Гост 26670: ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов – ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов, ГОСТ от 25 декабря 1991 года №26670-91

Содержание

Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Издание официальное

Москва Станда ртинформ 2008

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы культивирования микроорганизмов

Food products.

Methods for cultivation of microorganisms

MKC 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется на нишевые продукты и устанавливает методы культивирования для выявления присутствия (отсутствия) или определения количества микроорганизмов соответствующих групп, семейств, родов или видов.

Методы основаны на посеве продукта, разведении навески продукта или осажденных на мембранном фильтре клеток микроорганизмов в питательные среды, с последующим культивированием посевов в условиях, благоприятных лая роста микроорганизмов.

Требования стандарта являются обязательными.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА И ПОДГОТОВКИ ПРОБ

Огбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Динара гура и питательные среды по нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вила микроорганизмов.

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1.    Степень разведения навески продукта

3.1.1    Степень разведения навески продукта для посева на плотные среды выбирают так. чтобы общее количество колоний, выросших на чашке Петри, колебалось в пределах 15—300; количество колоний специфических групп бактерий (например, колиформных) — 15—150; плесеней 5—50.

3.1.2    Степень разведения навески продукта для посева в жидкие среды выбирают так. чтобы хотя бы в одной пробирке наибольшего разведения отсутствовали микроорганизмы.

3.1.3.    Количество продукта, которое необходимо профильтровать для получения изолированных колоний на фильгре. должно быть указано в нормативно-технической документации на методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов микроорганизмов.

3.2.    Объем навески продукта или его разведения для посева

3.2.1. При посеве глубинным методом 1 см’ жидкою продукта или разведения навески

продукта смешивают с расплавленной питательной средой.

3.2.2    При посеве поверхностным методом 0.1 или 0.2 см3 жидкою продукта или разведения навески продукта вносят на поверхность плотной среды.

3.2.3.    Для выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов и определения их таксономических свойств в жидкие среды вносят до 50 г (см3) продукта; при определении количества микроорганизмов в жидкие среды вносят до 100 см’ жидкого продукта или разведения навески.

Издание официальное    Перепечатка    воспрещена

© Издательство стандартов. 1992 © Стандарт нформ, 2008

ГОСТ 26670-91 С. 2

4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

4.1.    Глуби н н ы й метод посева в плотные среды

4.1.1.    Жидкий продукт или разведение навески вносят парадтсльно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры (45 ± 1) *С питательной средой. Высота стоя питательной среды должна быть 4—5 мм.

4.1.2.    Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так. чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. Пос1е застывания среды чашки с посевами вверх дном помешают в термостат.

4.2.    Поверхностный метод посева на плотные среды

4.2.1.    Среду наливают в чашку Петри и посте застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48—50 *С или в ламинарном боксе 1—2 ч. или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.

4.2.2.    На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно равномерно растирают но поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.

4.2.3.    Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.

4.3.    Метод посева в жидкие среды

4.3.1.    В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведение навески.

4.3.2.    При определении наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое НВЧ микроорганизмов.

Самое низкое разведение и высеваемые объемы его инокулума выбирают в зависимости от предполагаемого количества микроорганизмов и чувствительности метода следующим образом: по 1 см’ из разведения 10“1 и высших разведений, если надо определить количество микроорганизмов. превышающее 3 клетки в 1.0 г (см

3) продукта:

по 10 см3 из разведения 10“’ или I см’ неразведеиного продукта и по 1 см’ из разведения 10-1 и более высокого разведения, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 10.0 г (см’) продукта:

по 10 и 1 см ‘ неразведенного продукта и ряда его разведений, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 100 см’ продукта.

4.3.3.    Все разведения и неразведенный продукт высевают параллельно в три пробирки с питательной средой. Инокулум объемом 1 см’ высевают в 10 см’ среды нормальной концентрации, инокулумы объемом 10 см’ — в 10 см’ среды двойной концентрации.

4.4. Метод мембранных фильтров

Метод мембранных фильтров применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов или продуктов, даюших растворы с высоким осмотическим давлением.

4.4.1.    Подготовка фильтров

4.4.1.1.    При работе с мембранными фильтрами следует соблюдать следующие условия: выбирают фильтры, размеры нор которых позволяют осадить на нем основное количество

микроорганизмов определенных видов или групп; для улавливания бактерий применяют фильтры со средним диаметром нор 0.3 мкм;

визуально контролируют отсутствие механических повреждений фильтров, и во избежание повреждений фильтры берут пинцетом, не имеющим рубчиков; фильтры хранят в сухом состоянии;

перед использованием фильтры освобождают от остатков растворителей, пузырьков воздуха и загрязнений кипячением по ГОСТ 18963 в дистиллированной воде;

для фильтрации жидкостей применяют аппарат Зейтца, прибор Гробара и другие установки: части установки для фильтрации, соприкасающиеся с фильтруемым раствором, стерилизуют или кипятят;

стерильный влажный фильтр осторожно помещают блестящей стороной вверх на подкладку из пористого материала или сетку фильтрующей аппаратуры.

Мембранные фильтры не применимы дш фильтрации суспензий или гомогенатов продуктов, загрязняющих при фильтрации норы фильтров.

4.4.2. Проведение фильтрации

4.4.2.1.    Для фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно

разводят диет нитрованной иди понтонной водой в соотношении, позволяющем легко профильтровать разведенные растворы.

Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этана. Для освобождения от взвешенных частиц его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор 4 мкм. а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях.

Посте осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной водой или пентонно-солевым раствором.

4.4.2.2. Фильтрацию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра. Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную среду фильтр накладывают нижней стороной гак. чтобы она полностью соприкасалась с поверхностью среды.

4.5. Посевы термостатируют в благоприятных для роста микроорганизмов условиях, указанных в нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующей фуппы. семейства, рода или вида микроорганизмов.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1.    Подсчет микроорганизмов на плотных средах

5.1.1.    В посевах на плотных питательных средах, полученных глубинным и поверхностным методами или методом мембранных фильтров:

для подсчета общего числа жизнеспособных микроорганизмов учитывают все выросшие колонии;

для подсчета количества микроорганизмов определенных таксономических групп на селективных средах учитывают колонии, характерные по морфологии для выявляемой группы;

для подсчета количества определенных групп или видов микроорганизмов на селективно-диагностических или диагностических средах учитывают колонии характерной морфологии, показавшие характерную цветную реакцию с присутствующим в среде индикатором.

Колонии подсчитывают невооруженным глазом или с помощью линзы с шестикратным увеличением, или с помощью специально предназначенного для подсчета колоний прибор;!.

5.2.    Выявление и подсчет микроорганизмов в жидких средах

5.2.1.    Живые микроорганизмы в жидких средах выявляют но помутнению среды, появлению осадка, пленки, газообразованию или по наличию роста микроорганизмов в пересевах на плотных питательных средах.

Микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп выявляют по изменению цвета индикаторов, образованию газа из определенных веществ и по другим признакам, специфическим для метаболизма выявляемой фуппы или видов микроорганизмов.

5.2.2.    Для пересева на плотные питательные среды в жидкую питательную среду пофужают стерильную стеклянную палочку или бактериологическую петлю, или иглу и наносят взятую кашпо культуральной жидкости на предварительно подсушенную по и. 4.2.1 плотную питательную среду и сразу же равномерно растирают по поверхности шпателем.

Для получения изолированных колоний внесенную кайл к» распределяют по поверхности среды петлей в виде штриха, как показано на чертеже.

5.3.    Подтверждение характерных колоний

5.3.1.    При необходимости подтверждения принадлежности характерных колоний к выявляемым микроорганизмам отбирают не менее 5 отдельных колоний для получения чистой культуры.

5.3.2.    Каждую выбранную колонию микроорганизмов пересевают на неселективную питательную среду, для чего кончиком стерильной петли (диаметр до 2 мм) отбирают небольшое количество верхней части колонии микроорганизмов.

На питательную среду высеивают непосредственно отобранные микроорганизмы или из них готовят сначала суспензию, которую потом высевают петлей на поверхность среды в чашке Петри или на скошенную поверхность среды в пробирке.

Для приготовления суспензии микроорганизмы суспензируют в 1—2 см’ пептонно-солевого раствора.

5.3.3.    Посевы инкубируют в условиях, указанных в нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов.

После инкубирования отмечают колонии одного типа. Затем из каждого пересев;! отбирают по

ГОСТ 26670-91 С. 4

ОДНОЙ КОЛОНИИ каждого типа ПО нормативно-технической доку-    Способ посей штрихом

ментации. устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

5.3.4.    Если при подтверждении характерных колоний обнаружено. что нс менее 80 % колоний принадлежат к выявляемым микроорганизмам (т. е. не менее 4 из 5 колоний), то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашках Петри, принадлежат к выявляемым микроорганизмам.

В остальных случаях количество выявляемых микроорганизмов определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых дзя подтверждения.

5.3.5.    Если при подтверждении колоний, полученных при пересеве с жидкой питательной среды но п. 5.2.2. хотя бы в 1 из 5 колоний подтверждено наличие выявляемых микроорганизмов, то считают, что в посеве на жидкой среде присутствуют выявляемые микроорганизмы и такие пробирки являются положительными.

5.4.    Способы выражения результатов определения количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри

5.4.1.    Колонии микроорганизмов на плотных средах подсчитывают в посевах того разведения, количество колоний в котором соответствует требованиям п. 3.1.1. По результатам подсчета вычисляют среднеарифметическое значение числа колоний из всех посевов одного разведения.

Если число колоний соответствует требованиям п 3.1.1 в посевах нс одного, а двух следующих друг за другом разведениях, то вычисляют среднеарифметическое количество микроорганизмов в каждом из этих разведений отдельно.

Если полученные результаты отличаются друг от друга более чем в 2 раза, то оценку проводят по результатам посева наибольшего разведения.

5.4.2.    Если в одном из параллельных посевов одного разведения число колоний не соответствует требованиям п. 3.1.1, эти результаты используют для подсчета среднеарифметического значения и при соответствии полученного значения п. 3.1.1 его используют для латьнейших расчетов.

5.4.3 Если число колоний в параллельных посевах ниже уровней, указанных в п. 3.1.1, то допускается определять суммарное число колоний, если результат соответствует требованиям п. 3.1.1. то его используют дтя дальнейших расчетов. При этом количество инокулята т будет равно суммарному количеству, внесенному на параллельные посевы.

5.4.4.    Полученные среднеарифметические значения округляют до числа, кратного 5. если среднее арифметическое число микроорганизмов менее 100; до числа, кратного 20, сети среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и оканчиваются цифрой 5; до числа, кратного 10, если среднеарифметическое число микроорганизмов более 100 и не оканчиваются цифрой 5.

5.4.5.    Количество микроорганизмов в 1.0 г (см’) продукта А/ вычисляют по формуле

где N— степень разведения навески;

т — количество инокулята, внесенное на чашку Петри, см3;

С — округленное среднеарифметическое значение числа колоний.

Результат вычисления выражают числом от 1.0 до 9.9 х 10я.

Для пересчета количества микроорганизмов на 1.0 г (см3) продукта при анализе по методу мембранных фильтров число колоний, выросших на фильтре, умножают на степень разведения и делят на массу (объем) профильтрованной жидкости.

Допускается при использовании метода мембранных фильтров выражать количество микроорганизмов на 10 см3 (10 г) или на 10 см2 поверхности продукта и более.

5.4.6. Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения или число подтвержденных колоний меньше числа, указанных в п. 3.1.1, результаты выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1.0 г (см3) продукта меньше 15 или 5. умножен-JV

них на —.

т

где N и т по п. 5.4.5.

Допускается для приблизительного подсчета учитывать чашки Петри, число колоний на которых меньше указанных в и. 3.1.1.

Доверительные интервалы для случаев с числом колоний меньше 15 указаны в табл. 2.

5.4.7.    Если рост микроорганизмов на чашках Петри отсутствует или при подтверждении микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп, семейств, родов или видов не обнаружены, то результат выражают следующим образом:

N

количество определяемых микроорганизмов в 1.0 г (см’) продукта меньше 1. умноженной на —.

т

5.4.8.    Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения превышает количества, указанные в п. 3.1.1. то результат выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1.0 г (см3) продукта больше 150 или 300. или 50. N

умноженных на —.

т

5.5.    Способы выражения результатов выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов.

Результаты выявления микроорганизмов в определенной навеске (объеме или площади поверхности) выражают с указанием величины навески следующим образом:

«микроорганизмы обнаружены» или «микроорганизмы не обнаружены».

5.6.    О п р с д е л с н и е наиболее вероятного числа ( Н В Ч ) микроорганизмов в 1.0 г (см3) продукта

5.6.1.    НВЧ микроорганизмов определяют, исходя из количества положительных пробирок с посевами но табл. I.

5.6.2.    Дли определения выбирают три самых высоких последовательных разведения, в первом из которых все три пробирки являются положительными, а в последнем или последующем неоцениваемом разбавлении три пробирки отрицательные (например. 3. 2. 0 или 3. 2. 1. 0).

5.6.3.    Если после разведения, в котором все три пробирки были отрицательными, одна из пробирок большею (т. е. следующею за ним) разведения окажется положительной (например. 3. 2. 0. 1). то для определения НВЧ учитывают три наивысшие разведения, начиная с того, в котором количество положительных пробирок было меньше трех (т. е. 2. 0. 1).

5.6.4.    Если после наивысшею разведения с тремя положительными пробирками было посеяно лишь одно большее разведение, в котором оказались положительными одна или две пробирки, то НВЧ микроорганизмов записывают как «более чем*, так как в более высоких разведениях некоторые пробирки могли бы оказаться положительными. Например, если при посеве продукта чисто положительных пробирок соответствовало трехчлену 3. 3. I и 3. 3. 2. то согласно табл. 1 НВЧ будет более 460 или более 1100.

5.6.5.    Если ни в одном из разведений нс было трех положительных пробирок, то для определения НВЧ учитывают три последовательных разведения (например. 2. 2. 1 или 2. 1. 0).

5.6.6.    Если все пробирки посеянных разведений окажутся отрицательными, т. е. 0. 0. 0. то НВЧ микроорганизмов ниже числа, выявляемою посеянными разведениями (например, ниже чем 3 в 10.0 г) и наоборот, если все пробирки посеянных разведений окажутся положительными, т. е. 3. 3. 3, то НВЧ микроорганизмов будет выше его максимального значения, определенною посеянными разведениями (например, выше чем 1100 в 1.0 г).

При необходимости определения конечного числа микроорганизмов исследование повторяют.

5.6.7.    Если три десятикратных разведения были более низкими или более высокими но сравнению с приведенными в табл. 1 разведениями, то НВЧ микроорганизмов в пробе будет на столько разрядов ниже или выше, на сколько разрядов ниже или выше разведения, которые применялись для ею подсчета, например. 10 см3 основного разведения или 1 см3 неразведенной пробы представляют собой разведение на один разряд ниже и 10 см3 неразведенной пробы на два разряда ниже.

Например, при получении комбинации 3, 2. 1 НВЧ составляет 150 микроорганизмов в 1.0 г (см3) в случае, если инокулированы по 1 см3 разведения 10“1, 10“2. 10~3. Если инокулированы разведения I0″2. К)-3. 10~4. то найденное НВЧ равно 150 х 10 = 1500 микроорганизмов в 1.0 г (см3). Если инокулировано по 10 и 1 см’ неразведенного продукта и I см’ разведения 10_|, то НВЧ равно 150 : 100 = 1.5 в 1.0 г (см3) или 15 микроорганизмов в 10 г (см3) продукта.

5.6.8.    Из значений НВЧ учитывают те. которые отвечают наиболее вероятным комбинациям трехзначною числа первой категории. Если НВЧ. соответствующее комбинации трехзначного числа первой категории, не получено, то его определяют комбинациями трехзначного числа, соответствующего второй категории.

5.6.9.    Окончательный результат определения НВЧ выражают по и. 5.4.5.

Расчет наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганитмов

Количество положительных пробирок ДЛЯ разведений

НВЧ

Катеюрия оценки НВЧ для одновременно проанализированных проб в количестве

10 1

10 —г

10-’

1

2

3

5

10

0

0

0

< 3

0

0

1

3

3

2

2

2

1

0

1

0

3

2

1

1

1

1

0

1

1

6

0

3

3

3

3

0

2

0

6

3

2

2

2

1

0

3

0

9

0

0

0

0

3

1

0

0

4

1

1

1

1

I

1

0

1

7

2

1

1

1

1

1

0

2

11

0

0

0

3

3

1

1

0

7

1

1

1

1

1

1

1

1

И

3

3

2

2

2

1

2

0

II

2

2

1

1

1

1

2

1

15

3

3

3

3

2

1

3

0

16

3

3

3

3

2

2

0

0

9

1

I

1

1

1

2

0

1

14

2

1

1

1

1

2

0

2

20

0

3

3

3

3

2

1

0

15

1

1

1

1

1

2

1

1

20

2

2

1

1

1

2

1

2

27

0

3

3

3

3

2

2

0

21

1

1

1

1

1

2

2

1

28

3

2

2

2

1

2

2

2

35

0

0

0

0

3

2

3

0

29

3

2

2

2

1

2

3

1

36

0

3

3

3

3

3

0

0

23

1

1

1

1

1

3

0

1

38

1

1

1

1

1

3

п

2

64

3

3

2

2

2

3

1

0

43

1

1

1

1

1

3

1

1

75

1

1

1

1

1

3

1

2

120

3

2

2

2

1

3

1

3

160

0

0

0

3

3

3

2

0

93

1

1

1

1

1

3

2

1

150

1

1

1

1

1

3

2

2

210

2

1

1

1

1

3

2

3

290

3

3

3

2

2

3

3

0

240

1

1

1

1

1

3

3

1

460

1

1

1

1

1

3

3

2

1100

1

1

1

1

1

3

3

3

> 1100

Примечай и я:


Действительное число микроорганизмов в 1 г (см*) с вероятностью

95 *

99 %

от

до

от

до

0.0

9.4

0.0

14.0

0.1

9.5

0.0

14.0

0.1

10.0

0.0

16.0

1.2

17.0

0.5

25.0

1.2

17.0

0.5

25.0

3.5

35.0

1.8

46.0

0.2

17.0

0.1

25.0

1.2

17.0

0.5

25.0

4.0

35.0

2.0

46.0

1.3

20.0

0.6

27.0

4.0

35,0

2.0

46.0

4.0

35.0

2.0

46.0

5.0

38.0

2.0

52.0

5.0

38.0

2.0

52.0

1.5

35.0

0.7

46.0

4.0

35.0

2.0

46.0

5.0

38.0

2.0

52.0

4.0

38.0

2.0

52.0

5.0

38.0

2.0

52.0

9.0

94.0

5.0

142.0

5.0

40.0

2.0

56.0

9.0

94.0

5.0

142.0

9.0

94.0

5.0

142.0

9.0

94.0

5.0

142.0

9.0

94.0

5.0

142.0

5.0

194.0

3.0

142.0

9.0

104.0

5.0

157.0

16.0

181.0

10.0

250.0

9.0

181.0

5.0

250.0

17.0

199.0

И.О

270.0

30.0

360.0

20.0

440.0

30.0

380.0

20.0

520.0

18.0

360.0

12.0

430.0

30.0

380.0

20.0

520.0

30.0

400.0

20.0

560.0

90,0

990,0

50.0

1520.0

40.0

990.0

30.0

1520.0

90.0

1960.0

50.0

2830.0

200.0

4000.0

100.0

5700.0

высевают но 1 см’ из 10

10 J

5 разведений, т. с. 0.1. 0.01. 0.001 г (ем*) продукта.

2. Категория 1 — наиболее часто встречаемые комбинации положительных пробирок, которые могут быть получены в 95 % случаев; рассчитанное НВЧ отвечает действительному числу определяемых в продукте микроорганизмов в пределах точности метода;

категория 2 — менее вероятные комбинации положительных пробирок, встречаемые в 4 % случаев; рассчитанное НВЧ может отличаться от действительного разброса, превышающего данную точность метода.

но приемлемого в практике;

категории 3 или 0 — неприемлемые комбинации положительных пробирок, вероятность получения которых для нормальных продуктов равна нулю для категории 0. либо мало вероятна для категории 3.

Эти категории дают часто результаты, отличающиеся от действительного числа в разбросе, высоко превышающем точность метола, и поэтому для расчета НВЧ нс приемлемы.

С увеличением числа анализируемых проб от одной и той же партии продукта точность НВЧ повышается на одну, а иногда и на две категории.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Справочное

Таблица 2

Доверительные пределы для числа колоний менее 15

Среднеарифметическое ЧИСЛО КОЛОНИЙ

Довсртсльные пределы для вероятности 95 %

Среднеарифметическое число колоний

Доверительные пределы для вероятности 95 %

нижний

верхний

нижний

верхний

1

1

2

8

3

13

2

1

4

9

4

14

3

1

5

10

4

16

4

1

6

11

5

18

5

2

9

12

6

19

6

2

10

13

7

20

7

2

12

14

7

21

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овошесушилыюй промышленности (В1Н1ИКОН)

Техническим комитетом по стандартизации 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 25.12.91 № 2117

3.    Настоящий стандарт соответствует ИСО 7218—85 в части методов посева в твердые и жидкие питательные среды, методов выделения чистой культуры и обработки результатов

4.    Взамен ГОСТ 26670-85

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2008 г.

Редактор Л. В. Каретникова Технический редактор Л.А. Гусева Корректор М.В. Кучная Компьютерная нерегка Л.А. Круговой

Подписано в печать 26.02.2008. Формат 60×84К*. Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. неч. л. 0.93. Уч.-им. л. 0.87. Тираж 88 экз. Зак. 177.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ*. 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. www.gostinfo.ruinfotTgostinlb.ni Набрано во ФГУП «СТАНДАРТННФОРМ» на ПЭВМ Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТННФОРМ» — тип. «Московский печатник». 105062 Москва. Лялин пер.. 6.

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

Текст ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов



ГОСТ 26670-91

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2008

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

ГОСТ 26670-91

МКС 07.100.30 ОКСТУ 9109

Методы культивирования микроорганизмов

Food products.

Methods for cultivation of microorganisms

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы культивирования для выявления присутствия (отсутствия) или определения количества микроорганизмов соответствующих групп, семейств, родов или видов.

Методы основаны на посеве продукта, разведении навески продукта или осажденных на мембранном фильтре клеток микроорганизмов в питательные среды, с последующим культивированием посевов в условиях, благоприятных для роста микроорганизмов.

Требования стандарта являются обязательными.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА И ПОДГОТОВКИ ПРОБ

Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Аппаратура и питательные среды по нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1.    Степень разведения навески продукта

3.1.1    Степень разведения навески продукта для посева на плотные среды выбирают так, чтобы общее количество колоний, выросших на чашке Петри, колебалось в пределах 15—300; количество колоний специфических групп бактерий (например, колиформных) — 15—150; плесеней 5—50.

3.1.2    Степень разведения навески продукта для посева в жидкие среды выбирают так, чтобы хотя бы в одной пробирке наибольшего разведения отсутствовали микроорганизмы.

3.1.3.    Количество продукта, которое необходимо профильтровать для получения изолированных колоний на фильтре, должно быть указано в нормативно-технической документации на методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов микроорганизмов.

3.2.    Объем навески продукта или его разведения для посева

3.2.1. При посеве глубинным методом 1 см3 жидкого продукта или разведения навески

продукта смешивают с расплавленной питательной средой.

3.2.2    При посеве поверхностным методом 0,1 или 0,2 см3 жидкого продукта или разведения навески продукта вносят на поверхность плотной среды.

3.2.3.    Для выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов и определения их таксономических свойств в жидкие среды вносят до 50 г (см3) продукта; при определении количества микроорганизмов в жидкие среды вносят до 100 см3 жидкого продукта или разведения навески.

Издание официальное ★

Перепечатка воспрещена

© Издательство стандартов, 1992 © Стандартинформ, 2008

4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

4.1.    Глубинный метод посева в плотные среды

4.1.1.    Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры (45 + 1) °С питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4—5 мм.

4.1.2.    Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

4.2.    Поверхностный метод посева на плотные среды

4.2.1.    Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48—50 °С или в ламинарном боксе 1—2 ч, или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.

4.2.2.    На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.

4.2.3.    Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.

4.3.    Метод посева в жидкие среды

4.3.1.    В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведение навески.

4.3.2.    При определении наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое НВЧ микроорганизмов.

Самое низкое разведение и высеваемые объемы его инокулума выбирают в зависимости от предполагаемого количества микроорганизмов и чувствительности метода следующим образом:

по 1 см3 из разведения 10-1 и высших разведений, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 1,0 г (см3) продукта;

по 10 см3 из разведения 10-1 или 1 см3 неразведенного продукта и по 1 см3 из разведения 10-1 и более высокого разведения, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 10,0 г (см3) продукта;

по 10 и 1 см3 неразведенного продукта и ряда его разведений, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 100 см3 продукта.

4.3.3.    Все разведения и неразведенный продукт высевают параллельно в три пробирки с питательной средой. Инокулум объемом 1 см3 высевают в 10 см3 среды нормальной концентрации, инокулумы объемом 10 см3 — в 10 см3 среды двойной концентрации.

4.4. Метод мембранных фильтров

Метод мембранных фильтров применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим давлением.

4.4.1.    Подготовка фильтров

4.4.1.1.    При работе с мембранными фильтрами следует соблюдать следующие условия: выбирают фильтры, размеры пор которых позволяют осадить на нем основное количество

микроорганизмов определенных видов или групп; для улавливания бактерий применяют фильтры со средним диаметром пор 0,3 мкм;

визуально контролируют отсутствие механических повреждений фильтров, и во избежание повреждений фильтры берут пинцетом, не имеющим рубчиков; фильтры хранят в сухом состоянии;

перед использованием фильтры освобождают от остатков растворителей, пузырьков воздуха и загрязнений кипячением по ГОСТ 18963 в дистиллированной воде;

для фильтрации жидкостей применяют аппарат Зейтца, прибор Гробара и другие установки; части установки для фильтрации, соприкасающиеся с фильтруемым раствором, стерилизуют или кипятят;

стерильный влажный фильтр осторожно помещают блестящей стороной вверх на подкладку из пористого материала или сетку фильтрующей аппаратуры.

Мембранные фильтры не применимы для фильтрации суспензий или гомогенатов продуктов, загрязняющих при фильтрации поры фильтров.

4.4.2. Проведение фильтрации

4.4.2.1.    Для фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно

разводят дистиллированной или пептонной водой в соотношении, позволяющем легко профильтровать разведенные растворы.

Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этапа. Для освобождения от взвешенных частиц его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор 4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях.

После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной водой или пептонно-солевым раствором.

4.4.2.2. Фильтрацию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра. Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную среду фильтр накладывают нижней стороной так, чтобы она полностью соприкасалась с поверхностью среды.

4.5. Посевы термостатируют в благоприятных для роста микроорганизмов условиях, указанных в нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1.    Подсчет микроорганизмов на плотных средах

5.1.1.    В посевах на плотных питательных средах, полученных глубинным и поверхностным методами или методом мембранных фильтров:

для подсчета общего числа жизнеспособных микроорганизмов учитывают все выросшие колонии;

для подсчета количества микроорганизмов определенных таксономических групп на селективных средах учитывают колонии, характерные по морфологии для выявляемой группы;

для подсчета количества определенных групп или видов микроорганизмов на селективно-диагностических или диагностических средах учитывают колонии характерной морфологии, показавшие характерную цветную реакцию с присутствующим в среде индикатором.

Колонии подсчитывают невооруженным глазом или с помощью линзы с шестикратным увеличением, или с помощью специально предназначенного для подсчета колоний прибора.

5.2.    Выявление и подсчет микроорганизмов в жидких средах

5.2.1.    Живые микроорганизмы в жидких средах выявляют по помутнению среды, появлению осадка, пленки, газообразованию или по наличию роста микроорганизмов в пересевах на плотных питательных средах.

Микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп выявляют по изменению цвета индикаторов, образованию газа из определенных веществ и по другим признакам, специфическим для метаболизма выявляемой группы или видов микроорганизмов.

5.2.2.    Для пересева на плотные питательные среды в жидкую питательную среду погружают стерильную стеклянную палочку или бактериологическую петлю, или иглу и наносят взятую каплю культуральной жидкости на предварительно подсушенную по и. 4.2.1 плотную питательную среду и сразу же равномерно растирают по поверхности шпателем.

Для получения изолированных колоний внесенную каплю распределяют по поверхности среды петлей в виде штриха, как показано на чертеже.

5.3.    Подтверждение характерных колоний

5.3.1.    При необходимости подтверждения принадлежности характерных колоний к выявляемым микроорганизмам отбирают не менее 5 отдельных колоний для получения чистой культуры.

5.3.2.    Каждую выбранную колонию микроорганизмов пересевают на неселективную питательную среду, для чего кончиком стерильной петли (диаметр до 2 мм) отбирают небольшое количество верхней части колонии микроорганизмов.

На питательную среду высеивают непосредственно отобранные микроорганизмы или из них готовят сначала суспензию, которую потом высевают петлей на поверхность среды в чашке Петри или на скошенную поверхность среды в пробирке.

Для приготовления суспензии микроорганизмы суспензируют в 1—2 см3 пептонно-солевого раствора.

5.3.3.    Посевы инкубируют в условиях, указанных в нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов.

После инкубирования отмечают колонии одного типа. Затем из каждого пересева отбирают по

одной колонии каждого типа по нормативно-технической доку-    Способ посева штрихом

ментации, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

5.3.4.    Если при подтверждении характерных колоний обнаружено, что не менее 80 % колоний принадлежат к выявляемым микроорганизмам (т. е. не менее 4 из 5 колоний), то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашках Петри, принадлежат к выявляемым микроорганизмам.

В остальных случаях количество выявляемых микроорганизмов определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

5.3.5.    Если при подтверждении колоний, полученных при пересеве с жидкой питательной среды по и. 5.2.2, хотя бы в 1 из 5 колоний подтверждено наличие выявляемых микроорганизмов, то считают, что в посеве на жидкой среде присутствуют выявляемые микроорганизмы и такие пробирки являются положительными.

5.4.    Способы выражения результатов определения количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри

5.4.1.    Колонии микроорганизмов на плотных средах подсчитывают в посевах того разведения, количество колоний в котором соответствует требованиям и. 3.1.1. По результатам подсчета вычисляют среднеарифметическое значение числа колоний из всех посевов одного разведения.

Если число колоний соответствует требованиям и 3.1.1 в посевах не одного, а двух следующих друг за другом разведениях, то вычисляют среднеарифметическое количество микроорганизмов в каждом из этих разведений отдельно.

Если полученные результаты отличаются друг от друга более чем в 2 раза, то оценку проводят по результатам посева наибольшего разведения.

5.4.2.    Если в одном из параллельных посевов одного разведения число колоний не соответствует требованиям и. 3.1.1, эти результаты используют для подсчета среднеарифметического значения и при соответствии полученного значения и. 3.1.1 его используют для дальнейших расчетов.

5.4.3 Если число колоний в параллельных посевах ниже уровней, указанных в п. 3.1.1, то допускается определять суммарное число колоний, если результат соответствует требованиям и. 3.1.1, то его используют для дальнейших расчетов. При этом количество инокулята т будет равно суммарному количеству, внесенному на параллельные посевы.

5.4.4.    Полученные среднеарифметические значения округляют до числа, кратного 5, если среднее арифметическое число микроорганизмов менее 100; до числа, кратного 20, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и оканчиваются цифрой 5; до числа, кратного 10, если среднеарифметическое число микроорганизмов более 100 и не оканчиваются цифрой 5.

5.4.5.    Количество микроорганизмов в 1,0 г (см3) продукта М вычисляют по формуле

м=- — с,

т

где TV — степень разведения навески;

т — количество инокулята, внесенное на чашку Петри, см3;

С — округленное среднеарифметическое значение числа колоний.

Результат вычисления выражают числом от 1,0 до 9,9 х 10л.

Для пересчета количества микроорганизмов на 1,0 г (см3) продукта при анализе по методу мембранных фильтров число колоний, выросших на фильтре, умножают на степень разведения и делят на массу (объем) профильтрованной жидкости.

Допускается при использовании метода мембранных фильтров выражать количество микроорганизмов на 10 см3 (10 г) или на 10 см2 поверхности продукта и более.

5.4.6. Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения или число подтвержденных колоний меньше числа, указанных в п. 3.1.1, результаты выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см3) продукта меньше 15 или 5, умножен-TV

ных на —, т

где TV и т по п. 5.4.5.

Допускается для приблизительного подсчета учитывать чашки Петри, число колоний на которых меньше указанных в и. 3.1.1.

Доверительные интервалы для случаев с числом колоний меньше 15 указаны в табл. 2.

5.4.7.    Если рост микроорганизмов на чашках Петри отсутствует или при подтверждении микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп, семейств, родов или видов не обнаружены, то результат выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см3) продукта меньше 1, умноженной на

5.4.8.    Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения превышает количества, указанные в п. 3.1.1, то результат выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см3) продукта больше 150 или 300, или 50,

N

умноженных на —.

т

5.5.    Способы выражения результатов выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов.

Результаты выявления микроорганизмов в определенной навеске (объеме или площади поверхности) выражают с указанием величины навески следующим образом:

«микроорганизмы обнаружены» или «микроорганизмы не обнаружены».

5.6.    Определение наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов в 1,0 г (см3) п р о д у к т а

5.6.1.    НВЧ микроорганизмов определяют, исходя из количества положительных пробирок с посевами по табл. 1.

5.6.2.    Для определения выбирают три самых высоких последовательных разведения, в первом из которых все три пробирки являются положительными, а в последнем или последующем неоцениваемом разбавлении три пробирки отрицательные (например, 3, 2, 0 или 3, 2, 1, 0).

5.6.3.    Если после разведения, в котором все три пробирки были отрицательными, одна из пробирок большего (т. е. следующего за ним) разведения окажется положительной (например, 3, 2, 0, 1), то для определения НВЧ учитывают три наивысшие разведения, начиная с того, в котором количество положительных пробирок было меньше трех (т. е. 2, 0, 1).

5.6.4.    Если после наивысшего разведения с тремя положительными пробирками было посеяно лишь одно большее разведение, в котором оказались положительными одна или две пробирки, то НВЧ микроорганизмов записывают как «более чем», так как в более высоких разведениях некоторые пробирки могли бы оказаться положительными. Например, если при посеве продукта число положительных пробирок соответствовало трехчлену 3, 3, 1 и 3, 3, 2, то согласно табл. 1 НВЧ будет более 460 или более 1100.

5.6.5.    Если ни в одном из разведений не было трех положительных пробирок, то для определения НВЧ учитывают три последовательных разведения (например, 2, 2, 1 или 2, 1, 0).

5.6.6.    Если все пробирки посеянных разведений окажутся отрицательными, т. е. 0, 0, 0, то НВЧ микроорганизмов ниже числа, выявляемого посеянными разведениями (например, ниже чем 3 в 10,0 г) и наоборот, если все пробирки посеянных разведений окажутся положительными, т. е. 3, 3, 3, то НВЧ микроорганизмов будет выше его максимального значения, определенного посеянными разведениями (например, выше чем 1100 в 1,0 г).

При необходимости определения конечного числа микроорганизмов исследование повторяют.

5.6.7.    Если три десятикратных разведения были более низкими или более высокими по сравнению с приведенными в табл. 1 разведениями, то НВЧ микроорганизмов в пробе будет на столько разрядов ниже или выше, на сколько разрядов ниже или выше разведения, которые применялись для его подсчета, например, 10 см3 основного разведения или 1 см3 неразведенной пробы представляют собой разведение на один разряд ниже и 10 см3 неразведенной пробы на два разряда ниже.

Например, при получении комбинации 3, 2, 1 НВЧ составляет 150 микроорганизмов в 1,0 г (см3) в случае, если инокулированы по 1 см3 разведения 10-1, 10-2, 10_3. Если инокулированы разведения 10-2, 10_3, 10-4, то найденное НВЧ равно 150 х 10 = 1500 микроорганизмов в 1,0 г (см3). Если инокулировано по 10 и 1 см3 неразведенного продукта и 1 см3 разведения 10-1, то НВЧ равно 150 : 100 = 1,5 в 1,0 г (см3) или 15 микроорганизмов в 10 г (см3) продукта.

5.6.8.    Из значений НВЧ учитывают те, которые отвечают наиболее вероятным комбинациям трехзначного числа первой категории. Если НВЧ, соответствующее комбинации трехзначного числа первой категории, не получено, то его определяют комбинациями трехзначного числа, соответствующего второй категории.

5.6.9.    Окончательный результат определения НВЧ выражают по п. 5.4.5.

Расчет наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов

Таблица 1

Количество

положительных пробирок для разведений

НВЧ

Категория оценки НВЧ для одновременно проанализированных проб в количестве

КГ1

кг2

ю-3

1

2

3

5

10

0

0

0

< 3

0

0

1

3

3

2

2

2

1

0

1

0

3

2

1

1

1

1

0

1

1

6

0

3

3

3

3

0

2

0

6

3

2

2

2

1

0

3

0

9

0

0

0

0

3

1

0

0

4

1

1

1

1

1

1

0

1

7

2

1

1

1

1

1

0

2

11

0

0

0

3

3

1

1

0

7

1

1

1

1

1

1

1

1

11

3

3

2

2

2

1

2

0

11

2

2

1

1

1

1

2

1

15

3

3

3

3

2

1

3

0

16

3

3

3

3

2

2

0

0

9

1

1

1

1

1

2

0

1

14

2

1

1

1

1

2

0

2

20

0

3

3

3

3

2

1

0

15

1

1

1

1

1

2

1

1

20

2

2

1

1

1

2

1

2

27

0

3

3

3

3

2

2

0

21

1

1

1

1

1

2

2

1

28

3

2

2

2

1

2

2

2

35

0

0

0

0

3

2

3

0

29

3

2

2

2

1

2

3

1

36

0

3

3

3

3

3

0

0

23

1

1

1

1

1

3

0

1

38

1

1

1

1

1

3

0

2

64

3

3

2

2

2

3

1

0

43

1

1

1

1

1

3

1

1

75

1

1

1

1

1

3

1

2

120

3

2

2

2

1

3

1

3

160

0

0

0

3

3

3

2

0

93

1

1

1

1

1

3

2

1

150

1

1

1

1

1

3

2

2

210

2

1

1

1

1

3

2

3

290

3

3

3

2

2

3

3

0

240

1

1

1

1

1

3

3

1

460

1

1

1

1

1

3

3

2

1100

1

1

1

1

1

3

3

3

> 1100

Действительное число микроорганизмов в 1 г (см3) с вероятностью

95 %

ОТ

до

ОТ

0,0

9,4

0,0

0,1

9,5

0,0

0,1

10,0

0,0

1,2

17,0

0,5

1,2

17,0

0,5

3,5

35,0

1,8

0,2

17,0

0,1

1,2

17,0

0,5

4,0

35,0

2,0

1,3

20,0

0,6

4,0

35,0

2,0

4,0

35,0

2,0

5,0

38,0

2,0

5,0

38,0

2,0

1,5

35,0

0,7

4,0

35,0

2,0

5,0

38,0

2,0

4,0

38,0

2,0

5,0

38,0

2,0

9,0

94,0

5,0

5,0

40,0

2,0

9,0

94,0

5,0

9,0

94,0

5,0

9,0

94,0

5,0

9,0

94,0

5,0

5,0

194,0

3,0

9,0

104,0

5,0

16,0

181,0

10,0

9,0

181,0

5,0

17,0

199,0

11,0

30,0

360,0

20,0

30,0

380,0

20,0

18,0

360,0

12,0

30,0

380,0

20,0

30,0

400,0

20,0

90,0

990,0

50,0

40,0

990,0

30,0

90,0

1960,0

50,0

200,0

4000,0

100,0

99 %

до

14.0

14.0

16.0

25.0

25.0

46.0

25.0

25.0

46.0

27.0

46.0

46.0

52.0

52.0

46.0

46.0

52.0

52.0

52.0

142.0

56.0

142.0

142.0

142.0

142.0

142.0

157.0

250.0

250.0

270.0

440.0

520.0

430.0

520.0

560.0

1520.0

1520.0

2830.0

5700.0

Примечания:

1.    Приведенные в табл. 1 НВЧ соответствуют случаям, когда в среды высевают по 1 см3 из 10“3, 10 2, 10~3 разведений, т. е. 0,1, 0,01, 0,001 г (см3) продукта.

2.    Категория 1 — наиболее часто встречаемые комбинации положительных пробирок, которые могут быть получены в 95 % случаев; рассчитанное НВЧ отвечает действительному числу определяемых в продукте микроорганизмов в пределах точности метода;

категория 2 — менее вероятные комбинации положительных пробирок, встречаемые в 4 % случаев; рассчитанное НВЧ может отличаться от действительного разброса, превышающего данную точность метода, но приемлемого в практике;

категории 3 или 0 — неприемлемые комбинации положительных пробирок, вероятность получения которых для нормальных продуктов равна нулю для категории 0, либо мало вероятна для категории 3.

Эти категории дают часто результаты, отличающиеся от действительного числа в разбросе, высоко превышающем точность метода, и поэтому для расчета НВЧ не приемлемы.

С увеличением числа анализируемых проб от одной и той же партии продукта точность НВЧ повышается на одну, а иногда и на две категории.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Справочное

Таблица 2

Доверительные пределы для числа колоний менее 15

Среднеарифметическое ЧИСЛО колоний

Доверительные пределы для вероятности 95 %

Среднеарифметическое ЧИСЛО колоний

Доверительные пределы для вероятности 95 %

НИЖНИЙ

верхний

НИЖНИЙ

верхний

1

1

2

8

3

13

2

1

4

9

4

14

3

1

5

10

4

16

4

1

6

11

5

18

5

2

9

12

6

19

6

2

10

13

7

20

7

2

12

14

7

21

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

Техническим комитетом по стандартизации 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 25.12.91 № 2117

3.    Настоящий стандарт соответствует ИСО 7218—85 в части методов посева в твердые и жидкие питательные среды, методов выделения чистой культуры и обработки результатов

4.    Взамен ГОСТ 26670-85

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта

ГОСТ 18963-73

4.4.1.1

ГОСТ 26668-85

1

ГОСТ 26669-85

1

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2008 г.

Редактор Л. В. Коретникова Технический редактор Л.А. Гусева Корректор М.В. Бучная Компьютерная верстка Л.А. Круговой

Подписано в печать 26.02.2008. Формат 60×841/8. Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,87. Тираж 88 экз. Зак. 177.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4.     

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.

ГОСТ 26670-91 | Стройсоветы

Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

Заменяет
Страница 1

Страница 1

Страница 2

Страница 2

Страница 3

Страница 3

Страница 4

Страница 4

Страница 5

Страница 5

Страница 6

Страница 6

Страница 7

Страница 7

Страница 8

Страница 8

ГОСТ 26670-91

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Издание официальное

УДК 663/.664 : 543.9 : 006.354    Группа    1109

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы культивирования микроорганизмов    ГОСТ

26670-91

f-ood products.

Methods for cultivation of microorganisms

MKC 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется па пищевые продукты и устанавливает методы культивирования для выявления присутствия (отсутствия) или определения количества микроорганизмов соответствующих групп, семейств, родов или видов.

Методы основаны на посеве продукта, разведении навески продукта или осажденных на мембранном фильтре клеток микроорганизмов в питательные среды, с последующим культивированием посевов в условиях, благоприятных для росга микроорганизмов.

Требования стандарта являются обязательными.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА И ПОДГОТОВКИ ПРОБ

Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Аппаратура и питательные среды по нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рола или вида микроорганизмов.

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1.    Степень разведения навески продукта

3.1.1    Степень разведения навески продукта для посева на плотные среды выбирают так. чтобы общее количество колоний, выросших на чашке Петри, колебалось в пределах 15—300: количество колоний специфических групп бактерий (например, колиформных) — 15—150; плесеней 5—50.

3.1.2    Степень разведения навески продукта для посева в жидкие среды выбирают так, чтобы хотя бы в одной пробирке наибольшего разведения отсутствовали микроорганизмы.

3.1.3.    Количество продукта, которое необходимо профильтровать для получения изолированных колоний на фильтре, должно быть указано в нормативно-технической документации на методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов микроорганизмов.

3.2.    Объем навески продукта или его разведения для посева

3.2.1. При посеве глубинным методом I см3 жидкого продукта или разведения навески

продукта смешивают с расплавленной питательной средой.

3.2.2    При посеве поверхностным методом 0,1 или 0.2 см’ жидкого продукта или разведения навески продукта вносят на поверхность плотной среды.

3.2.3.    Для выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов и определения их таксономических свойств в жидкие среды вносят до 50 г (cmj) продукта: при определении количества микроорганизмов в жидкие среды вносят до 100 см’ жидкого продукта или разведения навески.

Перепечатка воспрещена

Издание официальное ★

€> Издательство стандартов, 1992 © Стандартинформ, 2008

ГОСТ 26670-91 С. 2

4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

4.1.    Глубинный метод посева в плотные среды

4.1.1.    Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры

4.1.2.    Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помешают в термостат.

4.2.    Поверхностный метод посева на плотные среды

4.2.1.    Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48—50 *С или в ламинарном боксе 1—2 ч, или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.

4.2.2.    На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.

4.2.3.    Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.

4.3.    Метод посева в жидкие среды

4.3.1.    В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведение навески.

4.3.2.    При определении наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов из навески продукта готовят исходное и рял десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое НВЧ микроорганизмов.

Самое низкое разведение и высеваемые объемы его ннокулума выбирают в зависимости от предполагаемого количества микроорганизмов и чувствительности метода следующим образом: по 1 см3 из разведения 10″1 и высших разведений, если надо определить количество микроорганизмов. превышающее 3 клетки в 1,0 г (см5) продукта;

по 10 см* из разведения 10-‘ или 1 см3 неразведенного продукта и по 1 см-‘ из разведения 10-1 и более высокого разведения, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 10,0 г (см5) продукта;

по 10 и I см3 неразведенного продукта и ряда его разведений, если надо определить количество микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 100 см’ продукта.

4.3.3.    Все разведения и неразведенный продукт высевают параллельно в три пробирки с питательной средой. Ипокулум объемом 1 см3 высевают в 10 см5 среды нормальной концентрации, инокулумы объемом 10 см3 — в 10 см3 среды двойной концентрации.

4.4. Метод мембранных фильтров

Метод мембранных фильтров применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим давлением.

4.4.1.    Подготовка фмьтров

4.4.1.1.    При работе с мембранными фильтрами следует соблюдать следующие условия: выбирают фильтры, размеры пор которых позволяют осалить на нем основное количество

микроорганизмов определенных видов или групп; для улавливания бактерий применяют фильтры со средним диаметром пор 0,3 мкм;

визуально контролируют отсутствие механических повреждений фильтров, и во избежание повреждений фильтры берут пинцетом, не имеющим рубчиков; ф»пьтры хранят в сухом состоянии;

перед использованием фильтры освобождают от остатков растворителей, пузырьков воздуха и загрязнений кипячением по ГОСТ 18963 в дистиллированной воде;

для фильтрации жидкостей применяют аппарат Зейтца, прибор Гробара и другие установки; части установки для фильтрации, соприкасающиеся с фильтруемым раствором, стерилизуют или кипятят;

стерильный влажный фильтр осторожно помещают блестящей стороной вверх на подкладку из пористого материала или сетку фильтрующей аппаратуры.

Мембранные фильтры не применимы для фильтрации суспензий или гомогенатов продуктов, загрязняющих при фильтрации поры фильтров.

4.4.2. Проведение фильтрации

4.4.2.1.    Для фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно

С. 3 ГОСТ 26670-91

разводят дистиллированной или пептоиной водой в соотношении, позволяющем легко профильтровать разведенные растворы.

Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этапа. Для освобождения от взвешенных части его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор 4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях.

После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной водой или пептонно-солевым раствором.

4.4.2.2. Фильтраиию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра. Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную среду фильтр накладывают нижней стороной так. чтобы она полностью соприкасалась с поверхностью среды.

4.5. Посевы термостатируют в благоприятных для роста микроорганизмов условиях, указанных в нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1.    Подсчет микроорганизмов на плотных средах

5.1.1.    В посевах на плотных питательных средах, полученных глубинным и поверхностных! методами или методом мембранных фильтров:

для подсчета общего числа жизнеспособных микроорганизмов учитывают все выросшие колонии;

для подсчета количества микроорганизмов определенных таксономических групп на селективных средах учитывают колонии, характерные по морфологии для выявляемой группы;

для подсчета количества определенных групп или видов микроорганизмов на селективно-диагностических или диагностических средах учитывают колонии характерной морфологии, показавшие характерную цветную реакцию с присутствующим в среде индикатором.

Колонии подсчитывают невооруженным глазом или с помощью линзы с шестикратным увеличением, или с помошью специально предназначенного для подсчета колоний прибора.

5.2.    Выявление и подсчет микроорганизмов в жидких средах

5.2.1.    Живые микроорганизмы в жидких средах выявляют по помутнению среды, появлению осадка, пленки, газообразованию или по наличию роста микроорганизмов в пересевах на плотных питательных средах.

Микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп выявляют по изменению цвета индикаторов, образованию газа из определенных веществ и по другим признакам, специфическим для метаболизма выявляемой группы или видов микроорганизмов.

5.2.2.    Ятя пересева на плотные питательные среды в жидкую питательную среду погружают стерильную стеклянную палочку или бактериологическую петлю, или иглу и наносят взятую каплю культуральной жидкости на предварительно подсушенную по п. 4.2.1 плотную питательную среду и сразу же равномерно растирают по поверхности шпателем.

Для получения изолированных колоний внесенную каплю распределяют по поверхности среды петлей в виде штриха, как показано на чертеже.

5.3.    Подтверждение характерных колоний

5.3.1.    При необходимости подтверждения принадлежности характерных колоний к выявляемым микроорганизмам отбирают не менее 5 отдельных колоний для получения чистой культуры.

5.3.2.    Каждую выбранную колонию микроорганизмов пересевают на неселективную питательную среду, для чего кончиком стерильной петли (диаметр до 2 мм) отбирают небольшое количество верхней части колонии микроорганизмов.

На питательную среду высеивают непосредственно отобранные микроорганизмы или из них готовят сначала суспензию, которую потом высевают петлей иа поверхность среды в чашке Петри или на скошенную поверхность среды в пробирке.

Дчя приготовления суспензии микроорганизмы суспензируют в 1—2 см3 пептонно-солевого раствора.

5.3.3.    Посевы инкубируют в условиях, указанных в нормативно-технической документации, устанавливающей методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов.

После инкубирования отмечают колонии одного типа. Затем из каждого пересева отбирают по

ГОСТ 26670-91 С. 4

ОДНОЙ КОЛОНИИ каждого типа ПО нормативно-технической доку-    Способ    посева    пгрижом

ментацни, устанавливающей методы анализа соответствующей группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

5.3.4.    Если при подтверждении характерных колоний обнаружено. что не менее 80 % колоний принадлежат к выявляемым микроорганизмам (т. е. не менее 4 из 5 колоний), то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашках Петри, принадлежат к выявляемым микроорганизмам.

В остальных случаях количество выявляемых микроорганизмов определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

5.3.5.    Если при подтверждении колоний, полученных при пересеве с жидкой питательной среды по п. 5.2.2, хотя бы в I из 5 колоний подтверждено наличие выявляемых микроорганизмов, то считают, что в посеве на жилкой среде присутствуют выявляемые микроорганизмы и такие пробирки являются положительными.

5.4.    Способы выражения результатов определения количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри

5.4.1.    Колонии микроорганизмов па плотных средах подсчитывают в посевах того разведения, количество колоний в котором соответствует требованиям п. 3.1.1. По результатам подсчета вычисляют среднеарифметическое значение числа колоний из всех посевов одного разведения.

Если число колоний соответствует требованиям п 3.1.1 в посевах не одного, а двух следу ющих друг за другом разведениях, то вычисляют среднеарифметическое количество микроорганизмов в каждом из этих разведений отдельно.

Если полученные результаты отличаются друг от друга более чем в 2 раза, то оценку проводят по результатам посева наибольшего разведения.

5.4.2.    Если в одном из параллельных посевов одного разведения число колоний не соответствует требованиям п. 3.1.1, эти результаты используют для подсчета среднеарифметического значения и при соответствии полученного значения п. 3.1.1 его используют для дальнейших расчетов.

5.4.3 Если число колоний в параллельных посевах ниже уровней, указанных в п. 3.1.1, то допускается определять суммарное число колоний, если результат соответствует требованиям п. 3.1.1, то его используют для дальнейших расчетов. При этом количество инокулята т будет равно суммарному количеству, внесенному на параллельные посевы.

5.4.4.    Полученные среднеарифметические значения округляют до числа, кратного 5, если среднее арифметическое число микроорганизмов менее 100; до числа, кратного 20. если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и оканчиваются цифрой 5; до числа, кратного 10, если среднеарифметическое число микроорганизмов более 100 и не оканчиваются цифрой 5.

5.4.5.    Количество микроорганизмов в 1,0 г (см5) продукта М вычисляют по формуле

А/* — — С,

т

где iV — степень разведения навески;

т — количество инокулята, внесенное на чашку Петри, см’;

С — округленное среднеарифметическое значение числа колоний.

Результат вычисления выражают числом от 1,0 до 9,9 х 10″.

Я’1я пересчета количества микроорганизмов на 1,0 г (см3) продукта при ан&чиэе по методу мембранных фильтров число колоний, выросших на фильтре, умножают на степень разведения и делят на массу (объем) профильтрованной жидкости.

Допускается при использовании метода мембранных фильтров выражать количество микроорганизмов на 10 см3 (10 г) или на 10 см1 поверхности продукта и более.

5.4.6.    Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения или число подтверхтепных колоний меньше числа, указанных в п. 3.1.1, результаты выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1.0 г (см3) продукта меньше 15 или 5, умножен-N

ных на —, т

где N и т по п. 5.4.5.

С. 5 ГОСТ 26670-91

Допускается для приблизительного подсчета учитывать чашки Петри, число колоний на которых меньше указанных в п. 3.1.1.

Доверительные интервалы для случаев с числом колоний меньше 15 указаны в табл. 2.

5.4.7.    Если рост микроорганизмов на чашках Петри отсутствует или при подтверждении микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп, семейств, родов или видов не обнаружены, то результат выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см3) продукта меньше 1, умноженной на—.

т

5.4.8.    Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения превышает количества, указанные в п. 3.1.1. то результат выражают слелуюшим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см’) продукта больше 150 или 300. или 50, умноженных на А

5.5.    Способы выражения результатов выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов.

Результаты выявления микроорганизмов в определенной навеске (объеме или плошади поверхности) выражают с указанием величины навески слелуюшим образом:

«микроорганизмы обнаружены* или «микроорганизмы не обнаружены*.

5.6.    Определение наиболее вероятного числа ( Н В Ч ) микроорганизмов в 1,0 г (см3) п р о д у к т а

5.6.1.    НВЧ микроорганизмов определяют, исходя из количества положительных пробирок с посевами по табл. 1.

5.6.2.    Для определения выбирают три самых высоких последовательных разведения, в первом из которых все три пробирки являются положительными, а в последнем или последующем неоцениваемом разбавлении три пробирки отрицательные (например, 3, 2, 0 или 3, 2. 1. 0).

5.6.3.    Если после разведения, в котором все три пробирки были отрицательными, одна из пробирок большего (т. е. следующего за ним) разведения окажется положительной (например, 3, 2, 0, I), то для определения НВЧ учитывают три иаивысшие разведения, начиная с того, в котором количество положительных пробирок было меньше трех (т. е. 2, 0. 1).

5.6.4.    Если после наивысшего разведения с тремя положительными пробирками было посеяио лишь одно большее разведение, в котором оказались положительными одна или две пробирки, то НВЧ микроорганизмов записывают как «более чем*, так как в более высоких разведениях некоторые пробирки могли бы оказаться положительными. Например, если при посеве продукта число положительных пробирок соответствовало трехчлену 3. 3, 1 и 3, 3, 2, то согласно табл. I НВЧ будет более 460 или более 1100.

5.6.5.    Если ни в одном из разведений не было трех положительных пробирок, то для определения НВЧ учитывают три последовательных разведения (например, 2, 2, 1 или 2, 1. 0).

5.6.6.    Если все пробирки посеянных разведений окажутся отрицательными, т. е. 0. 0,0, то Н ВЧ микроорганизмов ниже числа, выявляемого посеянными разведениями (например, ниже чем 3 в 10,0 г) и наоборот, если все пробирки посеянных разведений окажутся положительными, т. е. 3. 3, 3. то НВЧ микроорганизмов будет выше его максимального значения, определенного посеянными разведениями (например, выше чем 1100 в 1,0 г).

При необходимости определения конечного числа микроорганизмов исследование повторяют.

5.6.7.    Если три десятикратных разведения были более низкими или более высокими по сравнению с приведенными в табл. 1 разведениями, то НВЧ микроорганизмов в пробе будет иа столько разрядов ниже или выше, на сколько разрядов ниже или выше разведения, которые применялись для его подсчета, например, 10 см3 основного разведения или 1 см3 неразведенной пробы представляют собой разведение на один разряд ниже и 10 см’ неразведенной пробы на два разряда ниже.

Например, при получении комбинации 3, 2, I НВЧ составаяет 150 микроорганизмов в 1.0 г (см3) в случае, если инокулнрованы по 1 см3 разведения Ю-1, 10_J, 10~3. Если инокулированы разведения 10~2, 10~3, I0-4, то найденное НВЧ равно 150 х 10 = 1500 микроорганизмов в 1,0 г (см3). Если ниокулнроваио по 10 и 1 см5 неразведеиного продукта и 1 см3 разведения Ю»1, то НВЧ равно 150 : 100 = 1,5 в 1.0 г (см3) или 15 микроорганизмов в 10 г (см3) продукта.

5.6.8.    Из значений НВЧ учитывают те, которые отвечают наиболее вероятным комбинациям трехзначного числа первой категории. Если НВЧ. соответствующее комбинации трехзначного числа первой категории, не получено, то его определяют комбинациями трехзначного числа, соответствующего второй категории.

5.6.9.    Окончательный результат определения НВЧ выражают по п. 5.4.5.

ГОСТ 26670-91 С. 6

Таблица I

Расчет наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов

Количеств положительных пробирок

НВЧ

Kaieiopnu оиенкн НВЧ для одновременно прозналижронлпних проб и количестве

Ю-*

11>-г

ю-’

1

2

3

5

10

0

0

0

0

0

1

3

3

3

2

2

2

1

0

I

0

3

2

1

1

1

1

0

1

1

6

0

3

3

3

3

0

2

0

6

3

2

2

2

1

0

3

0

9

0

0

0

0

3

1

0

0

4

1

1

1

1

1

1

0

1

7

2

1

1

1

1

1

0

2

11

0

0

0

3

3

1

1

0

7

1

I

1

1

1

1

1

I

II

3

3

2

2

2

1

2

0

11

2

2

1

1

1

1

2

1

15

3

3

3

3

2

1

3

0

16

3

3

3

3

2

2

0

0

9

1

1

I

1

1

2

0

1

14

2

1

1

1

1

2

0

2

20

0

3

3

3

3

2

1

0

15

1

1

1

1

1

2

1

1

20

2

2

1

1

1

2

1

2

27

0

3

3

3

3

2

2

0

21

1

1

1

I

1

2

2

1

28

3

2

2

2

I

2

2

2

35

0

0

0

0

3

2

3

0

29

3

2

2

2

1

2

3

I

36

0

3

3

3

3

3

0

0

23

1

1

1

I

1

3

0

1

38

1

1

1

1

1

3

0

2

64

3

3

2

2

2

3

1

0

43

1

1

I

1

1

3

1

I

75

1

1

1

1

1

3

1

2

120

3

2

2

2

1

3

1

3

160

0

0

0

3

3

3

2

0

93

1

1

1

1

1

3

2

1

150

1

1

1

1

1

3

2

2

210

2

1

1

1

1

3

2

3

290

3

3

3

2

2

3

3

0

240

1

1

1

1

1

3

3

1

460

1

1

1

1

1

3

3

2

1100

1

1

1

1

1

3

3

3

> 1100

Действительное число микроорганизмов о I г 1см’>

С всроя НИХ II.KI

9S %

99 %

0.0

0.1

0.1

1,2

1.2

3.5 0.2 1.2

4.0

1.3

4.0

4.0

5.0

5.0

1.5

4.0

5.0

4.0

5.0

9.0

5.0

9.0

9.0

9.0

9.0

5.0

9.0

16.0

9.0

17.0

30.0

30.0

18.0

30.0

30.0

90.0

40.0

90.0

200.0

9.4

9.5 10.0

17.0

17.0

35.0

17.0

17.0

35.0

20.0

35.0

35.0

38.0

38.0

35.0

35.0

38.0

38.0

38.0

94.0

40.0

94.0

94.0

94.0

94.0

194.0

104.0

181.0 181,0

199.0

360.0

380.0

360.0

380.0

400.0

990.0

990.0

1960.0

4000.0

0,0

0,0

0.0

0,5

0,5

1.8

0,1

0.5

2.0

0.6

2.0

2,0

2.0

2.0

0,7

2,0

2,0

2.0

2.0

5.0

2.0

5.0

5.0

5.0

5.0

3.0

5.0

10.0

5.0

11.0 20.0 20,0 12.0 20.0 20.0

50.0

30.0

50.0

100.0

14.0

14.0

16.0

25.0

25.0

46.0

25.0

25.0

46.0

27.0

46.0

46.0

52.0

52.0

46.0

46.0

52.0

52.0

52.0

142.0

56.0

142.0

142.0

142.0

142.0

142.0

157.0

250.0

250.0

270.0

440.0

520.0

430.0

520.0

560.0

1520.0

1520.0

2830.0

5700.0

П р и м с ч а и и я:

1.    Приведенные в табл. 1 НВЧ соответствуют случаям, когда в среды высевают по I см’ из 10“10“ 10_* разведений, т. с. 0.1, 0,01, 0.0()1 г (см1) продукта.

2.    Категория 1 — наиболее часто встречаемые комбинации положительных пробирок, которые могут быть получены н 95 % случаев; рассчитанное НВЧ отвечает действительному числу определяемых в продукте микроорганизмов в пределах точности метода;

категория 2 — менее вероятные комбинации положительных пробирок, встречаемые в 4 % случаев; рассчитанное НВЧ может отличаться от действительного разброса, превышающего данную точность метода, но приемлемого в практике;

категории 3 или 0 — неприемлемые комбинации положительных пробирок, вероятность получения которых для нормальных продуктов равна нулю для категории 0. либо мало вероятна для категории 3.

Эги категории дают часто результаты, отличающиеся от действительного числа в разбросе, высоко превышающем точность метода, и поэтому для расчета НВЧ не приемлемы.

С увеличением числа анализируемых проб от одной и той же партии продукта точность Н ВЧ повышается на одну, а иногда и на две категории.

С. 7 ГОСТ 26670-91

ПРИЛОЖЕНИЕ

Справочное

Таблица 2

Доверительные прелслы для числа колоний мснсс 15

Средне-арифмегическое число колоний

Доверительные пределы дли вероятности 95 %

Средне-лрифмешческое

Доверительные пределы для вероятности 95 Чг

нижний

верхний

число колонии

нижний

верхний

1

1

2

8

3

13

2

1

4

9

4

14

3

1

5

К)

4

16

4

1

6

II

5

18

5

2

9

12

6

19

6

2

10

13

7

20

7

2

12

14

7

21

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной н овощесушильной промышленное!и (ВНИИКОП)

Техническим комитетом но стандартизации 93 «Продукты переработки плодов и овошей*

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 25.12.91 № 2117

3.    Настоящий стандарт соответствует ИСО 7218—85 в части методов посева в твердые и жидкие питательные среды, методов выделения чистой культуры и обработки результатов

4.    Взамен ГОСТ 26670-85

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на который дана ссылка

Помер пункта

ГОСТ 18963-73

4.4.1.1

ГОСТ 26668-85

1

ГОСТ 26669-85

1

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2008 г.

Редактор Л. В Каретникова Технический редактор Л.Л. Гусева Корректор М.В. Буйная Компьютерная Bcpcixa Л.Л. Круговой

Подписано п печать 26.02.2008. Формат 60×841$. Бумага офсегная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. печ. л. 0.93. Уч.-идя. я- 0,87. Тираж S8 эка. Зак. 177.

ФГУП •СТАПДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранашый пер.. 4. www.soMinro.ru    info’il goslinforu

Набрано во ФГУП .СТЛНДЛРТИ НФОРМ . на ПЭВМ.

Отпечагаио в филиале ФГУП «СТАПДАРТИНФОРМ» — гип. «Московский печатник», 105062 Москва. Лялип пер.. 6.

ГОСТ 26670-91 — Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

С. 5 ГОСТ 26670-91

Допускается для приблизительного подсчета учитывать чашки Петри, число колоний на которых меньше указанных в п. 3.1.1.

Доверительные интервалы для случаев с числом колоний меньше 15 указаны в табл. 2.

5.4.7.    Если рост микроорганизмов на чашках Петри отсутствует или при подтверждении микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп, семейств, родов или видов не обнаружены, то результат выражают следующим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см3) продукта меньше 1, умноженной на—.

т

5.4.8.    Если среднеарифметическое значение числа колоний, выросших на чашках Петри, в посевах одного разведения превышает количества, указанные в п. 3.1.1. то результат выражают слелуюшим образом:

количество определяемых микроорганизмов в 1,0 г (см’) продукта больше 150 или 300. или 50, умноженных на А

5.5.    Способы выражения результатов выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов.

Результаты выявления микроорганизмов в определенной навеске (объеме или плошади поверхности) выражают с указанием величины навески слелуюшим образом:

«микроорганизмы обнаружены* или «микроорганизмы не обнаружены*.

5.6.    Определение наиболее вероятного числа ( Н В Ч ) микроорганизмов в 1,0 г (см3) п р о д у к т а

5.6.1.    НВЧ микроорганизмов определяют, исходя из количества положительных пробирок с посевами по табл. 1.

5.6.2.    Для определения выбирают три самых высоких последовательных разведения, в первом из которых все три пробирки являются положительными, а в последнем или последующем неоцениваемом разбавлении три пробирки отрицательные (например, 3, 2, 0 или 3, 2. 1. 0).

5.6.3.    Если после разведения, в котором все три пробирки были отрицательными, одна из пробирок большего (т. е. следующего за ним) разведения окажется положительной (например, 3, 2, 0, I), то для определения НВЧ учитывают три иаивысшие разведения, начиная с того, в котором количество положительных пробирок было меньше трех (т. е. 2, 0. 1).

5.6.4.    Если после наивысшего разведения с тремя положительными пробирками было посеяио лишь одно большее разведение, в котором оказались положительными одна или две пробирки, то НВЧ микроорганизмов записывают как «более чем*, так как в более высоких разведениях некоторые пробирки могли бы оказаться положительными. Например, если при посеве продукта число положительных пробирок соответствовало трехчлену 3. 3, 1 и 3, 3, 2, то согласно табл. I НВЧ будет более 460 или более 1100.

5.6.5.    Если ни в одном из разведений не было трех положительных пробирок, то для определения НВЧ учитывают три последовательных разведения (например, 2, 2, 1 или 2, 1. 0).

5.6.6.    Если все пробирки посеянных разведений окажутся отрицательными, т. е. 0. 0,0, то Н ВЧ микроорганизмов ниже числа, выявляемого посеянными разведениями (например, ниже чем 3 в 10,0 г) и наоборот, если все пробирки посеянных разведений окажутся положительными, т. е. 3. 3, 3. то НВЧ микроорганизмов будет выше его максимального значения, определенного посеянными разведениями (например, выше чем 1100 в 1,0 г).

При необходимости определения конечного числа микроорганизмов исследование повторяют.

5.6.7.    Если три десятикратных разведения были более низкими или более высокими по сравнению с приведенными в табл. 1 разведениями, то НВЧ микроорганизмов в пробе будет иа столько разрядов ниже или выше, на сколько разрядов ниже или выше разведения, которые применялись для его подсчета, например, 10 см3 основного разведения или 1 см3 неразведенной пробы представляют собой разведение на один разряд ниже и 10 см’ неразведенной пробы на два разряда ниже.

Например, при получении комбинации 3, 2, I НВЧ составаяет 150 микроорганизмов в 1.0 г (см3) в случае, если инокулнрованы по 1 см3 разведения Ю-1, 10_J, 10~3. Если инокулированы разведения 10~2, 10~3, I0-4, то найденное НВЧ равно 150 х 10 = 1500 микроорганизмов в 1,0 г (см3). Если ниокулнроваио по 10 и 1 см5 неразведеиного продукта и 1 см3 разведения Ю»1, то НВЧ равно 150 : 100 = 1,5 в 1.0 г (см3) или 15 микроорганизмов в 10 г (см3) продукта.

5.6.8.    Из значений НВЧ учитывают те, которые отвечают наиболее вероятным комбинациям трехзначного числа первой категории. Если НВЧ. соответствующее комбинации трехзначного числа первой категории, не получено, то его определяют комбинациями трехзначного числа, соответствующего второй категории.

5.6.9.    Окончательный результат определения НВЧ выражают по п. 5.4.5.

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов, ГОСТ от 04 декабря 1985 года №26668-85

ГОСТ 26668-85

Группа Н59



МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109

Дата введения 1986-07-01

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 4 декабря 1985 г. N 3909 дата введения установлена 01.07.86

Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)

ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.


Настоящий стандарт распространяется на пищевые и вкусовые продукты (кроме молочных) и устанавливает методы отбора проб для микробиологических анализов.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 3013-81.

1. АППАРАТУРА И МАТЕРИАЛЫ

1.1. Для отбора проб применяют следующие аппаратуру и материалы:

горелки газовые или спиртовые по ГОСТ 25336-82;

ножи и проволоку из нержавеющей стали;

скальпели, пинцеты по ГОСТ 21241-89, шпатели, ложки, половник, долота, пилы из нержавеющей стали;

пробоотборник (буравчик или зонд) из нержавеющей стали;

посуду широкогорлую с крышкой;

фольгу металлическую;

чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;

пакеты полиэтиленовые;

вату;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
__________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000 .


пипетки вместимостью от 10 до 100 см по ГОСТ 29227-91;

посуду с притертой пробкой;

пробоотборники специальные для отбора проб из глубины изделия;

мешалки из нержавеющего металла.

1.2. Посуду, инструменты и материалы, соприкасающиеся с продуктом во время отбора проб, стерилизуют одним из следующих способов:

насыщенным паром — в течение 30 мин в автоклаве при температуре (121±1) °С;

горячим воздухом в стерилизаторе:

с принудительной циркуляцией воздуха при температуре от 170 до 175 °С в течение 60 мин;

без принудительной циркуляции воздуха при температуре от 180 до 185 °С в течение 15 мин, при температуре от 160 до 165 °С в течение 120 мин.

Допускается инструменты обрабатывать погружением в этиловый спирт с последующим фламбированием.

2. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

2.1. Перед отбором проб визуально определяют внешний вид упаковочных единиц и (или) продукта, попавших в выборку, и подразделяют их на:

нормальные по внешнему виду, при осмотре которых не обнаружены отклонения, вызванные развитием микроорганизмов;

подозрительные по внешнему виду, при осмотре которых обнаружены одно или несколько отклонений, которые могли возникнуть как вследствие микробной порчи, так и вследствие химических и биохимических реакций в продукте;

испорченные продукты, при осмотре которых обнаружены явные дефекты упаковочных единиц и (или) продукта: бомбаж, хлопуши, брожение, плесневение, гниение, ослизнение, прокисание и др.

Отбор проб от продукции проводят по каждому виду отдельно.

2.2. Основные понятия и общие правила отбора проб — по нормативно-технической документации на конкретный вид продукции.

2.3. Пробы продуктов для микробиологических анализов отбирают до отбора проб для физико-химических и органолептических анализов.

2.4. Пробы от продуктов отбирают асептическим способом, исключающим микробное загрязнение продукта из окружающей среды.

2.5. Пробы продуктов для микробиологических анализов отбирают в стерильную посуду, горло которой предварительно обжигают в пламени горелки. Пробы отбирают с помощью стерильных инструментов.

2.6. Масса (объем) пробы продукта устанавливается в соответствии с нормативно-технической документацией на конкретный вид продукции и должна быть достаточной для проведения микробиологических анализов.

2.6.1. Если масса (объем) пробы продукта равна массе (объему) продукта в потребительской таре, попавшего в выборку, то используют ее содержимое.

2.6.2. Если масса (объем) продукта в потребительской таре меньше массы (объема) пробы, то ее формируют из нескольких единиц продуктов в потребительской таре (кроме консервов).

2.6.3. От продукции в транспортной или потребительской таре, масса (объем) которой больше массы (объема) пробы, от неупакованной продукции или в специализированных транспортных средствах пробы отбирают путем взятия точечных проб из разных мест и с различной глубины, а также с поверхностных слоев, соприкасающихся с тарой, в одну посуду или каждую пробу в отдельную посуду в зависимости от цели анализа.

2.7. Если масса (объем) пробы продукта не установлена в нормативно-технической документации на конкретный вид продукции, то от каждой упаковочной единицы, попавшей в выборку, отбирают:

не менее 1 шт. — от продукции в потребительской таре;

до 1000 г (см) — от продукции в транспортной таре (кусковой, жидкой, пастообразной, сыпучей и смешанной консистенции).

3. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ ОТ ПРОДУКЦИИ

3.1. Отбор проб от кусковой продукции

3.1.1. Пробы от кусковой продукции массой нетто до 1000 г отбирают по п.2.6.3.

Отбор проб проводят ложкой, половником, пинцетом или другим инструментом, в зависимости от вида и размера кусков продукта. Пробу помещают в посуду или упаковывают в фольгу.

3.1.2. Пробы от кусковой продукции массой нетто более 1000 г отбирают одним из следующих методов:

отрезают или вырезают часть продукта ножом, пилой или другим инструментом. У изделий квадратной формы разрез делают перпендикулярно к грани, у изделий продольной формы — перпендикулярно продольной оси, у шарообразных изделий — клинообразно. Пробу помещают в посуду или упаковывают в фольгу;

продукт в нескольких местах режут ножом и с поверхности разреза и из глубины продукта скальпелем берут необходимое количество кусков, которое пинцетом переносят в широкогорлую посуду;

срезают поверхностный слой продукта толщиной от 0,5 до 1 см ножом или проволокой, при помощи пробоотборника (буравчика или зонда) выдавливают (выжимают) продукт в широкогорлую посуду. Этот прием повторяют до тех пор, пока не отберут необходимое количество массы (объема) пробы. При отборе пробы из глубины продукта его просверливают в разных местах не менее чем до половины высоты;

от твердого или хрупкого продукта пробы отбирают при помощи долота или другого инструмента.

3.2. Отбор проб от жидкой или пастообразной продукции

Из емкости вместимостью до 1000 см пробу отбирают пипеткой или металлическим половником. Если продукт неоднороден по высоте емкости, то содержимое ее перед отбором пробы тщательно перемешивают.

Из емкости вместимостью более 1000 см пробы отбирают с различной глубины не менее чем из трех слоев продукта, в одну посуду или каждую пробу в отдельную посуду, в зависимости от цели анализа.

При отборе проб из резервуара, оснащенного краном, кран сначала промывают, вытирают ватой, пропитанной этиловым спиртом, и обжигают в пламени, затем выпускают от 1 до 10 см жидкости (в зависимости от вместимости резервуара и диаметра крана) и только после этого отбирают пробы в посуду таким образом, чтобы требуемое количество жидкости выпускалось непосредственно в посуду.

Данный метод не применим для отбора проб от продуктов, содержащих спирты.

3.3. Отбор проб от сыпучих продуктов

Пробу от продукта отбирают после его тщательного перемешивания мешалкой или половником. Пробу от продукта, который не может быть перемешан, отбирают по п.2.6.3.

3.4. Отбор проб от продуктов смешанной консистенции

Пробы отбирают таким образом, чтобы в них входили все компоненты в соотношении, в котором они находятся в продукте.

Допускается в зависимости от особенностей контролируемого продукта, цели анализа и предполагаемой микробной загрязненности отбирать пробы от каждого компонента отдельно.

4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Каждую отобранную пробу маркируют этикетками с указанием наименования продукта, предприятия-изготовителя, номера партии, даты отбора проб, цели микробиологического анализа, подписи лиц, отбиравших пробу.

4.2. Отобранные пробы, предназначенные для анализа вне предприятия-изготовителя, пломбируют и опечатывают печатью организации, отвечающей за контролируемую продукцию, и транспортируют в лабораторию.

4.3. Пробы замороженных продуктов укладывают в изотермическую тару (термос, изотермическая коробка) или обкладывают сухим льдом (СО), или упаковывают другим способом, обеспечивающим сохранение проб в замороженном состоянии при температуре, не превышающей минус 15 °С.

4.4. Пробы консервов и продуктов транспортируют в соответствии с условиями транспортирования продукции, установленными в нормативно-технической документации на каждый вид продукта.

4.5. Пробы скоропортящихся продуктов транспортируют при температуре 5 °С не более 6 ч, за исключением продуктов, на которые предусмотрены специальные условия для транспортирования проб в нормативно-технической документации.



Электронный текст документа
подготовлен АО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
Продукты пищевые, консервы.
Методы микробиологического анализа:

Сб. ГОСТов. — М.: Стандартинформ, 2010

ГОСТ 24645-81


ГОСТ 24645-81

Группа Н28

ОКП 92 6528

Дата введения 1982-01-01

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством рыбного хозяйства СССР

РАЗРАБОТЧИКИ

В.П.Быков, Н.В.Чупахина, Н.П.Фетина

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 20.03.81 N 1475

2а. Срок проверки — 1997 г., периодичность проверки — 5 лет

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. Постановлением Госстандарта СССР от 13.06.91 N 863 снято ограничение срока действия

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ (июнь 1996 г.) с Изменениями N 1, 2, 3, утвержденными в июле 1986 г., августе 1990 г., ноябре 1991 г. (ИУС 10-86, 11-90, 2-92)


Настоящий стандарт распространяется на белковую мороженую пасту «Океан», приготовленную из криля.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Белковую мороженую пасту «Океан» приготовляют из криля-сырца в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологической инструкции с соблюдением санитарных норм и правил, утвержденных в установленном порядке.

1.2. Белковую пасту «Океан» замораживают сухим искусственным способом:

— брикетами массой не более 0,25 кг для розничной торговли;

— блоками массой не более 3,0 кг для общественного питания, по согласованию с потребителем;

— блоками массой не более 12,0 кг для промышленной переработки на предприятиях Министерства рыбного хозяйства СССР;

— блоками массой от 3,0 до 6,0 кг на предприятиях мясомолочной промышленности.

Для отдельных брикетов массой до 0,25 кг допускаются отклонения массы нетто не более ±3%.

Допускается производить распиловку глазированных блоков массой от 3 до 12 кг на брикеты фактической массой не более 0,25 кг, не допуская их размораживания.

1.3. Температура в толще блоков, брикетов пасты при выгрузке из морозильных камер и трюмов судов должна быть не выше минус 18 °С.

1.4. Блоки белковой пасты выпускают в глазированном виде.

Глазурь должна иметь вид ледяной корочки, равномерно покрывающей поверхности блока, и не должна отставать от блока при легком постукивании.

Масса глазури при выпуске белковой пасты с рыбообрабатывающих судов не должна быть менее 4% по отношению к массе нетто блока пасты.

Допускается вместо глазирования мороженую пасту «Океан» в блоках массой от 3 до 12 кг упаковывать в мешки-вкладыши из пленочных материалов с последующей запайкой их.

Белковую пасту, замороженную в мелкой потребительской упаковке, а также приготовленную способом распиловки крупных блоков на брикеты массой до 0,25 кг, не глазируют.

1.5. По органолептическим, физическим и микробиологическим показателям белковая мороженая паста «Океан» должна соответствовать требованиям, указанным в таблице.

Наименование показателя

Характеристика и норма

Внешний вид

Блоки, брикеты целые, плотные

Поверхность ровная, допускается шероховатая

Цвет (после размораживания)

От светло-розового до оранжево-красного, без коричневых оттенков

Консистенция (после размораживания)

Крупитчатая или творогообразная

Вкус и запах (после размораживания)

Приятный, свойственные данному виду продукта, без посторонних запахов и привкусов, без признаков окислившегося жира

Массовая доля воды, %, не более

72

Мезофильные аэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы в 1 г продукта, КОЕ, не более

5х10

Наличие бактерий группы кишечных палочек в 1 г продукта

Не допускается

Наличие патогенных микроорганизмов, в том числе сальмонеллы, в 25 г продукта

То же

Наличие стафилококкуса ауреуса в 1 г продукта

«


Примечание

Допускается массовая доля воды в белковой пасте не более 76% для промышленной переработки на предприятиях (на консервы, пресервы, кулинарию, сыры и другие изделия), кроме предприятий Министерства торговли СССР.


(Измененная редакция, Изм. N 2)

1.6. Содержание токсичных элементов и пестицидов в продукте не должно превышать допустимые уровни, установленные в медико-биологических требованиях и санитарных нормах качества продовольственного сырья и пищевых продуктов Министерства здравоохранения СССР.

(Введен дополнительно, Изм. N 2)

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Правила приемки — по ГОСТ 7631-85.

2.2. Выборка и периодичность определения микробиологических показателей белковой пасты «Океан» — в соответствии с порядком санитарно-микробиологического контроля производства кулинарных изделий из рыбы и нерыбных объектов морского промысла, утвержденным Министерством здравоохранения СССР.

(Введен дополнительно, Изм. N 1).

2.3. Контроль за содержанием токсичных элементов и пестицидов осуществляется в соответствии с порядком, установленным производителем продукции по согласованию с органами санитарного надзора и гарантирующим безопасность продукции.

(Измененная редакция, Изм. N 3).

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Методы отбора проб — по ГОСТ 7631-85, ГОСТ 26668-85.

Подготовка проб для определения токсичных элементов — по ГОСТ 26929-94.

3.2. Методы испытаний — по ГОСТ 7636-85, ГОСТ 26669-85, ГОСТ 7631-85, ГОСТ 26670-91, ГОСТ 26927-86, ГОСТ 26930-86 — ГОСТ 26934-86.

3.3. Содержание пестицидов и микробиологические показатели определяют по методам, утвержденным Министерством здравоохранения СССР.

Анализ белковой пасты на наличие патогенной микрофлоры проводят по требованию органов и учреждений санэпидемслужбы в указанных ими лабораториях.

Разд.3. (Измененная редакция, Изм. N 2).

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Брикеты белковой мороженой пасты предельной массой продукта 0,25 кг упаковывают:

в красочные картонные пачки по НТД, с предварительным упаковыванием брикетов в пергаментные салфетки по ГОСТ 1341-84* или пакеты из пленочных материалов по НТД;
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 1341-97. — Примечание изготовителя базы данных.

в красочные картонные пачки, парафинированные с внутренней стороны, без предварительного упаковывания брикетов в пергамент или пленочные материалы;

в кашированную алюминиевую фольгу.

Брикеты белковой мороженой пасты, приготовленные способом распиловки, укладывают в пакеты из пленочных материалов, с последующим упаковыванием их в картонные пачки.

Допускается укладывать брикеты белковой пасты, приготовленные способом распиловки, в красочные картонные пачки, парафинированные с внутренней стороны, без предварительного упаковывания брикетов в пергамент или пленочные материалы.

4.2. Упакованные брикеты белковой мороженой пасты массой не более 0,25 кг и блоки пасты массой не более 3 кг укладывают в ящики из гофрированного картона по НТД предельной массой продукта 12 кг, с предварительным упаковыванием блоков в мешки-вкладыши из пленочных материалов по НТД.

4.1, 4.2 (Измененная редакция, Изм. N 3).

4.3. Блоки белковой мороженой пасты, предназначенные для промышленной переработки, укладывают в ящики из гофрированного картона предельной массой продукта 40 кг, с предварительным упаковыванием их в мешки-вкладыши из пленочных материалов.

4.4. Пакеты или мешки-вкладыши из пленочных материалов должны быть запаяны.

4.5. Пленочные материалы, применяемые для упаковывания, должны быть разрешены Министерством здравоохранения СССР.

4.6. Тара должна быть сухой, чистой, прочной, без постороннего запаха.

4.7. Картонные ящики должны быть оклеены клеевой лентой на бумажной основе по ГОСТ 18251-87 или полиэтиленовой лентой с липким слоем по ГОСТ 20477-86, или обтянуты стальной упаковочной лентой по ГОСТ 3560-73, или проволокой по ГОСТ 3282-74.

4.8. Маркируют тару с продукцией, в том числе потребительскую по ГОСТ 7630-87*, транспортная маркировка — по ГОСТ 14192-77** и ГОСТ 7630-87* с нанесением манипуляционного знака: «Скоропортящийся груз».
_______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 7630-96;
** На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 14192-96. — Примечание изготовителя базы данных.

При маркировании продукции, фасованной в мелкую потребительскую упаковку, наносят дополнительную надпись:

«Белковую мороженую пасту «Океан» хранить в морозилке домашнего холодильника не более 3-х суток».

(Измененная редакция, Изм. N 3).

4.9. Транспортируют белковую мороженую пасту в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на транспорте данного вида, при соблюдении следующих температурных режимов:

при температуре не выше минус 18 °С — в рефрижераторных судах;

при температуре от минус 15 до минус 18 °С и ниже в рефрижераторных вагонах и автомобилях.

Пакетирование — по ГОСТ 23285-78, ГОСТ 24597-81, ГОСТ 26663-85.

4.10. Белковую мороженую пасту хранят в производственных и распределительных холодильниках при температуре не выше минус 18 °С.

Срок хранения белковой мороженой пасты не более 12 мес со дня замораживания.

На предприятиях мясной и молочной промышленности СССР допускается хранение пасты при температуре от минус 3 до минус 5 °С до 10 сут.

Реализацию белковой пасты в розничной торговой сети и сети общественного питания проводят в соответствии с условиями, сроками хранения и реализации особо скоропортящихся продуктов, утвержденными Министерством здравоохранения СССР,

при температуре:

от минус 1 до минус 3 °С в течение 72 ч;

от минус 3 до минус 5 °С в течение 10 сут.

Повторное замораживание белковой пасты «Океан» не допускается.

4.9, 4.10 (Измененная редакция, Изм. N 3).

Электронный текст документа
подготовлен АО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: ИПК Издательство стандартов, 1996

ГОСТ 26671-2014 Продукты переработки фруктов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов (Переиздание), ГОСТ от 30 марта 2015 года №26671-2014


ГОСТ 26671-2014

Группа Н59



МКС 67.050
67.080

67.120

Дата введения 2016-01-01

Предисловие


Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией «Российский союз производителей соков» (РСПС)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 декабря 2014 г. N 46)

За принятие голосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 марта 2015 г. N 197-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 26671-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 26671-85

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2018 г.


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки фруктов и овощей, в том числе на фруктовые и овощные соки, нектары, морсы и сокосодержащие напитки, фруктовые и овощные концентрированные соки, пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, компоты, кисели, джемы, повидло, варенья, быстрозамороженные фрукты и овощи, мясные и мясорастительные консервы (далее — продукты) и устанавливает порядок подготовки проб для лабораторных анализов (испытаний).

Стандарт не распространяется на продукты соления и квашения, сушеные фрукты и овощи.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.0.004-2015 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
_______________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.


ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ ISO 3696-2013** Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля
_______________
** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005. «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».


ГОСТ 5717.2-2003 Банки стеклянные для консервов. Основные параметры и размеры

ГОСТ 6613-86 Сетки проволочные тканые с квадратными ячейками. Технические условия

ГОСТ 6709-72*** Вода дистиллированная. Технические условия
________________
*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018.


ГОСТ 8756.0-70 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 15895-77 Статистические методы управления качеством продукции. Термины и определения
_______________
В Российской Федерации действует ГОСТ Р 50779.11-2000 (ИСО 3534.2-93) «Статистические методы. Статистическое управление качеством. Термины и определения».


ГОСТ 22967-90 Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения


В настоящем стандарте использованы термины по ГОСТ 15895, ГОСТ 26313.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и материалы

4.1 Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 среднего класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,1 г.

4.2 Дробилки и мельницы лабораторные, обеспечивающие дробление и измельчение исходного материала до соответствующей крупности.

4.3 Грохот вибрационный.

4.4 Мешалка механическая или гомогенизатор.

4.5 Делители различных конструкций, отвечающие крупности дробления и измельчения.

4.6 Наборы сит по ГОСТ 6613, с размерами отверстий, отвечающих крупности дробления и измельчения.

4.7 Центрифуги лабораторные с фактором разделения не менее 990 g и набором адаптеров для пробирок.

4.8 Баня водяная лабораторная.

4.9 Пробирки центрифужные с завинчивающимися крышками из полимерных материалов различной вместимости.

4.10 Банки стеклянные по ГОСТ 5717.2.

4.11 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

4.12 Фильтры мембранные с диаметром пор 0,45 мкм и дисковые по технической документации изготовителя.

4.13 Шприц медицинский по ГОСТ 22967.

4.14 Стаканы типа В или Н по ГОСТ 25336 различной вместимости.

4.15 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696*.
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. — Примечание изготовителя базы данных.


Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также посуды и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор проб


Отбор проб — по ГОСТ 26313, для мясных и мясорастительных консервов — по ГОСТ 8756.0.

Поступающая в лабораторию проба должна быть не поврежденной и не потерпевшей изменений при транспортировании или хранении.

6 Подготовка лабораторных проб

6.1 Общие указания

6.1.1 Подготовка лабораторных проб для твердых продуктов, в том числе мясных консервов, заключается в получении однородной массы продукта с помощью измельчения по 6.2, дробления по 6.3, размола и растирания по 6.4 в зависимости от вида продукта.

6.1.2 Лабораторные пробы жидких и пюреобразных продуктов однородной консистенции (соковую продукцию с мякотью, фруктовые и овощные пюре, овощную икру, томатную пасту, паштеты, фарш, повидло и т.д.) только перемешивают.

6.1.3 Варенье и джем тщательно растирают в ступке до состояния однородной массы.

6.2 Измельчение лабораторных проб

6.2.1 Пробы продуктов в зависимости от консистенции измельчают с помощью дробилки, гомогенизатора, миксера или ступки до получения гомогенной массы.

6.2.2 Перед измельчением пробы продукта:

— в продуктах из косточковых фруктов удаляют косточки, в консервах из домашней птицы и дичи — кости, в остальных продуктах — специи, веточки, чашелистики и посторонние примеси;

— продукты, содержащие животные жиры, нагревают на водяной бане до расплавления жира;

— замороженные продукты предварительно размораживают в закрытом сосуде, жидкую часть, образующуюся при размораживании, добавляют к продукту.

6.2.3 В продуктах, содержащих легко разделяемые жидкую и твердую части, измельчению подвергают только твердую часть, предварительно слив жидкость в стакан, а затем обе части объединяют, перемешивают и растирают по частям в ступке до состояния однородной массы.

6.3 Дробление лабораторных проб

6.3.1 Дробление проб до размеров 10 мм осуществляют на щековых дробилках, до 2 мм — на валковых. Измельчение до размеров менее 1 мм, если это необходимо, проводят с использованием истирателей различных типов (дисковых, вибрационных) или мельниц (шаровых, стержневых), а также в лабораторных ступках.

6.3.2 Внутренняя часть дробилки (мельницы) должна быть очищена, чтобы избежать загрязнения пробы, для чего через агрегат пропускают материал, попадание которого в пробу не приведет к загрязнению нежелательными компонентами.

6.3.3 В процессе дробления (истирания) не должно быть потерь материала пробы.

6.4 Размол

6.4.1 Размалывание должны проводить как можно быстрее с тем, чтобы лабораторная проба подвергалась воздействию атмосферы ограниченное время. Если необходимо, предварительно перед размалыванием проводят дробление или крошение кусочков до нужных размеров. Важно, чтобы лабораторная проба была тщательно перемешана перед каждой стадией.

6.4.2 Лабораторные пробы, состоящие из мелких частичек


Если проба проходит через сито с отверстиями 1 мм, ее тщательно перемешивают. Затем пробу разделяют последовательно, используя делитель или аппарат для квартования до тех пор, пока не будет получена проба нужного размера.

6.4.3 Лабораторные пробы, состоящие из частичек размером более 1 мм

6.4.3.1 Если проба не проходит через сито с отверстиями 1 мм, но проходит через сито с отверстиями 2,80 мм, ее тщательно перемешивают и готовят пробу нужного размера путем проведения последовательных делений, как в 6.2.

6.4.3.2 Осторожно размалывают эту пробу на хорошо очищенной мельнице, до полного прохода через сито с отверстиями 1 мм.

6.4.3.3 Если лабораторная проба не проходит через сито с отверстиями 2,80 мм, ее осторожно размалывают на хорошо очищенной мельнице до полного прохода через сито с отверстиями 2,80 мм. Тщательно перемешивают.

6.4.3.4 Размолотую лабораторную пробу последовательно разделяют при помощи делительного аппарата до тех пор, пока не будет получена проба нужного размера, необходимая для всех видов анализа (испытаний). Эту пробу размалывают на хорошо очищенной мельнице до ее полного прохода через сито с отверстиями 1 мм.

6.5 Подготовка лабораторных проб соковой продукции

6.5.1 Осветленные соки и сокосодержащие напитки с объемной долей мякоти до 10% включительно (соки и нектары из цитрусовых фруктов, ананаса, персика, абрикоса и др.) или содержащие нерастворимые в воде вещества фильтруют через обеззоленный фильтр или центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

6.5.2 Соки и сокосодержащие напитки с объемной долей мякоти свыше 10% (из манго, томата, банана и др.) предварительно разбавляют водой в соотношении 1:5 (по объему) для осветления раствора и центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин. В случае неполного осаждения нерастворимых в воде частиц пробу вновь фильтруют через обеззоленный фильтр или центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

6.5.3 Концентрированные соки и пюре предварительно разбавляют водой в соотношении 1:5 весовым методом.

В том случае, если концентрированный сок представляет собой пюре или содержит нерастворимые в воде вещества, пробу дополнительно центрифугируют в соответствии с аналогичными требованиями 6.4.2.

6.5.4 При проведении хроматографического анализа часть подготовленной по 6.5.1 или 6.5.3 пробы продукта отбирают в медицинский шприц с дисковым фильтром диаметром пор 0,45 мкм и отфильтровывают его в виалу.

7 Требования к подготовке лабораторных проб

7.1 В процессе подготовки лабораторных проб с целью сохранения их свойств следует принимать особые меры.

7.2 Для определения массовой доли тяжелых металлов в продукте измельчение проводят в оборудовании из материала, не загрязняющего продукт металлами.

7.3 Для определения массовой доли витамина С в продукте не допускается контакт пробы продукта с металлическими поверхностями, его аэрация и нагрев.

7.4 Для определения массовой доли минеральных примесей в продукте методом флотации пробу продукта перемешивают и измельчают, не подвергая растиранию.

7.5 Подготовленную пробу продукта помещают в банку подходящего объема по ГОСТ 5717.2 с плотно закрывающейся крышкой и снабжают этикеткой с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования продукта, даты выработки.

7.6 От подготовленной пробы одним из указанных способов по разделу 6 отбирают пробы для всех последующих анализов (испытаний), причем каждый раз перед взятием пробы всю массу тщательно перемешивают.

7.7 Для определения витаминов, каротиноидов и других нестабильных веществ анализы (испытания) проводят сразу после приготовления пробы, а для остальных анализов (испытаний) — берут по мере необходимости в течение суток. При этом пробу хранят при температуре от 0°С до 5°С.

8 Требования безопасности

8.1 Требования электробезопасности при работе с приборами — по ГОСТ 12.1.019 и в соответствии с инструкцией по эксплуатации приборов.

8.2 Организация обучения безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

8.3 К выполнению работ допускают операторов (лаборантов, химиков, контролеров продукции, других специалистов), освоивших технику работы с оборудованием и прошедших соответствующий инструктаж.

8.4 Персонал, осуществляющий подготовку лабораторных проб, при необходимости должен надевать одноразовые перчатки и соответствующие средства индивидуальной защиты (халаты, шапочки и прочее) и утилизировать одноразовые средства защиты по окончании работы таким образом, чтобы не допустить загрязнения пробы.

УДК 664.863.001.4:006.354

МКС 67.050
67.080
67.120

Н59

Ключевые слова: консервы, продукты переработки фруктов и овощей, фрукты, овощи, соковая продукция, подготовка проб, измельчение, дробление, размол




Электронный текст документа
подготовлен АО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2018

Отправить ответ

avatar
  Подписаться  
Уведомление о