрия и мышц в непосредственной близости от цис-действующих элементов для регуляции транскриптома миометрия.
Дальнейшее изучение данных по обогащению мотивов позволяет идентифицировать кандидатные факторы транскрипции миометрия, партнерство с PGR, однако их функции в миометрии ждут исследования.Белки TEAD, как известно, опосредуют путь Hippo для регуляции размера мышечных волокон [68] и взаимодействуют с факторами AP-1 для решения судьбы гладких мышц [69]. Мотив для факторов транскрипции TEAD чрезмерно представлен в интервалах связывания PGR во всех четырех образцах (таблица S12), а экспрессия TEAD1, TEAD2, TEAD3 и TEAD4 обнаруживается как в тканях миометрия NP, так и TP (таблица S2). Факторы транскрипции семейства BATF действуют как пионерный фактор, который контролирует доступность хроматина [70] и служат ко-регуляторами для PGR, NR3C1 и AP-1 [71–73].Связывающий мотив для BATF, членов суперсемейства AP-1, является одним из самых богатых мотивов в областях связывания PGR во всех четырех образцах миометрия (Таблица S12), а BATF, BATF2 и BATF3 все экспрессируются на обеих стадиях исследуемого миометрия ( Таблица S2). YY1, регулятор конформации хроматина и образования петель ДНК [56], обнаруживает адекватные уровни мРНК между стадиями NP и TP (Table S2). Интересно, что мотив связывания YY1 чрезмерно представлен вокруг сайтов связывания PGR образцов миометрия NP, но становится менее обогащенным по сравнению с фоном в образцах TP (обогащение p , значение 1 × 10 −55 [NP1], 1 × 10 −61 [NP2], 1 × 10 −20 [TP1],> 0.01 [TP2], таблица S12). Эти находки указывают на потенциальные взаимодействия PGR с сигнальным путем Hippo, воспалительным ответом и регуляторами конформации хроматина для контроля транскрипции in vivo . Более того, пример связанного со стадиями дифференциального обогащения мотива YY1 в интервалах связывания PGR предполагает, что PGR может работать с различными наборами факторов транскрипции, обеспечивая профили транскриптомов, специфичные для фенотипа.
Затем мы определяем общие и различные интервалы связывания PGR между образцами миометрия NP и TP.Пики связывания Union PGR в образцах были получены на основе всех интервалов связывания PGR в четырех образцах, чтобы задокументировать присутствие и отсутствие каждого сайта связывания PGR в отдельных образцах. Всего найдено 30613 пиков связывания объединенных PGR (фиг. 5 и таблица S13). Количество объединяющих пиков, присутствующих в каждом образце, составляет 24019, 9491, 10402 и 7928 для NP1, NP2, TP1 и TP3 соответственно (рис. 5). Ткани миометрия NP1 и NP2 имеют 7323 пика слияния, в то время как это число между TP1 и TP2 составляет 4839 (Рисунок 5).Среди этих 7323 пиков в миометрии NP, связывающие мотивы PGR, факторов транскрипции STAT, SRF, MyoD и SMAD2 чрезмерно представлены (Рисунок 6 и Таблица S14). Обогащение этими мотивами также обнаруживается среди 4839 сайтов, занимающих PGR в TP миометрии (Рисунок 6 и Таблица S14). В соответствии с результатами анализа мотивов на отдельных образцах (таблица S12), консенсусный мотив PGR демонстрирует более высокие уровни обогащения PGR, занимающим интервалы миометрия TP, по сравнению с таковым на стадии NP (фигура 6).Кроме того, мотивы STAT, MyoD и SMAD2 также демонстрируют повышенное обогащение в миометрии TP, в то время как мотив CArG имеет более сильное избыточное представительство в образцах NP (Рисунок 6 и Таблица S14). Эти наблюдения указывают на то, что регулировка партнерства с другими факторами транскрипции на разных стадиях является обычным процессом среди особей за пределами индивидуальных вариаций.
Рисунок 5. Количество областей, занимающих PGR в геноме миометрия человека.PGR ChIP-seq был выполнен в двух отдельных образцах на стадиях NP или TP.Диаграмма Венна цветка показывает количество перекрывающихся и различных участков, занимающих PGR, среди четырех экземпляров.
Рисунок 6. Избранные обогащенные мотивы в общих интервалах связывания PGR на каждой стадии.Дальнейшее изучение связанных со стадией областей, занимающих PGR, выявило 2220 геномных областей, которые являются общими между 7323 и 4839 интервалами связывания PGR, в то время как 2773 и 1047 имеют отчетливое присутствие в NP и TP миометрии, соответственно (Рисунок 5). Помимо различий в геномных положениях, составы мотивов связывания транскрипционных факторов также демонстрируют расходящиеся профили среди этих трех групп областей, занимающих PGR (Таблица S15).Среди 95 мотивов, которые составлены из 50 верхних обогащенных мотивов каждой из трех групп, значения p обогащения выявляют существенное различие в степени представления этих мотивов между NP-отличными и TP-отличными регионами, занимающими PGR (рис. 7). Отдельные области TP сильно обогащены консенсусными связывающими мотивами для рецепторов прогестерона и глюкокортикоидов, белков AP-1 и факторов транскрипции TEAD, в отличие от относительно более низкого обогащения в отдельных областях NP.Напротив, отдельные сайты NP обнаруживают сильные сверхпредставления в мотивах факторов транскрипции ETS, фактора ядерной транскрипции Y, CTCF, YY1, Sp1 и NRF1, которые гораздо меньше обогащены отдельными участками TP. Примечательно, что 2220 общих областей имеют профиль обогащения мотивов, подобный профилю TP, а не отдельным областям NP (Рисунок 7). Это указывает на то, что PGR на стадии NP может взаимодействовать с более широким спектром регуляторов транскрипции, тогда как он, вероятно, работает с более сфокусированным набором факторов транскрипции в миометрии TP.В совокупности данные предполагают, что динамика мест связывания PGR между двумя состояниями миометрия позволяет различным комбинациям мотивов связывания факторов транскрипции, доступных для соответствующих регуляторов, взаимодействовать с PGR специфическим для состояния образом.
Фиг. 7. Верхние обогащенные мотивы связывания факторов транскрипции в 2773 различных NP (NPD), 1047 TP (TPD) и 2220 NP-TP общих (S) сайтах, занимающих PGR.50 лучших мотивов из каждой группы собираются и отображаются со значениями log p.Цветовые коды изображены в виде красно-бело-синего рисунка, при этом красный цвет указывает на наибольшее обогащение, а синий — на наименьшее обогащение.
Кандидатные гены-мишени PGR, непосредственно расположенные ниже по течению в миометрии
Связь между занятостью генома PGR и транскриптомом миометрия оценивается путем идентификации ближайших генов к 2220 общим и 2773 и 1047 различным интервалам связывания PGR между NP и TP миометрием. Среди этих 6040 областей, занимающих PGR, 4355 (72%) связаны с 2203 активными генами миометрия (Таблица 8 и Таблица S16).Эти 2203 гена-кандидата PGR, непосредственно расположенного ниже по течению, могут быть дополнительно разделены на 1431 NP-отличных, 183 TP-отличных и 589 общих активных генов NP-TP на основе их ассоциации с отдельными или общими интервалами связывания PGR (Таблица 8), в которых Анализ пути изобретательности идентифицировал 51, 37 и 166 канонических сигнальных путей, соответственно, которые имеют значение обогащения p менее 0,05 (Таблица S17). Профили 50 основных ассоциированных путей из каждой из трех групп проявляются в разных профилях (рис. 8).Известные примеры путей, которые селективно обогащены в отдельных группах, включают «передачу сигналов рецептора эстрогена» и «передачу сигналов метилирования ДНК и репрессии транскрипции» для отдельной группы NP, «передачу сигналов IL-10» и «ингибирование матричных металлопротеаз» для отдельной группы TP. и «передача сигналов актинового цитоскелета» и «передача сигналов р53» для общей группы NP-TP (рисунок 8 и таблица S17). Напротив, ни один канонический путь не имеет значения обогащения p менее 0,05 во всех трех группах.Эти данные предполагают, что каждая группа областей связывания PGR может вносить вклад в регуляцию когорты генов, которые обслуживают определенные функции физиологической адаптации во время беременности.
Рисунок 8. Верхние обогащенные канонические пути в 1431 NP-отличных (NPD), 183 TP-отличных (TPD) и 589 NP-TP общих (S) генах, связанных с PGR.Лучшие 50 обогащенных путей из анализа пути изобретательности из каждой группы компилируются и отображаются со значениями log p. Цветовые коды изображены в виде красно-бело-синего рисунка, при этом красный цвет указывает на наибольшее обогащение, а синий — на наименьшее обогащение.
Таблица 8.Связь между занятостью PGR и активными генами миометрия. Список ближайших генов к 2220, 7323 и 4839 общим и отличным интервалам занятия PGR был идентифицирован и дополнительно отфильтрован с критериями наличия максимального значения FPKM больше или равного 1 среди 6 образцов RNAseq миометрия для каталогизации активных PGR-ассоциированных гены.
Зависимость PGR в областях генома в ассоциации с интересующими генами дополнительно исследуется на дополнительных образцах миометрия, по два каждого из стадий NP и TP (Таблица 9).Гликолитические гены ENO1 и LDHA демонстрируют уменьшенные события связывания в миометрии TP по сравнению с таковым в NP. Учитывая, что оба гена демонстрируют более высокие уровни экспрессии в образцах TP (Рисунок 3), эти данные вместе указывают на отрицательную корреляцию между занятостью PGR и уровнями мРНК. Функция PLCL1 ослабляет простагландин-зависимую передачу сигналов кальция (патент США 20160161487A1). PLCL1 экспрессируется в миометрии человека (Рисунок 3 и Таблица S2) [40] и является мишенью для PGR ниже по течению [74].Занятость PGR в области 93kb выше гена PLCL1 может быть обнаружена в обеих когортах образцов миометрия (таблица 9 и таблица S13), которая может служить функциональным регуляторным элементом для гена миометрия PLCL1 . Хотя были протестированы только несколько областей генома, воспроизводимое определение занятости PGR в разных когортах образцов миометрия подтверждает результаты ChIP-seq для всего генома. Более того, эти находки также идентифицировали кандидатные цис-действующие элементы, посредством которых PGR может регулировать экспрессию гликолитических генов ENO1 и LDHA , а также связанного с сократимостью гена PLCL1 .
Таблица 9.Занятость PGR в выбранных геномных локусах во второй когорте образцов миометрия. ChIP-qPCR выполняли в отдельном наборе тканей миометрия NP (n = 2) и TP (n = 2) для теста занятости PGR. Выполняли технические трижды для каждой реакции qPCR, и среднее значение и стандартное отклонение трех повторностей использовали для расчета событий связывания PGR. Untr12, расположенный в генной пустыне, служит отрицательным контролем.
Обсуждение
Новизна исследования
Настоящее исследование документирует молекулярный ландшафт NP и TP миометрия, а также изменения между этими двумя стадиями.В то время как предыдущие полногеномные исследования выявляют механизмы-кандидаты для перехода от состояния, не связанного с работой, к состоянию родов [40, 75, 76], представленные здесь результаты сообщают о том, как миометрий реорганизуется и адаптируется от небеременного к состоянию доношенной беременности. Это иллюстрируется равномерным увеличением мРНК генов, связанных с родом, OXTR, GJA1, ZEB1 и PLCL1 во время ремоделирования миометрия с последующим дивергентным изменением паттернов экспрессии (Рисунок 1). Примечательно, что уровни мРНК миометрия ZEB1 и PLCL1 снижаются от срока отсутствия работы до состояния срочных родов [40, 43], что контрастирует с нашими наблюдениями, что эти два гена демонстрируют увеличение экспрессии от небеременных к доношенным беременным. состояние (рисунок 1).На уровне всего генома 60 из 126 генов, у которых есть значительные изменения уровней мРНК между термином «нетрудоспособность» и «родовым состоянием», либо не показывают изменений (55 генов), либо имеют противоположное направление (5 генов) экспрессии в наших исследованиях [ 75]. Хотя это несоответствие может быть результатом расхождений в данных разных когорт людей, также возможно, что эти 60 генов могут находиться под жестким регулированием у небеременных, термин «нетрудоспособность» и термин «родовые состояния» для потенциальных функций, зависящих от стадии.Эти наблюдения оправдывают будущие исследования своевременного изменения транскриптома миометрия в нескольких состояниях для просмотра динамики экспрессии генов с высоким разрешением. В совокупности наши данные транскриптома расширяют спектр знаний о динамике экспрессии генов миометрия и закладывают основу для будущего метаанализа, чтобы понять генетическую программу ремоделирования миометрия между небеременным и доношенным состояниями. Выявленные здесь молекулярные пути также могут служить ориентиром для изучения генетических и экологических воздействий, которые подрывают нормальную беременность, приводя к таким заболеваниям, как преждевременные роды и дистоция.
Оцениваемые карты генома предлагают план для изучения генетической и эпигенетической регуляции транскриптома миометрия. Идентифицированные открытые области хроматина, вероятно, содержат цис-действующие элементы, которые участвуют в регуляции транскриптома миометрия, и они могут быть предметом эпигенетического контроля. Например, связывающие мотивы рецептора эстрогена и регулятора клеточного цикла E2F1 чрезмерно представлены в открытых областях хроматина, обнаруженных только в миометрии NP (Таблица 4), что отражает более высокие уровни экспрессии генов для транскрипции и контроля генов (Таблица 4). 2) и подразумевает подготовку пролиферации гладких мышц к расширению миометрия на ранних сроках беременности под контролем рецептора эстрогена.Другой пример — ген MEF2A, связанный с родами [51]. Обогащение связывающего мотива MEF2A в областях открытого хроматина класса III (Таблица 4) указывает на то, что доступность MEF2A к его сайтам-мишеням может быть другим уровнем регуляции его действия в дополнение к изменениям в уровнях экспрессии [51]. Наш полногеномный интегративный анализ доступности генома и транскриптома выявил потенциальные регуляторные элементы и связанные с ними молекулярные пути, которые могут влиять на доступность хроматина (таблица S8 и таблица S9).Эти данные открывают путь для дальнейшего углубленного изучения эпигенетического воздействия на изменения транскриптома миометрия.
Учитывая, что прогестерон является основным стероидным гормоном для беременности и имеет клинические показания для предотвращения преждевременных родов, сфокусированное исследование занятости миометрия PGR по всему геному предоставляет карту для выявления цис-действующих элементов, связанных с PGR, и их возможных нижестоящих генов-мишеней для дальнейшее исследование механизма действия PGR. Примечательно, что влияние потери маточного p53 на продолжительность беременности описано на модели мышей [49].В нашем исследовании «передача сигналов p53» является одним из наиболее обогащенных путей в предполагаемых прямых последующих мишенях PGR (Таблица S17). Это открытие предполагает потенциальное взаимодействие между передачей сигналов PGR и p53 в миометрии. Между тем, чрезмерно представленные мотивы связывания факторов транскрипции, окружающие сайты, занимающие PGR, указывают на потенциальных партнеров, взаимодействующих с PGR для регуляции генов миометрия. Например, известно, что белки AP-1 являются партнерами PGR для регуляции генов, что подтверждается несколькими генами, производящими роды [27].Мы обнаружили, что связывающие мотивы многих субъединиц AP-1 являются одними из самых богатых мотивов в областях, занимающих PGR миометрия (Таблица S14 и Рисунок 7), что предполагает потенциальное общегеномное партнерство между PGR и AP-1. Наши результаты не только обеспечивают соответствие человека известным сигнальным путям на уровне in vivo , но также позволяют идентифицировать новые мишени, работающие с PGR или находящиеся под их контролем, для будущих исследований.
Показания рецептора прогестерона на метаболизм и ремоделирование миометрия
Повышенная экспрессия генов гликолитического пути и продукции лактата в образце миометрия доношенной беременной по сравнению с небеременным состоянием имеет два физиологических значения.Во-первых, это производство лактата и сократимость миометрия. Лактоацидоз миометрия наблюдается у женщин с дисфункциональными родами [77]. Было показано, что кислый pH отменяет сокращение миометрия [78]. Лечение лактатом может уменьшить спонтанные сокращения [79] и подавить воспаление матки и преждевременные роды [80]. Лактат превращается из продукта гликолиза пирувата в мышечной системе лактатдегидрогеназой. Снижение экспрессии в мышцах Ldha , кодирующей субъединицу лактатдегидрогеназы, приводит к снижению конверсии пирувата в лактат [81].Наши транскриптомные данные показывают, что путь гликолиза и продукции лактата настроен на увеличение способности обработки в терминальном состоянии по сравнению с таковым в небеременном миометрии (Рисунок 3 и Таблица S2). Более того, более высокая утилизация глюкозы миометрием в состоянии доношенной беременности также подтверждается изменением характера экспрессии генов, чувствительных к глюкозе (Таблица S4 и Таблица S5). Наши результаты показывают, что транскриптом миометрия приспосабливается к увеличению способности продуцирования лактата, что способствует поддержанию покоя миометрия.Второе замечание касается энергетического обмена и молекулярного биосинтеза. Наши транскриптомные данные показывают, что в миометрии TP повышение молекулярной активности HIF1A, вероятно, происходит на основе характера экспрессии нижестоящих мишеней HIF1A (Таблица S4 и Таблица S5). Повышение активности HIF1A предполагает наличие гипоксического миометрия в срок. В анаэробных условиях повышенный гликолиз может генерировать АТФ, чтобы компенсировать потребность в энергии для поддержания клеточных функций. С другой стороны, при нормоксии повышенная способность к более высокому потоку гликолиза может поставлять промежуточные продукты для синтеза аминокислот, чтобы генерировать строительные блоки для расширения миометрия.Повышенная экспрессия гликолитического гена в ответ на беременность соответствует этим гипотезам об изменении функций миометрия (рис. 3). Наконец, связывание PGR в геномных локусах ENO1 и LDHA связывает PGR с регуляцией метаболизма миометрия (Таблица 9), что требует дальнейших исследований.
Ограничения и будущее направление
Разрешение данных молекулярного профилирования, интеграция мультиомической информации и небольшой размер выборки в анализах ChIPseq, RNAseq и ATACseq являются основными ограничениями для настоящего исследования.Данные по всему геному здесь представляют собой сводное наблюдение за многими клетками, которые находятся в частях тканей миометрия. Хотя гладкомышечные клетки составляют большую часть массы, показания других типов клеток, таких как клетки крови и сосудов, также включаются как часть сводных результатов, что может снизить отношение сигнал / шум информации о клетке. тип интереса. Несмотря на потенциальный вклад транскриптов других типов клеток, данные транскриптома миометрия демонстрируют сильную связь с известными программами гладких мышц и миометрия (таблица 2 и таблица 3), данные ATACseq устанавливают тесную связь между предполагаемыми цис-действующими элементами и сигнальными путями для мышечных функций. (Таблица 6), а данные цистрома PGR обнаруживают обогащение мотивов связывания для главных регуляторов гладких мышц SRF и MyoD (Рисунок 6).Эти примеры демонстрируют, что текущие данные могут предоставить важную информацию в поддержку существующих знаний и предоставить новые результаты. Новые методы молекулярного профилирования на уровне отдельных клеток обеспечат более высокое разрешение, чем текущие результаты, полученные с помощью более устоявшихся технологий, что приведет к дальнейшему изучению роли каждой клетки и лежащих в основе молекулярных событий в данном состоянии миометрия.
Еще одним ограничением разрешения данных является то, что антитело, используемое для генерации текущих результатов PGR ChIPseq, выявляет обе основные изоформы PGR в миометрии, PGR-A и PGR-B.Эти две изоформы PGR отличаются доменом трансактивации AF-3, который существует только в PGR-B. Обе изоформы функционально способны модулировать транскрипцию общих и различных наборов нижестоящих генов в зависимости от контекста [25]. Следовательно, стехиометрическое соотношение между двумя изоформами на разных стадиях миометрия необходимо учитывать при интерпретации влияния PGR на экспрессию связанных генов. Для исследований тканей человека существует острая необходимость в разработке специфичных для изоформ антител к PGR, возможно, посредством нацеливания на белковые домены с конформациями, специфичными для изоформ.
Что касается ограничения интеграции мультиомической информации, в этой рукописи исследование занятости PGR и ассоциации транскриптома миометрия основано на строгом критерии, который связывает только один ближайший ген с каждым отдельным сайтом, занимающим PGR (Таблица 8). Обоснование использования такого строгого критерия основано на наблюдении, что большинство сайтов, занимающих PGR, расположены рядом с телами генов (Таблица 7). Цис-действующие элементы, оккупированные PGR, вероятно, оказывают большее влияние на транскриптом миометрия в соответствии с появляющимися моделями контроля транскрипции, согласно которым каждый ген подлежит регуляции множественными энхансерами и наоборот в топологически ассоциированном домене, образованном посредством конформации хроматина [82, 83].Будущая интеграция данных о конформации хроматина, полученных с помощью высокопроизводительного анализа конформации хроматина, позволит лучше назначить связывающие PGR цис-действующие элементы с ассоциированными генами, особенно при дальнодействующих взаимодействиях, чтобы обеспечить корреляционную информацию, более близкую к истинным молекулярным событиям.
Небольшой размер выборки по ATACseq и PGR ChIPseq, отчасти, также является ограничением настоящего исследования. Размер образцов биопсии и необходимое количество тканей для химического состава этих анализов сильно влияет на размер образца для исследования, особенно для анализов ATACseq и ChIPseq.Более того, содержание и текстура мышечной ткани создают проблемы для современной химии иммунопреципитации хроматина для ChIPseq и подготовки библиотеки для ATACseq. Эти факторы вместе препятствуют нашей способности исследовать образцы в более крупной когорте в масштабе всего генома. Появление новых технологий, включая CUT & Tag, протоколы с низким уровнем ввода клеток для ChIPseq и ATACseq, а также использование изолированных ядер из замороженных тканей в качестве контейнеров с химическими веществами, может преодолеть некоторые технические препятствия и позволить будущие исследования на более крупных когортах образцов [84, 85].
Наши данные документируют молекулярные профили на двух концах физиологического спектра тканей миометрия. Помимо различных функциональных и структурных состояний, небеременные образцы находились в среде с низким уровнем прогестерона в сыворотке, в то время как образцы доношенных беременных подвергались воздействию высоких уровней прогестерона в сыворотке. Следовательно, при интерпретации молекулярных изменений между небеременным миометрием в пролиферативной фазе менструального цикла и миометрием беременной необходимо учитывать смешивающие факторы физиологического состояния мышечных тканей и дифференциальных уровней сывороточного прогестерона.Тем не менее, наши результаты предоставляют базовую информацию, которую можно интегрировать с наблюдениями на моделях культуры эксплантатов ex vivo или in vitro на культуре клеток , чтобы выявить основные механизмы, которые регулируют ремоделирование миометрия. Большие различия в молекулярных профилях между этими двумя состояниями также предполагают, что будущие исследования тканей миометрия на стадиях, предшествующих сроку беременности, могут обеспечить лучшее разрешение зависимой от беременности молекулярной динамики миометрия, если образцы могут быть получены в достаточном количестве. для экспериментов.
Дополнительная информация
Обозначения дополнительных рисунков и таблиц
Рисунок S1.Мешковая диаграмма, отображающая изменение доступности ДНК (ΔFA) и изменение глубины следа связывания с белком (ΔFPD) от NP к этапам TP. Мотивы, имеющие статистическую значимость, отмечены красными квадратами.
Таблица S1. Список образцов миометрия человека.
Таблица S2. Активные гены в миометрии человека
Таблица S3. Полный список анализа генной онтологии в таблице 2.
Таблица S4. Прогнозируемые молекулярные активности с помощью анализа пути изобретательности, дифференциально экспрессируемые гены NP и TP миометрия человека.
Таблица S5. Прогнозируемая молекулярная активность с помощью анализа пути изобретательности на дифференциально экспрессируемых генах между 18,5 dpc и миометрием девственной мыши (GSE17021).
Таблица S6. Координаты генома участков открытого хроматина в образцах миометрия человека.«1» и «0» обозначают присутствие и отсутствие соответственно в миометрии NP и TP. Классы определены на рисунке 4.
Таблица S7. Анализ обогащения мотивов с помощью известного мотива HOMER в трех классах участков открытого хроматина, которые определены на фиг. 4.
Таблица S8. Анализ обогащения мотивов на DEG-связанных динамических OCR.
Таблица S9. Canonical Pathways, которые связаны с DEG, связанными с динамическими OCR.
Таблица S10. Оценка транскрипционного следа в образцах миометрия NP и TP с помощью BaGFoot.
Таблица S11. Координаты генома (Hg19) PGR, занимающие интервалы в тканях миометрия четырех человек.
Таблица S12. Обогащенные мотивы в каждом отдельном образце миометрия. Данные взяты из выходных файлов алгоритма поиска неизвестных мотивов HOMER.
Таблица S13. Информация о пиках Union об интервалах связывания PGR во всех четырех образцах миометрия.В разделе «UnionPeak-vs-Sample» 1 и 0 обозначают наличие и отсутствие пика связывания PGR в каждом отдельном образце.
Таблица S14. Обогащающий анализ 428 мотивов связывания факторов транскрипции в общих сайтах, занимающих PGR, на каждой стадии образцов миометрия.
Таблица S15. Обогащающий анализ 428 известных мотивов связывания факторов транскрипции в общих и различных областях, занимающих PGR, между группами NP и TP.
Таблица S16. Связь между занятостью PGR и активными генами миометрия.
Таблица S17. Канонические пути в связи с занятостью PGR и активными генами миометрия. 1431, 589 и 183 активных гена, которые связаны с NP-отличными, общими NP-TP и разными TP-занимающими сайтами PGR, как показано в таблице 8, были подвергнуты анализу пути изобретательности. Пути со значением обогащения p менее 0,05 отмечены голубым.
Великая Идиллия Тан 980 — Прочитать роман Великой Идиллии Тан Глава 980 Онлайн
Глава 607 предназначена только для признания заброшенности водяных облаков
«Брат императора, рабы решили, что в столице, такие как Бекхэм, они вернулись, они вернулись, поговорили с ними о детском кондитерском доме в городе, чтобы найти лучшее место. в городе, не собирают налоговые и жилищные деньги.«
Принцесса Цзиньчэн представила, что девять детей Сяобэя работают на улице, чтобы помочь Датану, и он был готов вложить все сбережения для местного строительства. Если есть опасность, что мне делать, если меня обманывают другие? Ватанабэ Ичиро чуть не обманул их Бекхэму.
Поэтому я хочу позволить девяти людям Сяобэй открывать магазины в прошлом. Тубо по-прежнему остается тем случаем, о котором она и Чи Дезузан сказали. Найти место — не проблема.
Чжан Сяобао и Ван Хао могут продолжить изучение стратегии и тактики их двоих, независимо от принцессы Цзиньчэн.
Чжан Сяобао использовал палку для управления бангом. Он сказал Ван Хао в небольшом кусочке песка. «Я считаю, что Ван И должен был принять меры. Я не знаю, что такое ветер. Он мешает или мешает? Оригинал действительно неприятен».
Ван Хао также не понимал ситуации в Ван И. На ее песчаном столе не было следов огня. Присяжные выяснили, что ей непонятна сложившаяся там ситуация.
См. Чжан Сяобао сказал: «Я никуда не тороплюсь, жду водяного облака, и водяное облако вернется, чтобы узнать ситуацию.Эй, что такое воздушные шары? Как далеко могут заглядывать их телескопы? Есть водяные облака, боюсь, что нет высотной разведки. эксперт? »
Ли Лунцзи не заметил, что Чжан Сяобао и Ван Хао все еще были заняты своими делами. Принцесса Цзиньчэн уже была очень беспомощна для него. на самом деле ситуация не такая.
Он объяснил: «Раб, Бекхэм, у них не может быть никаких несчастных случаев.Вы не знаете конфигурации окружающих их людей. Если вы можете выбрать, когда меня нет, я бы предпочел сменить команду защиты на Бекхэма.
Не беспокойтесь, что их обманут. В ее команде есть специальные мозговые центры. Они просто ничего не говорят. Если они обнаруживают, что им необходимо принять неправильное решение, они не могут его восстановить. Естественно, они должны остановиться.
Что вы можете сделать, даже если вас обманули? Над моей сестрой издеваются. Брат Сяобао обязательно поможет сестре найти его.Вы не должны знать футбольные команды и соревнования, которые появились в недавнем Пекине. »
« Футбол? » Принцесса Цзиньчэн вытерла слезы и усомнилась в этом. Затем она отреагировала: «Это мяч, таракан? Я смотрела, как люди там играют, и есть поло. Мяч очень высокий и очень точный. Всегда летайте над самым высоким крестом на вершине двух вертикальных игральных костей».
Это связано с Бекхэмом? Ой, если пнут, не падайте, несколько дней назад земля столицы тяжелая.
«Люксу, ты». Ли Лунцзи действительно не мог помочь. Он обнаружил, что его сестра всегда считала Бекхэма слабым человеком.
Конечно, в реальной ситуации они слабые? Есть братья и сестры, такие как Сяобао и И, слабые и слабые.
Гао Лиши еще не открыл рот. Сначала он улыбается на его лице. Он думает о девяти детях Сяобэя. Каждый раз, когда он идет играть, он всегда дарит подарки некоторым людям, когда возвращается. Настроение очень хорошее.
В прошлый раз у меня было два «голубя», и я должен был поить себя.Уже очень пышно. Я не вижу действительной стоимости. Я счастлив, что получил золотые и серебряные украшения. Мне не хватает денег. Это семья и родственники дома.
При этой мысли глаза Гао Лиши тоже были слегка красными, и он дважды рассмеялся, сказав принцессе Цзиньчэн: «Бэйбэй, они нашли группу людей за последние несколько дней, сформировали футбольную команду, изменили правила и будет сопровождать принцессу, чтобы увидеть завтра. Смотрите.
В результате правила были объявлены другим командам по крикету, которые играли в игру, проигрывая три игры подряд, все из которых были проиграны из-за большого счета, так что ситуация, которую сказал отец, см. младшая сестра проиграть игру, когда брат Xiaobao не желает.
Просто следуйте команде, в тот день я выиграл одну игру, а также научил многим техникам игры в футбол. Перед Wuju генералы выбирали отряд, по сравнению с этим, потому что в то время футбольная команда Бекхэма Changsheng.
«А? Сяобао рассердил сестру?» Принцесса Цзиньчэн была немного недовольна, и такой брат был.
В это время Королева Королева сказала: «Раб, не то, что ты думаешь, команда, которая обычно играет, — это команда после соревнований, и там вообще нет тренировок.
По сравнению с генералами генералов, это только отправил основной состав, вы не должны угадывать результат, двадцать девять к нулю, команда-победитель не забила гол.
На сегодняшний день команда Чаншена выиграла пять матчей подряд, не проиграла ни одного гола и не забила более 20 голов. Поэтому вам не нужно беспокоиться о том, что над Бекхэмом издеваются и у него есть брат.
Принцесса Цзиньчэн сейчас счастлива, но ей также интересно: «Новые правила? Сяобао настолько силен? У него еще есть время поиграть? Ты должен пойти посмотреть завтра.
Чи Дезузан так же любопытен, но то, что он думает, больше связано с тем, как Сяобао и Хэчжэнь учились, и они почти универсальны.
«Да, завтра будет игра, я пойду и посмотрю, но Сяобао не может играть лично, иначе … Сяобао, Сяобао? Сяобао, разве ты с тобой не разговариваешь? Что ты делаешь за песочным столом?
Когда Ли Лунцзи рассказывал о Чжан Сяобао, он обнаружил, что Чжан Сяобао и Ван Хао не смотрели на себя, а вместо этого рисовали на песчаном столе.
«А? Я? Мне интересно, где в этом месте Бекхэм будет жить». — сказал Чжан Сяобао с улыбкой.
«Вы песчаный стол на Цзяннань-роуд, а не на Хэнань-роуд, Сяобэй, они в Хуннуне». Ли Лунцзи очень грубо указал на то, что Чжан Сяобао лгал.
«Да, но бизнес Бекхэма проверяется в Цзянчжоу, на Цзяннань-роуд. На следующий день они отправятся на юг. Я не хочу видеть своего брата заранее. В штате Джоли Бекхэм также помнит зиму.Устрицы для тебя, чтобы ты их ел, ты не хочешь быть ею, я должен об этом подумать. Если она съест что-то плохое и заболеет, она не сможет вернуть вас к местной еде ».
Чжан Сяобао использовала уловку, чтобы отступить, как будто это объясняло, на самом деле, это более смущает, чем прямая ругань.
Конечно, лицо Ли Лунцзи было красным, и он был очень зол. Он взглянул на Чжан Сяобао со вздохом облегчения. Его первоначальная цель заключалась в том, чтобы спросить Сяо Бао и Яна, почему они не разговаривают сами с собой.В результате, два слова, позвольте Сяобао дать Он стал человеком, которому наплевать на Бекхэма.
«Тогда продолжайте смотреть, не дайте им заболеть. Это действительно потому, что вы съели что-то плохое, а не просто не можете съесть то, что они принесли. Самая большая группа врачей, которых вы отправили в их медицинскую школу, оценивается в опусти голову «.
Ли Лунцзи также сражался с Чжан Сяобао, что означает, что они могут оказаться в ситуации, когда они болеют или болеют.
Принцесса Цзиньчэн на этот раз ничего не сказала, только усмехнулась в сторону.
В это время командир был отправлен на улицу, и небольшая модель белого орла, первоначально помещенная над Ханчжоу, была перенесена на позицию Ван Цзюньчжуна.
И модель, которая представляет огонь, также помещена в направлении ста миль в трех направлениях в Ханчжоу.
Сказал: «Присяжные пришли к выводу, что генерал Шуйюнь получил разведданные и вернулся в китайский военный лагерь. Согласно оценке IQ генерала Шуйюня, он мог ясно выражать свои мысли.
Ван Хао удовлетворенно улыбнулся: «Что говорит Шуйюнь?»
«Генерал Шуйюнь подлетел к вашему песчаному столу, нарисовал его на сто миль вокруг своим ртом, а затем на бумаге со многими словами, используя свой рот. указать на слово «огонь» и раздуть в восьми направлениях. Качать головой за крыльями означает, что ветра нет ».
Командир вернулся к вопросу Ван Хао в соответствии с ответом жюри.
« Неужели водное облако такое умное? » Принцесса Цзиньчэн знала, что вода такая мощная, но не верила, что водное облако может передать такую конкретную информацию.
Чидзузан тоже недоверчиво смотрит. У Тубо также есть орел, который может обнаружить врага, но то, что он сказал сейчас, выходит за рамки того, что он может себе представить.
Командир кивнул: «Возвращаясь к принцессе, водное облако находится у центрального песчаного стола. Чжан Ин разрешил ему много выступать, а судья оценил его способности».
«Так поздно, все еще бросай его, его ребенок должен научиться летать, ладно, позови его, или ты хочешь, чтобы я ушел?» Чжан Сяобао очень недоволен, судьи намеренно называют здесь водяное облако..
Водное облако — это действительно орел, но чаще есть другие люди, которые смотрят на водное облако как на человека, и бросать людей неправильно.
Гао Лиши подошел к устью: «Маленькое сокровище, нелегко выйти, я найду водное облако».
Вскоре вернулся Гао Лиши. Позади него стояли два человека с деревянным бруском. На нем стояло водяное облако. Дело было не в том, что он не мог прийти один. Он боялся носить свои когти и иногда использовал силу своих крыльев.Сформировать «Гейл» несложно.
Есть еще несколько точильных камней под деревянными стропилами. Есть различия между крупным песком и мелким песком, которые используются для шлифования когтей и заточки в воде.
Обычно орел — это ранняя каменная мельница, а водяное облако становится все умнее. Он не делает таких глупостей. Как можно использовать камень? Как детское гнездо, глупый орел лижет ветки, какая вата теплая?
Чжан Ин надел ему на руку клетку и последовал за ним в спину.
Когда Чидзузан увидел водяное облако, он поздоровался: «Вот, я встретил тебя, я знаю, что ты умный. Я не ожидал, что ты будешь грамотным. Я сказал слово. Ты показываешь мне палец, просто»江 ‘. ”
Шуйюнь посмотрел на Чи Дезу Заня, не позаботился о нем, повернул голову и посмотрел на Чжан Инь, назвал два, Чжан Ин ударил орла орлом круглый год, сказал: «Водное облако, чтобы увидеть песок. стол, поднимите песчаный стол поблизости, нажмите «»
Два человека, несущих скорпиона, осторожно направили водяное облако в сторону песчаного стола, и водяное облако плотно сжало крылья, опасаясь, что разносящийся веером ветер дует модель на песочном столе.
Чжан Инь поднял клетку, и там были две раненые и забинтованные белки, и большой хвост качнулся.
«Это белка, пойманная Шуйюном. Какое-то время я говорил вам, я понял, что он пытался отдать их Бекхэму, чтобы он поиграл, поэтому рана была неглубокой. Когда белку послали, поймали только шкуру на спине. . Я носил его, и он не умер. Врач дал его и накормил. Через несколько дней рана заживет ».
Все слышали слова и смотрели на водяное облако.Водяное облако только кивнуло Чжан Сяобао и Ван Хао, показывая, что он понимает человеческий язык. Это именно то, что это значит.
Чжан Сяобао подошел, и голова Момо Шуйюнь сказала: «Это сложно, Бекхэм знает, что они будут очень счастливы, но их сейчас нет, и вы не можете видеть, как ваш ребенок учится летать.
Когда маленькие ребята хотят начать учиться летать, не забудьте заранее поздороваться, хотя мощь нашей семьи невелика, но способность защитить малышей все же есть.
Слова Чжан Сяобао, никто из его окружения не согласен.
Ли Лунцзи особенно хорош: «Сяо Бао, тебя не называют смирением, лицемерием, генералами воды, твоя способность ловить белок — это действительно талант, ты должен гордиться облаками, чтобы ты был сокрушительным офицером, Генерал Юньсяо, с сумкой для золотой рыбки, что ты имеешь в виду? »
Шуй Юнь на этот раз не понял, посмотрите на Ли Лунцзи и Чжан Сяобао.
Сяобао упомянул о сумке с золотой рыбкой на поясе и сказал: «Сумка с золотой рыбкой — это то, что нужно.Вы вообще не можете его использовать. Генерал Юньсяо — чиновник, состоящий из трех продуктов. Из трех продуктов три продукта такие же, как у Бекхэма, и они почти такие же ».
Даже с несколькими картинами Шуй Юнь наконец понял это. Он кивнул и закричал на Ли Лунцзи. Возможно, он не знал. какова на самом деле официальная позиция Санпина, но это было хорошо знать.
Чжан Сяобао сказал: «Шуй Юнь, они не верят в твои способности, ты позволишь им проверить».
«Ваше Величество, вы пройти тест водой, задача не так уж и сложна.»Чжан Сяобао сказал Ли Лунцзи.
Группа людей вскоре начала обращать внимание на водяное облако, например, спрашивать, что один плюс один равен нескольким, например, спрашивать, какое водяное облако может понять, и так далее и и т. д.
Чжан Сяобао и Ван Вэй воспользовались возможностью и подошли к столу с песком, чтобы обсудить ситуацию.
«Ван И начал. Когда не было ветра, он принял собственное решение и сжег воздушный шар врага. Спасибо водяному облаку, иначе …«
» Иначе мертвых будет больше. Но даже в этом случае они не хотят торопиться и найти нашу главную силу. Как вы думаете, есть воздушный шар для разведки и он непобедим? Даже если вы воспользуетесь самолетом-разведчиком, я позволю им его найти. К основной силе.
Ван И хорошо поработал. Я надеюсь, что они смогут отсрочить время. Эй, война такая. Очевидно, что оставшиеся войска отправлены на смерть, но они должны решить.
Слова, сказанные Ван Хао, заставляют людей чувствовать себя беспомощными, но их выражения все еще остаются решительными.Когда маршалы не уязвимы, они позволяют солдатам жертвовать напрасно, кусая их зубы и резая их.
Чжан Сяобао использовал команду bāng, чтобы указать на огонь: «Горный огонь, не говоря уже о том, что его можно уничтожить, особенно в осенних условиях, нападающий может сделать только два выбора. Во-первых, место не перемещается, ожидая за прибытие армии позади «.
Ван Хао взял слова: «Во-вторых, авантюрный рывок, отражающий ценность первопроходца, мы уже знаем, что генерал-нападающий противника — Чжан Шоуци, который позволил ему бежать к центральному песчаному столу, чтобы создать проблемы, позвольте нам спасти Контрастная линия и способ разбора Анализ суждения.
Ван Хао закончил, глядя на Чжан Сяобао, Чжан Сяобао задумался на некоторое время, сказал: «Сетка Чжан Шоуци все еще довольно хороша, я сужу, он не будет разделять две дороги, идти рука об руку и обходить горение. В горной местности он сконцентрируется на всем пути. Затем змея двинулась вперед и перешла из китайской армии в отряд воздушной разведки.
Да, я считаю, что его команда воздушных шаров полностью уничтожена. Я не верю, что они временно изменят соотношение команд в структуре войск, которым вы их учите.
Во-первых, потому что они привыкли сражаться в соответствии с пропорцией отрядов, которых вы обучаете, а во-вторых, их бросили в ту ночь, они не могли собраться вместе, чтобы обсудить, а затем изменились, чтобы достичь единства.
Когда Чжан Сяобао сказал это, не было слов, и он сказал прямо.
Ли Лунцзи и другие следят за потоком воды, и когда они слышат слова Чжан Сяобао, они сразу же успокаиваются и слушают анализ Чжан Сяобао.
Ван Хао было все равно. Теперь они с Сяо Бао изучают войну. Я считаю, что даже если Ли Лунцзи не удовлетворен, он должен позволить им двоим сопровождать чат, и они могут прямо отказаться.
Следовательно: «Согласно информации, которую мы усвоили за много дней, Чжан Шоуци — оппортунист, и у него есть достаточно, чтобы защищаться». Думаю, он может отправить небольшой отряд с другой дороги, а затем использовать телеграмму, чтобы быстро доставить новости.
Неужели он думает, что с радио мир непобедим? Есть преимущество, должен быть недостаток, пусть водное облако отдыхает, или они теряют его и думают, что оно потеряно в водяном облаке, не будут убеждены, я сообщу им на этот раз, быстрые новости, также можно использовать со стороны врага.
Ли Лунцзи наблюдал за ними. Внезапно он увидел, как Ван Хао указал командным бангом на место Хуаншаня. Когда он услышал слова Ван Хао, он внезапно почувствовал, что генералам предстоит пройти очень серьезное испытание.
Чжан Сяобао не обращал внимания на других, посмотрел на место, указанное Ван Хао, кивнул: «Хорошо, съесть основные силы врага в Хуаншане, по оценкам, мы должны не менее 10 000 человек, вы хотите использовать тактика воробья на всем пути через передовую систему разведки противника и мобилизацию основных сил врага перед ā.
Тогда армия, которую мы полностью организовали, мы должны сражаться друг за друга. Артиллерийский огонь врага все еще очень силен, и мои материально-технические средства не успевают за ним.
Когда Ван Хао услышал анализ Чжан Сяобао, он улыбнулся и сказал: «Как это возможно, какие виды оружия они свирепые? Когда снаряды — это семена кунжута? Их много в кармане. Я хочу дать им костер. Я вижу, как судит Чжан Шоуци? »
Говоря об этом, Ван Хао сказал командиру: «Командир, разведчики китайской армии в качестве командира, передает новые приказы с максимальной скоростью, разведывает команду и вызывает армию для обсуждения вопросов.«
Вскоре все команды разведывательной группы в китайской армии выстроились в очередь, и они просто игнорировали Ли Лунцзи и других. Когда их не было, они смотрели на Ван Хао один за другим.
« Командование, отправлять приказы другим подразделениям, каждая часть отряда из ста человек, уделять внимание сокрытию, рассредоточить врага, взять Ханчжоу в качестве линии восток-запад, выполнить извилистое движение, такое как обнаружение небольших подразделений противника в средней линии на север, с ближайшей дружной командой, окружите его и уничтожьте.
Если вы обнаружите, что небольшие подразделения противника находятся в середине линии, вам не нужно сражаться, быстро отступайте, и армия будет отделена от поля зрения врага. Слияние с другими командами не допускается. Если противник преследует, продолжайте рассеиваться, сражайтесь друг за друга, прячьтесь в лесу, зажигайте лес.
Цель — вывести основные силы противника к подножию горы Хуаншань, и командующий тыловым отделом приказывает.
Ван Хао организовал переброску солдат, а затем сказал, что логистику ударил Чжан Сяобао, и выполнил чистую и сердечную военную церемонию: «Прибыл командир логистики Чжан Сяобао.«
» Чжан Сяобао, я приказал вашему министерству сделать запасы лука и стрел для моей основной армии. Никаких задержек ». Ван Хао в это время был не смущением Чжан Сяобао, а настоящим командиром.
Чжан Сяобао также не воспринял Ван Вэя всерьез и сказал:« Чжан Сяобао возглавил команду, прошел мимо командира, передал мои приказы и мобилизация материально-технического обеспечения направила войска для отправки приказов министерствам в кратчайшие сроки.
Содержание: Батальон тылового обеспечения разделен на две группы: три бригады и четыре бригады, вторую дивизию и первую бригаду, вторую бригаду и второй полк, третью дивизию, первую бригаду, третий полк и четвертый дивизион.Две бригады, нет, три полка, четыре отдельные дивизии, три батальона, четыре батальона, в одно и то же время, собрали все силы по 20 000 человек, доставляя продовольствие и дальнобойное оружие для скрытой доставки Хуаншаня.
Две другие дивизии, три бригады, четыре бригады, два полка, три дивизии, две бригады, три полка, четыре дивизии, одна бригада, один полк, два полка, пять отдельных полков, одна дивизия, одна бригада, один полк, два полка, готовые к возгоранию, готовятся к атаке.
Если командир в первые десять дней не получает приказа, то по самой южной линии карты дороги Цзяннань, автономное движение, бывшее ā, или против вражеской армии. Сеть чтения романов f2k
Коснитесь экрана, чтобы использовать дополнительные инструменты Совет: вы можете использовать левую и правую клавиши клавиатуры для перехода между главами.
«ЯНБАРУ 2» — место, где можно отведать здоровую кухню Окинавы по разумной цене!
Если вы хотите отведать недорогие и вкусные блюда окинавской кухни в Синдзюку, то рекомендуем вам эту «Окинавскую кухню YANBARU 2 (や ん ば る 2 号 店)»!
Когда я (Мацуо) хочу съесть много овощей по дороге домой с работы, я стараюсь иногда посещать этот ресторан с друзьями.
В этом ресторане много посадочных мест (116 мест), но, что удивительно, ночью в нем бывает много людей.
Существует также комплексное меню, в которое входит гречневая лапша, полуразмерный рис и санпин-ча (жасминовый чай в окинавском стиле). Это очень выгодно.
«Комплексный обед из папайи» стоит 900 иен, «Гойя Чампуру (жареный с тофу и яйцом)» — 980 иен, а «Фу тэйсоку (набор из сушеной пшеничной глютена)» — 880 иен.
Классический способ заказа — выбрать 1 или 2 вида комплексных обедов и попросить закуски по меню.
Типы блюд, которые я не пропущу, чтобы заказать, — это «Фу Чампуру (белая глютен, овощи и жареный тофу)», который стоит 480 иен. Поскольку он содержит белую глютен вместо мяса, он очень полезен, и мне также нравится его жевательная текстура.
Затем я заказываю жаркое из папайи и свинины «Папайя Иричи», оно тоже очень вкусное. Это будет стоить 550 иен.
Также рекомендуется специальный салат из окинавского рифа «Салат Шиса (с морским виноградом)».
Другой рекомендуемый товар — «Mozuku Tempura (Темпура из морских водорослей)», который имеет очень странную текстуру и стоит 460 йен.
«Джимами Тофу (арахисовый тофу)» — мягкий и жевательный десерт, в котором используются арахис и тофу. Он свежеприготовленный каждое утро и стоит 480 иен. «Рафуте» (глазированная свинина квадратной резки) стоила 550 иен.
Рекомендуемое обеденное меню — «Обеденный комплекс». В этот набор входит рис, приготовленный в стиле Окинавы, суп, и вы можете выбрать одно блюдо чампуру по своему усмотрению, которое будет стоить вам 980 иен.
«Окинава Чампуру домбури (чаша окинавского чампуру)» стоит 650 иен. «Уми будо тороро домбури» (чаша морского винограда) стоит 680 йен.Обед тоже разумный ♪
★ В этом же районе находится главный филиал этого ресторана.
Информация
| Название ресторана | Окинавская кухня ЯНБАРУ (や ん ば る) |
| Адрес | 3-22-1 Синдзюку, Синдзюку-ку, Токио |
| ТЕЛ | 03-3353-2028 |
| Время работы | 11: 00-24: 00 (L.O.23: 30) |
| Закрыт | Нет |
| Доступ | 5 минут пешком от восточного выхода «Станция Синдзюку» |
ПРИМЕЧАНИЕ. Информация о магазинах, такая как цена, состав кухни, часы работы, время закрытия или дополнительные сведения, может быть изменена, поэтому не забудьте проверить последнюю информацию непосредственно в магазине.
Карта доступа
IS Бюллетень
Геоэкология
DOI.org/10.5281/zenodo.1196698
Ветошкина А., Чачков А., Тарасенко И., Соляник И. АЛЕНА ВЕТОШКИНА, младший научный сотрудник, e-mail: [email protected]
АЛЕКСАНДР ЧАЧКОВ, аспирант, e-mail: [email protected]
ИРИНА ТАРАСЕНКО, доктор геолого-минералогических наук,
заместитель директора по научной работе, e-mail: tarasenko_irina @ mail.ru
Дальневосточный геологический институт РАН
159, проспект 100-летия Владивосток, Россия, 6
ИЛЬЯ СОЛЯНИК, аспирант Инженерного факультета, e-mail: [email protected]
Дальневосточный федеральный университет
Россия, г. Владивосток, ул. Суханова, 8, 6
Реферат : В статье рассматривается современное состояние природной среды в районе выработанного карьера Пореченский (Октябрьский район, Приморье).Проведены ландшафтные исследования, опробование речных и карьерных вод, а также донных отложений. Установлено, что процессы, происходящие в результате взаимодействия воды с горными породами, сопровождаются увеличением концентрации растворенных веществ и изменением состава поверхностных вод. Однако наибольшее загрязнение вызывают сельскохозяйственные работы, проводимые на рассматриваемой территории. Показано, что разработка угля открытым способом привела к изменению географии местности и появлению ранее нехарактерных для местности форм: денудационной (разработка карьеров) и аккумулятивных (вскрышные отвалы).Загрязнения донных отложений не обнаружено. Делается вывод, что текущее состояние природной среды в районе выработанного карьера Пореченский удовлетворительное и территория пригодна для обитания диких животных, но необходимо принять меры по выравниванию откосов котлованов и горных отвалов.
Ключевые слова : выработанный карьер, поверхностные воды, загрязнение, ландшафт.
СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ- Веницианов Е.В., Винниченко В.Н., Гусева Т.V. et al. Экологический мониторинг: шаг за шагом. М., РЧТУ им. Д.И. Менделеевский университет, 2003, 252 с.
- Ветошкина А.В., Буянова Л.Г., Тарасенко И.А. Комплексное почвенно-растительное обследование как этап реабилитационных мероприятий. Материалы межрегиональной научно-практической. Конф. Регионы новой застройки: экологические проблемы, решения. В 2 кн., Кн. 1. Хабаровск, 2008, с. 26–30.
- Нормы качества воды рыбохозяйственных водоемов, в том числе ПДК вредных веществ в воде водных объектов рыбохозяйственного значения.Утверждено приказом Росрыболовства от 18.01.2010 N 20 (Зарегистрировано в Минюсте РФ 09.02.2010 N 16326). URL: http://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/2070984. — 02.02.2018г.
- Нормы и критерии оценки загрязнения донных отложений водных объектов Санкт-Петербурга. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Санкт-Петербурга 17.06.1996 и Комитетом охраны окружающей среды и природных ресурсов Санкт-Петербурга и Ленинградской области 22.07.1996. Санкт-Петербург, 13 стр.
- Перспективы освоения угольных месторождений Дальнего Востока. В 2 т., Т. 1. Горно-экологические условия: монография. изд. И.В. Садардинов. Владивосток, ДВГУ, 2004.348 с.
- Положение границы государственного заповедника. Утверждено Администрацией Приморского края от 13.10.2008 N 252-па (п. 4.2). URL: http: //docs.cntd.ru/document/-494214135/ — 02.02.2018.
- Санитарные правила и нормы СанПиН 2.1.5.980-00.2.1.5. Осушение населенных пунктов, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод. М .: Минздрав России, 2000, 13 с. URL: http://stop-dezavid.ru/wp-content/uploads/2016/10/-SanPiN-2-1-5-980-00.pdf — 02.03.2018.
- Тарасенко И.А., Зиньков А.В., Буянова Л.Г. Оценка текущего экологического состояния водоема в районе заброшенной шахты «Ильичевская» (Приморский край). Инженерные изыскания. 2011; 7: 60–67.
- Тарасенко И.А., Зиньков А.В. Оценка техногенного загрязнения бассейна подземных вод в районе заброшенной шахты (Липовецкое угольное месторождение, Приморский край).
