Му 2196 80: Библиотека государственных стандартов

Содержание

Гигиена и санитария №1 2010 стр. 95

Гигиена и санитария №1 2010

Т. К. Валеев, Р. А. Сулейманов
ФГУН УфНИИ медицины труда и экологии человека Роспотребнадзора, Уфа (450106 Уфа, ул. Ст. Кувыкина, 94)

ГИГИЕНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРЕДЕЛЬНО ДОПУСТИМОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ АГИДОЛА-10 В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ

Объектами исследований являлись лабораторные животные (кролики, морские свинки, белые крысы, белые мыши), химическое вещество, агидол-10, производное класса алкилфенолов.
Цель работы — гигиеническое обоснование предельно допустимой концентрации в атмосфере населенных мест агидола-10.
В процессе работы осуществляли экспериментальные исследования по изучению токсичности агидола-10 на лабораторных животных.
Рекомендуемый уровень среднесуточной ПДК агидола-10 — 1 мг/м3, максимальной разовой — 2 мг/м3. Лимитирующий показатель — резорбтивное действие.

Ключевые слова:

  агидол-10, атмосферный воздух, предельно допустимая концентрация, хроническое воздействие

ЛИТЕРАТУРА

1. Временные методические указания по обоснованию ПДК загрязняющих веществ в атмосферном воздухе населенных мест. — М., 1989.

2. Куфлина С. А., Павлова Т. Н. Эвтаназия экспериментальных животных: Метод. рекомендации. — М., 1985.

3. Методические указания к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию ПДК избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны. — № 2196-80. — М., 1980.

4. Методические указания к постановке исследований по обоснованию предельно допустимых концентраций промышленных химических аллергенов в воздушной среде (рабочая зона и атмосфера). — М., 1991.

5. Методы экспериментального исследования по становлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования: Метод. указания. — № 1744-77. — М., 1978.

6. Пинигин М. А. Биологическая эквивалентность в решении методических задач гигиенического регламентирования атмосферных загрязнений: Автореф. дис. … д-ра мед. наук. — М., 1977.

7. Сидоренко Г. И., Андреещева Н. Т. // Материалы научных исследований по гигиене атмосферного воздуха, гигиене воды и санитарной охране водоемов. — М., 1972. — Ч. 1. — С. 100—106.

Найти тендер на закупку Игрушек в Тверской области — РТС-Тендер

Позиция Кол-во Ед. изм. Цена Сумма Доля
1. Шкаф для хранения детских игрушек 4 шт 16 238,10 ₽ 64 952,40 ₽ 5,22%
2. Шкаф для хранения детских игрушек 4 шт 13 776,00 ₽
55 104,00 ₽
4,43%
3. Мебель детская деревянная 6 шт 5 739,00 ₽ 34 434,00 ₽ 2,77%
4. Стул детский для дошкольных учреждений 14 шт 1 141,98 ₽ 15 987,72 ₽ 1,28%
5. Стул детский для дошкольных учреждений 20 шт 1 101,00 ₽ 22 020,00 ₽ 1,77%
6. Стул детский для дошкольных учреждений 10 шт 1 060,01 ₽ 10 600,10 ₽ 0,85%
7. Стул детский для дошкольных учреждений 40 шт 1 020,00 ₽ 40 800,00 ₽ 3,28%
8. Мебель детская деревянная 16 шт 4 542,00 ₽ 72 672,00 ₽ 5,84%
9. Стол обеденный школьный 1 шт 4 800,00 ₽ 4 800,00 ₽ 0,39%
10. Столы кухонные 4 шт 24 999,90 ₽
99 999,60 ₽
8,04%
11. Мебель кухонная прочая 4 шт 2 108,10 ₽ 8 432,40 ₽ 0,68%
12. Мебель кухонная прочая 4 шт 1 617,90 ₽ 6 471,60 ₽ 0,52%
13. Кровати деревянные для детей 40
шт
3 413,02 ₽ 136 520,80 ₽ 10,97%
14. Мебель детская деревянная 2 шт 8 480,00 ₽ 16 960,00 ₽ 1,36%
15. Мебель кухонная прочая 4 шт 3 018,90 ₽ 12 075,60 ₽
0,97%
16. Мебель кухонная прочая 4 шт 5 589,00 ₽ 22 356,00 ₽ 1,80%
17. Кровати деревянные для детей 40 шт 3 439,98 ₽ 137 599,20 ₽ 11,06%
18. Мебель металлическая хозяйственно-бытового назначения прочая, не включенная в другие группировки
2
шт 30 000,00 ₽ 60 000,00 ₽ 4,82%
19. Мебель металлическая хозяйственно-бытового назначения прочая, не включенная в другие группировки 2 шт 12 000,00 ₽ 24 000,00 ₽ 1,93%
20. Мебель детская деревянная 9 шт 3 086,94 ₽
27 782,46 ₽
2,23%
21. Мебель кухонная прочая 4 шт 6 894,90 ₽ 27 579,60 ₽ 2,22%
22. Мебель кухонная прочая 1 шт 6 000,00 ₽ 6 000,00 ₽ 0,48%
23. Мебель кухонная прочая 1
шт
20 000,40 ₽ 20 000,40 ₽ 1,61%
24. Стеллажи, стойки, вешалки металлические 1 шт 12 000,00 ₽ 12 000,00 ₽ 0,96%
25. Стеллажи, стойки, вешалки металлические 1 шт 12 000,00 ₽ 12 000,00 ₽ 0,96%
26. Стеллажи, стойки, вешалки металлические 2 шт 12 900,00 ₽ 25 800,00 ₽ 2,07%
27. Стеллажи, стойки, вешалки металлические 2 шт 15 000,00 ₽ 30 000,00 ₽ 2,41%
28. Стеллажи, стойки, вешалки металлические 1 шт 18 999,60 ₽ 18 999,60 ₽ 1,53%
29. Мебель детская деревянная 5 шт 23 296,08 ₽ 116 480,40 ₽ 9,36%
30. Мебель детская деревянная 2 шт 8 812,20 ₽ 17 624,40 ₽ 1,42%
31. Мебель детская деревянная 2 шт 11 124,00 ₽ 22 248,00 ₽ 1,79%
32. Мебель детская деревянная 2 шт в 20 фут эквив 5 916,00 ₽ 11 832,00 ₽ 0,95%
33. Мебель детская деревянная 2 шт 7 288,80 ₽ 14 577,60 ₽ 1,17%
34. Мебель детская деревянная 2 шт 6 160,20 ₽ 12 320,40 ₽ 0,99%
35. Изделия детской мебели прочие, не включенные в другие группировки 20 шт 1 168,98 ₽ 23 379,60 ₽ 1,88%
Соответствует запросу “Игрушки” 120 056,40 ₽ 9,65%

АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ МЕДИЦИНЫ ТРУДАСБОРНИК ТРУДОВ ИНСТИТУТА

https://doi.org/10.31089/978-5-907035-94-2-2018-1-501-507

Название статьи:

ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РИСКА ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ЗДОРОВЬЕ СЫРЬЯ В ПРОИЗВОДСТВЕ ЭМУЛЬГАТОРОВ И ПЕНООБРАЗОВАТЕЛЕЙ

Страницы:

с 501 по 507 стр.

Авторы:

Карпухина Е.А., Каютина С.В., Ткачева Т.А.

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт медицины труда имени академика Н.Ф. Измерова», 105275, г. Москва, Проспект Буденного, 31

Ключевые слова:

токсичность, опасность, характер действия

Резюме:

Цель исследований — оценка токсичности и опасности 3-оксо-2-(трифторметил)додекафтороктановой кислоты (ДК) — исходного сырья производства эмульгаторов полимеризации фторсодержащих мономеров. Экспериментальные исследования при разных путях поступления ДК в организм млекопитающих проведены согласно действующей нормативно-методической базе.

Вредный эффект оценивали по изменению показателей функции основных органов и систем, достоверность считали по критерию Стьюдента.

DL50 при введении в желудок составила 183 мг/кг, при внутрибрюшинном введении — 133 мг/кг (мыши), при накожной аппликации — 263 мг/кг (крысы). CL50 составила 7000 мг/м3 (мыши). Картина острого отравления не зависела от пути введения: кратковременное двигательное возбуждение, заторможенность, адинамия с сохранением реакции на внешние раздражители, одышка, ригидность хвоста, сукровичные выделения из носа при ингаляции. Животные погибали в течение 1-7 суток.

При однократном 4-час. ингаляционном воздействии были исследованы уровни 330, 107, 25 и 7 мг/м3 (метод газовой хроматографии).

Полученные экспериментальные данные позволили оценить потенциальный риск при воздействии ДК. По  параметрам острой токсичности вещество относится к группе умеренно опасных (3 класс), обладает резко выраженным действием на кожу и слизистые оболочки глаза. Limac установлен на уровне 25 мг/м3. Ведущим для ДК является раздражающее и прижигающее действие по месту контакта (слизистые, легкие, кожа, конъюнктива, роговица), лимитирующие признаки вредного действия при ингаляции — поражение нервной системы и органов дыхания с последующим нарушением функции печени и почек (политропный характер действия).

По аналогии с нормированными, ранее перфторированными насыщенными одноосновными алифатическими кислотами, а также с учетом расчетных методов, обоснован и утвержден в законодательном порядке ОБУВ для 3-оксо-2-(трифторметил)додекафтороктановой кислоты на уровне 1 мг/м3, пары, пометка «требуется специальная защита кожи и глаз».

Список литературы:
  1. Методические указания к постановке исследований для обоснования санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны. Утв. МЗ СССР 04.04.80 № 2163-80
  2. Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи. Методические указания Утв. МЗ СССР № 2102-79 от 01.11.79.
  3. Методические указания к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию ПДК избирательно действующих веществ в воздухе рабочей зоны. Утв. МЗ СССР № 2196-80 от 11.08.80.
  4. ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда. Вредные веще-ства. Классификация и общие требования безопасности. — М., 1976, 6 с.
  5. Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. М., Медицина, 1977, 240 с. (с.197, 159, 128)
  6. Лазарев Н.В., Левина Э.Н. (Ред.). / Вредные вещества в промышленности. Справочник для химиков, инженеров, врачей. В 3-х томах. Т.2. Изд.7, перераб. и доп. Л, Химия, 1976. — с. 4-25.
  7. ГН 2.2.5.1313-03. Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных ве-ществ в воздухе рабочей зоны. М.,2003
  8. Методические указания по установлению ориентировочных безопасных уровней воздействия вредных веществ в воздухе рабочей зоны. М.1985. 34 с, Утв. МЗ СССР № 4000-85 от 04.11.85

Что таится на дне Корсаковского порта? » ФБУЗ ЦГиЭ в Сахалинской области

Не принятые вовремя меры по устранению загрязнения приводят к тому, что нефтепродукты сорбируется взвешенными в воде органическими и минеральными частицами, водной растительностью и в конечном итоге попадают на морское дно. В зависимости от условий среды, свойств донных осадков и веществ, которые поступают в воду, отложения могут аккумулировать в себе химические соединения. Целью названной выше работы явилась токсиколого-гигиеническая оценка ранее не изученных многокомпонентных продуктов. Проведенный специалистами анализ химического состава донных отложений позволил установить, что они являются сложными многокомпонентными смесями со слабым специфическим запахом. В них было обнаружено различное процентное содержание никеля, кобальта, ртути, фенола, нефтепродуктов, свинца, хрома и бензапирена. Все эти вещества являются потенциальными факторами риска для здоровья человека и окружающей среды.
Острую токсичность исследуемых соединений определяли в соответствии с нормативным актом МУ 2163-80. Это – «Методические указания к постановке исследований для обоснования стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны». В частности, проводилось однократное введение в желудок белых крыс водных экстрактов донных отложений в дозе 6000 мг/кг. Далее наблюдение за крысами специалисты осуществляли в течение 10 дней, с регистрацией сроков гибели животных.
Одновременно определялась возможность острых смертельных отравлений при ингаляционном пути поступления вредных веществ. Их летучие компоненты попадали к подопытным животным при создании максимально возможной (насыщающей) концентрации, в условиях свободного испарения при температуре 20° и нормальном давлении. С этой целью чашки Петри с исследуемым веществом помещали в эксикатор емкостью 10 л сроком на 24 часа. После этого туда же высаживали мышей, которых здесь выдерживали в течение двух 2 часов.
В результате удалось установить, что изучаемые соединения в указанной дозе не вызывали гибели подопытных животных и клинических признаков отравления. Средняя смертельная доза (DL50) при введении в желудок составила DL50 > 6000 мг/кг.
В ходе совместной работы специалисты также выполнили исследования местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия. Эти работы проводились на белых мышах и крысах в соответствии с МУ № 2196- 80 – «Методическими указаниями к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно-допустимых концентраций избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны». Однократный контакт донных отложений с незащищенной поверхностью кожи животных не вызывал признаков раздражения, однако при повторном воздействии наблюдалась слабая эритема. При контакте со слизистой глаза признаков раздражения, а также явных и скрытых повреждений роговицы обнаружено не было. Не отмечено в ходе исследований гибели животных, а также каких-либо признаков общего отравления.
Изучение сенсибилизирующего действия проводили в соответствии с МУ 1.1.578-96 – «Требования к постановке исследований по обоснованию предельно-допустимых концентраций промышленных химических аллергенов в воздухе рабочей зоны и атмосферы». Гиперчувствительность замедленного действия специалисты выявляли, использую белых беспородных мышах. Для этого внутрикожно вводились донные отложения – в полном адъюванте Фрейнда. Результаты свидетельствуют об отсутствии аллергенного действия.
Таким образом, на основании полученных данных, установлено: донные отложения акватории морского порта г. Корсаков относятся к IV классу опасности (ГОСТ 12.1.007-76). Они не обладают кожно-резорбтивным и аллергенным действием, однако при длительном контакте с кожей оказывают слабое раздражающее действие.

Русский Гост | Нормативная библиотека — МУ 2196-80

Система обеспечения надежности и безопасности строительных площадок. Нагрузки и удары. стандарты проектирования

Язык: английский

Преобразователи мощности полупроводниковые. Условные обозначения

Язык: английский

Пожарная опасность текстильных изделий.Декоративный текстиль. Метод и классификация испытаний на воспламеняемость

Язык: английский

Топливо моторное. Методы определения облачности, температуры замерзания и охлаждения

Язык: английский

Трубы стальные бесшовные горячекатаные. Технические характеристики

Язык: английский

Железнодорожный подвижной состав.Нормы допустимого воздействия на железнодорожный путь и методы испытаний.

Язык: английский

Пруток и фасонные профили из углеродистой стали обыкновенного качества. Общие технические условия

Язык: английский

Жидкие нефтепродукты Потенциометрический метод определения меркаптановой серы

Язык: английский

Цветные металлы.Определение размера зерна расчетом пересечений зерен

Язык: английский

Система стандартов безопасности труда. Технологическое ультразвуковое оборудование. Требования безопасности

Язык: английский

Преобразователи мощности полупроводниковые до 5 кВ · А. Параметры

Язык: английский

Нефтепродукты.Методика определения температуры воспламенения в закрытом тигле

Язык: английский

Безопасность машин. Требования к обоснованию безопасности

Язык: английский

Нефтепродукты. Автомобильный бензин и авиационное топливо. Определение содержания камеди методом струйного испарения

Язык: английский

Топливо для авиационных турбин.Определение точки дыма

Язык: английский

Нефтепродукты. Метод определения содержания камеди в топливе струйным испарением

Язык: английский

Жидкие нефтепродукты. Определение типа углеводородов методом флюоресцентной индикаторной адсорбции

Язык: английский

Нефтепродукты.Определение коррозионной активности медной ленты

Язык: английский

Топливо авиационное. Метод испытания на загрязнение твердыми частицами

Язык: английский

Топливо авиационное. Определение точки замерзания автоматическим лазерным методом

Язык: английский

2196 Kendall Dr, Сан-Бернардино, CA 92407

Этот многоквартирный дом больше не рекламируется в LoopNet.com.

Hillside Village Apartments · Многосемейная недвижимость на продажу · 80 квартир

.photo-landscape: nth-child (2) {margin-top: 4px} .photo-portrait {height: 514px; width: 342.67px; margin-left: 4px} .map-tile {margin-left: 4px} .map-landscape {width: 342.67px} .map-portrait {width: 342.67px}]]>

Основные инвестиции

  • Доказанная возможность проведения реновации с добавленной стоимостью на 80 единиц
  • Благодаря быстро развивающимся отраслям здравоохранения и логистики, а также трем крупным университетам в радиусе 5 миль от объекта имеется более 150 000 рабочих мест
  • Медицинский центр Университета Лома Линда, известный как лидер в области здравоохранения, также находится рядом с почти 8000 сотрудников
  • Жители получают выгоду от стратегического местоположения недалеко от штата Калифорния Сан-Бернардино, что оказывает ежегодное экономическое воздействие на регион в размере 190 миллионов долларов США
  • Основные распределительные центры находятся в этом районе, включая Amazon, у которой есть 14 региональных складов
  • Пожалуй, лучшее место в Сан-Бернардино со средним семейным доходом более 77 000 долларов

Факты о собственности

Нет.Единицы измерения 80 Размер здания 66 400 швейцарских франков
Тип недвижимости Многосемейная Средняя вместимость 96%
Подтип свойства Квартира Нет.Рассказы 2
Квартира Стиль Сад Год постройки 1985 г.
Класс здания C Коэффициент парковки 1.64 / 1,000 SF
Размер лота 8,51 переменного тока Зона возможностей Нет

Удобства объекта

  • Кондиционер
  • Балкон
  • Посудомоечная машина
  • Утилизация
  • Место для хранения
  • Отопление

Удобства на объекте

  • Круглосуточный доступ
  • Фитнес-центр
  • Прачечная
  • Управляющий недвижимостью на Зоне
  • Номер объявления: 20818616
  • Дата создания: 01.09.2020
  • Последнее обновление:

Ссылки

Информация о смеси агрегатов

Описание №Единицы Ср. Аренда / Пн SF
1 + 1 32 $ 1,183 710
2 + 2 48 $ 1,400 910

Транспорт

Аэропорт

Международный аэропорт Онтарио

26 мин езды 23.8 миль

НАЛОГИ НА ИМУЩЕСТВО

Номера посылок

0261-231-13

  • 0261-231-14
  • 0261-231-15
  • 0261-231-16
  • 0261-231-17
Оценка улучшений 7 507 200 долл. США
Оценка земли 3 712 800 долл. США Общая оценка 11 220 000 долл. США

зонирование

Код зонирования RU-1, Сан-Бернардино

MIC2196 Лист данных компании Microchip Technology

Micrel, Inc.MIC2196

Сентябрь 2008 г. 10 M9999-092908

Контакт включения (контакт 3) имеет два пороговых уровня, позволяя

MIC2196 отключиться в микротоковом режиме или

выключить выход в режиме ожидания. Ниже 0,9 В,

устройство принудительно отключается от микропитания. Если значение на разрешающем выводе

находится в диапазоне от 0,9 до 1,5 В, выходной вентиль

отключен, но внутренняя схема получает питание от

, и напряжение на выводе плавного пуска принудительно понижается.Гистерезис

обычно составляет 135 мВ ниже порогового значения 1,5 В

, чтобы гарантировать, что деталь не будет колебаться при включении и выключении из-за пульсаций напряжения

на входе. Повышение разрешающего напряжения

выше порогового значения UVLO, равного 1,5 В, включает выходные драйверы

и позволяет конденсатору плавного пуска заряжаться. Разблокирующий контакт

можно подтянуть к VINA.

Генератор и синхронизация

Внутренний генератор является автономным и не требует внешних компонентов

.Максимальный рабочий цикл

MIC2196 составляет 85%.

Минимальный рабочий цикл становится важным в повышающем преобразователе

, когда входное напряжение приближается к выходному напряжению

. При более низких рабочих циклах входное напряжение может быть на

ближе к выходному напряжению без увеличения выходного напряжения на

регулирования. Минимальный рабочий цикл обычно составляет 7%.

Режим обратной связи по частоте включается, если напряжение на контакте

обратной связи (контакт 2) меньше 0.3В. При частоте

foldback частота генератора уменьшается на

примерно в 4.

Компоненты установки напряжения

Для MIC2196 требуются два резистора для установки выходного напряжения

, как показано на рисунке 5.

Контакт

6

Напряжение

Усилитель

VREF

1,245 В

MIC2196

R1

R2

Рисунок 5. Компоненты установки напряжения

Выходное напряжение определяется уравнением ниже:

R2 9000 1VV REFO + × =

Где: VREF для MIC2196 номинально равен 1.245В.

Более низкие значения сопротивления предпочтительны для предотвращения появления шума

на выводе VFB. Обычно рекомендуемое значение

для R1 составляет 10К.

Выбор конденсатора развязки

Конденсатор развязки 1 мкФ используется для стабилизации внутреннего регулятора

и минимизации шума на выводе VDD.

Размещение этого конденсатора имеет решающее значение для правильной работы

MIC2196. Он должен быть рядом с контактами заземления сигнала VDD и

и проложен с широким протравлением.Конденсатор

должен быть керамическим хорошего качества. Неправильное размещение

развязывающего конденсатора VDD вызовет джиттер

и / или колебания в форме сигнала переключения, как

, а также изменения предела перегрузки по току.

Керамический конденсатор не менее 1 мкФ требуется для

развязки VIN. Конденсатор следует разместить рядом с микросхемой

и подключить непосредственно между контактами 8 (VCC) и

6 (GND). Если VIN больше 8 В, используйте 4.Керамический конденсатор

емкостью 7 мкФ или 10 мкФ для развязки вывода VDD.

Расчет и рассмотрение КПД

КПД — это отношение выходной мощности к входной. Разница

рассеивается как тепло в повышающем преобразователе.

Значительные составляющие при малой выходной нагрузке:

• Ток питания вывода VIN, который включает в себя ток

, необходимый для переключения внешних полевых МОП-транзисторов

.

• Потери в сердечнике индуктора.

Для максимального повышения эффективности при малых нагрузках:

• Используйте полевой МОП-транзистор с низким зарядом затвора или полевой МОП-транзистор

наименьшего размера, которого все еще достаточно для максимального выходного тока

.

• Используйте ферритовый материал для сердечника индуктора, который

имеет меньшие потери в сердечнике, чем сердечник MPP или Iron Power

.

Значительный вклад в потери мощности при более высоких выходных нагрузках

(в приблизительном порядке величины):

• Резистивные временные потери в MOSFET

• Переходные потери при переключении в MOSFET

• Резистивные потери в индукторе

• Потери в резисторе считывания тока

• Потери в сопротивлении выходного конденсатора (из-за ESR конденсатора

)

Для минимизации потерь мощности при больших нагрузках:

• Используйте полевые МОП-транзисторы с низким сопротивлением логического уровня.

Умножение заряда затвора на сопротивление в открытом состоянии

дает добротность, обеспечивая хороший баланс

между коммутируемой и резистивной мощностью

рассеиваемой мощностью.

• Медленное время перехода и колебания сигналов напряжения и тока

рассеивают больше энергии

во время включения и выключения полевого МОП-транзистора с низким уровнем

. Чистая компоновка минимизирует паразитную индуктивность и емкость

в приводе затвора

и сильноточных путях.Это позволит

Technical Note TN2265: Устранение неполадок push-уведомлений

Описывает методы, которые можно использовать для решения проблем с отправкой и получением push-уведомлений (удаленных) в iOS и OS X.

Проблемы с получением push-уведомлений

Регистрация для Push Уведомления

Чтобы получать push-уведомления, приложение должно сначала зарегистрироваться в службе Apple Push Notification (APN или «служба push»). Регистрация состоит из четырех этапов:

  1. В iOS приложение запрашивает у пользователя разрешение на получение push-уведомлений, вызывая метод registerUserNotificationSettings: из UIApplication .

  2. Приложение вызывает метод registerForRemoteNotifications: для UIApplication (iOS) или метод registerForRemoteNotificationTypes: из NSApplication (OS X).

  3. Приложение реализует application: didRegisterForRemoteNotificationsWithDeviceToken: метод для UIApplicationDelegate (iOS) или NSApplicationDelegate (OS X) для получения уникального токена устройства, созданного службой push.

  4. Приложение реализует application: didFailToRegisterForRemoteNotificationsWithError: метод для UIApplicationDelegate (iOS) или NSApplicationDelegate (OS X) для получения ошибки в случае сбоя регистрации.

Приложение передает маркер устройства вашему провайдеру как не объектное двоичное значение. Провайдер — это ваш сервер, который доставляет динамический контент вашему приложению.

Зарегистрироваться для получения push-уведомлений несложно, но есть несколько важных деталей, о которых вам нужно знать.

Нет делегированных обратных вызовов

Когда установлено первое приложение с поддержкой push, iOS или OS X пытается установить постоянное сетевое соединение с сервисом push, которое будет совместно использоваться всеми приложениями с поддержкой push в системе. Если не вызывается ни один обратный вызов делегата application: didRegisterForRemoteNotificationsWithDeviceToken: или application: didFailToRegisterForRemoteNotificationsWithError: , это означает, что это соединение еще не установлено.

Это не обязательно состояние ошибки.Система может вообще не иметь подключения к Интернету, потому что она находится вне зоны действия вышек сотовой связи или точек доступа Wi-Fi, или она может находиться в режиме полета. Вместо того, чтобы рассматривать это как ошибку, ваше приложение должно продолжать работу в обычном режиме, отключая только те функции, которые зависят от push-уведомлений.

Имейте в виду, что доступность сети может часто меняться. После успешного постоянного подключения к службе push будет вызван один из ранее упомянутых методов делегата приложения.

В iOS push-уведомления по возможности используют сотовую сеть передачи данных, даже если устройство в настоящее время использует Wi-Fi для других сетевых действий, таких как просмотр веб-страниц или электронная почта. Однако служба push вернется к Wi-Fi, если услуга сотовой передачи данных недоступна.

Если ваше устройство iOS способно использовать сотовую сеть передачи данных, убедитесь, что у него есть активный тарифный план сотовой передачи данных. Отключите Wi-Fi в настройках и посмотрите, можете ли вы по-прежнему просматривать веб-страницы, например, с помощью Safari.С другой стороны, если служба push использует Wi-Fi, любые брандмауэры между вашим устройством или компьютером и Интернетом должны разрешать трафик TCP на порт 5223 и обратно.

Примечание: Существует отдельное постоянное соединение с push сервис для каждой среды. Операционная система устанавливает постоянное соединение с изолированной средой для сборок разработки, в то время как специальные сборки и сборки распространения подключаются к производственной среде.

Ошибка обратного вызова делегата

При первом запуске приложения с поддержкой push-уведомлений пользователя спрашивают, хотят ли они получать push-уведомления для этого приложения.Если приложение даже не предлагает возможность получения push-уведомлений, скорее всего, в нем отсутствует код aps-environment (в iOS) или com.apple.developer.aps-environment (в OS X). право подписи. Xcode берет это право из профиля подготовки, используемого при создании приложения, и контролирует, к какой среде push приложение будет подключаться, чтобы получать удаленные уведомления.

Если приложение iOS работает на устройстве или если приложение является приложением Mac, метод ошибки application: didFailToRegisterForRemoteNotificationsWithError: будет вызван, если права подписи кода для доступа к службе push недействительны.Если вы не реализовали этот метод в своем приложении, вы должны сделать это как способ проверки наличия прав aps-environment (iOS) или com.apple.developer.aps-environment (OS X) в время выполнения.

При использовании Xcode для отправки приложения Xcode повторно подписывает его, используя идентификатор подписи кода распространения и связанный профиль обеспечения. Таким образом, подпись отправленного приложения и его содержимое могут отличаться от того, что находится в архиве Xcode.

Чтобы проверить подпись приложения, отправляемого в App Store:

  1. В Xcode Organizer вместо загрузки в App Store…, выполните Экспорт … и затем Сохранить для развертывания в магазине приложений для iOS или Mac. Это создаст локальную копию приложения, которая будет отправлена ​​в App Store.

  2. Когда вас попросят выбрать команду разработчиков, выберите команду, которую вы используете при загрузке в App Store.

  3. Когда появится сводный лист, откройте треугольник раскрытия в разделе «Двоичные» и «Права», чтобы увидеть права.

Проверьте, существует ли aps-environment (iOS) или com.Показано разрешение apple.developer.aps-environment (OS X).

Примечание: Это полезный элемент, который нужно проверить в сборках вашего дистрибутива перед их отправкой в ​​App Store.

Если права доступа aps-environment или com.apple.developer.aps-environment отсутствуют, проверьте, какой профиль обеспечения указан на сводном листе. Щелкните серую стрелку справа от имени профиля, чтобы отобразить его в Finder.

Перетащите профиль в TextEdit, чтобы вы могли просматривать его содержимое и искать Права.Если вы не видите aps-environment или com.apple.developer.aps-environment в разрешениях, значит, вы либо не настроили свой идентификатор приложения для производственных push-уведомлений, либо не обновили подготовку к распространению. profile с момента настройки идентификатора вашего приложения.

Вероятно, вы создали профиль обеспечения распространения до того, как настроили идентификатор приложения для push-уведомлений в своей учетной записи разработчика. Или. возможно, профиль обеспечения распространения, установленный на вашем компьютере сборки, старше, чем тот, который указан в вашей учетной записи.В этом случае удалите тот, который находится на машине сборки, перейдите в Xcode> Preferences …> Accounts, выберите свою команду и нажмите View Details …. На появившемся листе нажмите Download All.

Дополнительные сведения о настройке приложения для push-уведомлений см. В разделе «Настройка push-уведомлений». Ключевыми моментами являются то, что у вас должен быть явный идентификатор приложения и профиль обеспечения распространения, который ссылается на этот идентификатор приложения. Если у вас уже есть явный идентификатор приложения, включите его для push-уведомлений, включив возможность push-уведомлений в Xcode.

После того, как у вас будет установлен профиль обеспечения распространения в вашей системе сборки с правильным правом на push-уведомления, вам нужно будет перестроить приложение и повторно отправить его в магазин в качестве обновления. Вы можете запросить ускоренное рассмотрение, используя эту форму.

Регистрация прошла успешно, но уведомления не получены

Если ваше приложение зарегистрировано в службе push, но не получает уведомления, проблема может быть либо на стороне устройства / компьютера, либо на стороне поставщика.Вот несколько вещей, которые нужно проверить на стороне устройства / компьютера.

Устройство или компьютер, возможно, потеряли постоянное подключение к службе push и не могут подключиться повторно. Попробуйте выйти из приложения и перезапустить его, чтобы увидеть, завершится ли регистрация в следующий раз. (На iOS 4 и более поздних версиях на устройствах, поддерживающих многозадачность, вам нужно будет принудительно закрыть приложение из списка недавних.) Если регистрация не завершена, iOS или OS X не смогли восстановить постоянное соединение. Вы можете устранить эту проблему, как описано в двух предыдущих разделах.

Ваше приложение могло отправить провайдеру неверный токен устройства. Ваше приложение всегда должно запрашивать токен устройства, регистрируясь в службе push каждый раз при ее запуске. Не храните токен устройства из своего приложения и не пытайтесь использовать его повторно, потому что токен может измениться. Затем ваш провайдер должен передать этот же токен службе push.

Примечание: Служба push знает, какое приложение должно получать уведомление, на основе атрибута User ID в вашем сертификате TLS / SSL.iOS или OS X передаст уведомление приложению с CFBundleIdentifier , соответствующим этому атрибуту.

Получены некоторые уведомления, но не все

Если вы отправляете несколько уведомлений на одно устройство или компьютер в течение короткого периода времени, служба push отправит только последнее.

Вот почему. Устройство или компьютер подтверждает получение каждого уведомления. Пока служба push не получит это подтверждение, она может только предполагать, что устройство или компьютер по какой-то причине перешло в автономный режим, и сохраняет уведомление в очереди качества обслуживания (QoS) для повторной доставки в будущем.Задержка в двусторонней сети, конечно же, является важным фактором.

Как описано в Руководстве по программированию локальных и удаленных уведомлений, очередь QoS содержит одно уведомление для каждого приложения на устройство или компьютер. Если служба получает другое уведомление до того, как будет отправлено то, что находится в очереди, новое уведомление перезаписывает предыдущее.

Если полезные данные уведомления содержат ключ для доступа к содержимому, ваше приложение получит уведомление, если iOS или OS X сочтут это энергосберегающим.Если бюджет энергии или данных для устройства был превышен, ваше приложение не будет больше получать уведомления с ключом Content-available до тех пор, пока бюджет не будет сброшен. Это происходит один раз в день и не может быть изменено пользователем или разработчиком. Этот дроссель отключен, если приложение запускается из Xcode, поэтому обязательно протестируйте свое приложение, запустив его с устройства, чтобы получить тот же пользовательский интерфейс, который будет у ваших клиентов.

Все это указывает на то, что намерение состоит в том, что уведомление указывает приложению, что что-то интересное изменилось у поставщика, и приложение должно связаться с поставщиком, чтобы получить подробности.Уведомления не должны содержать данных, которые также недоступны где-либо еще, и они также не должны иметь состояния.

Любое push-уведомление, которое не было доставлено немедленно, было поставлено в очередь для повторной доставки в будущем, поскольку ваше устройство не было подключено к службе. «Немедленно», конечно, необходимо учитывать задержку вашего соединения. Особые случаи превышают 60 секунд, так как в этот момент истекает время ожидания APN.

Наблюдение за сообщениями о состоянии push

Если эти советы не решают проблему, вы можете включить дополнительные сообщения от демона APNs на устройстве или компьютере.

Включение push-сообщений о состоянии в iOS

Чтобы включить ведение журнала в iOS, установите профиль конфигурации PersistentConnectionLogging.mobileconfig на свое устройство, поместив файл на веб-сервер и загрузив его с помощью Safari на свое устройство, или отправив его как вложение электронной почты и открытие вложения в Почте на вашем устройстве. Вам будет предложено установить «APS / PC Logging». Загрузите профиль конфигурации, щелкнув сопутствующий файл в правом верхнем углу этого технического примечания.

После установки профиля конфигурации полностью выключите устройство, а затем снова включите его. Затем снова запустите приложение, наблюдая за консолью с помощью Xcode Organizer. Или синхронизируйте свое устройство с iTunes, и журнал будет сохранен в папке ~ / Library / Logs / CrashReporter / MobileDevice / / PersistentConnection / .

Ищите сообщения от процесса apsd . В идеале вы увидите Connected to courier x-courier.sandbox.push.apple.com , где x - небольшое целое число. Это указывает на то, что устройство успешно установило постоянное подключение к службе push.

С другой стороны, вы можете увидеть Отключение в ответ на сбой подключения. Это означает, что постоянное соединение не удалось. В этом случае цель состоит в том, чтобы выяснить, что происходит в вашей сети, что вызывает сбой подключения. Убедитесь, что брандмауэры не блокируют TCP-трафик на порте 5223.

Сообщение устанавливает игнорируемые темы для подключения означает, что пользователь выбрал отключение уведомлений для приложений, перечисленных в сообщении.За этим последует Отправка сообщения фильтра для включенных хэшей , где iOS фактически отправляет включенные и проигнорированные темы в APN.

Сообщение Не удалось проанализировать полезные данные сообщения JSON. указывает, что словарь JSON в полезных данных уведомления находится в недопустимом формате JSON.

Сообщение Получено сообщение для включенной темы означает, что устройство получило уведомление от службы push.

В OS X некоторые сообщения журнала ссылаются на хэш CFBundleIdentifier вашего приложения. Вот как вычислить этот хэш SHA-1:

 $ echo -n "<ваш CFBundleIdentifier>" | openssl dgst -sha1 

Если в журнале все выглядит нормально, но вы по-прежнему не получаете уведомления, попробуйте выключить переключатель «Уведомления» в настройках, а затем снова включить его. Это попытается восстановить постоянное соединение устройства с APN.

Чтобы удалить профиль конфигурации, выберите «Настройки»> «Основные»> «Профили», нажмите «Ведение журнала APS / ПК», затем нажмите «Удалить». Полностью выключите устройство и снова включите его.

Включение сообщений о статусе push в OS X

Чтобы получить текущее состояние демона APNs в OS X, используйте эту команду:

 $ /System/Library/PrivateFrameworks/ApplePushService.framework/apsctl status 

Чтобы включить вход в OS X, используйте следующие команды:

 $ sudo touch / Library / Logs / apsd.log 
 $ sudo defaults write /Library/Preferences/com.apple.apsd APSWriteLogs -bool TRUE 
 $ sudo defaults write /Library/Preferences/com.apple.apsd 
 $ sudo killall apsd 

Журналы хранятся в /Library/Logs/apsd.log .

Проблемы с отправкой push-уведомлений

Если ваше приложение не получает push-уведомления и все выглядит правильно на устройстве или компьютере, вот некоторые вещи, которые следует проверить на стороне сервера.

Проблемы при подключении к службе push

Одна из возможных причин - ваш сервер не может подключиться к службе push. Это может означать, что у вас нет цепочки сертификатов, необходимой для TLS / SSL для проверки подключения к службе. Помимо удостоверения SSL (сертификат и связанный с ним закрытый ключ), созданного Member Center, вы также должны установить корневой сертификат на своем провайдере. Это позволяет TLS / SSL проверять полную цепочку сертификатов сервера APN.

Корневой сертификат зависит от того, какой API APN вы используете.Если вы используете API провайдера HTTP / 2 APN, корневой сертификат - это корневой сертификат GeoTrust Global CA. Вы можете скачать это с сайта GeoTrust.

Если вы используете API поставщика двоичных файлов, корневой сертификат - это корневой сертификат Entrust.net Certification Authority (2048). Вы можете скачать его с сайта Entrust.

Также убедитесь, что эти удостоверения установлены в правильном месте для вашего провайдера и что у вашего провайдера есть разрешение на их чтение.

Вы можете протестировать рукопожатие TLS / SSL с помощью команды OpenSSL s_client , как это для API провайдера HTTP / 2 APNs:

 $ openssl s_client -connect api.development.push.apple.com:443 -cert YourSSLCertAndPrivateKey.pem -debug -showcerts -CAfile server-ca-cert.pem 

Важно: API-интерфейс поставщика APN HTTP / 2 требует TLS 1.2. TLS 1.2 требует OpenSSL 1.0.1 или новее. Версия OpenSSL 0.9.x, поставляемая с OS X, не поддерживает TLS 1.2 или HTTP / 2.

Или для API поставщика двоичных файлов:

 $ openssl s_client -connect gateway.sandbox.push.apple.com:2195 -cert YourSSLCertAndPrivateKey.pem -debug -showcerts -CAfile server-ca-cert.pem 

где server-ca-cert.pem - корневой сертификат Entrust CA (2048).

Убедитесь, что идентификатор SSL и имя хоста являются правильными для тестируемой среды push-уведомлений. Вы можете настроить свой идентификатор приложения в своей учетной записи разработчика отдельно для тестовой среды и производственной среды. Если вы не запрашиваете универсальный push-сертификат, вам будет выдан отдельный идентификатор для каждой среды.

Использование SSL-идентификатора изолированной программной среды для попытки подключения к производственной среде вернет ошибку следующего вида:

КРИТИЧЕСКАЯ | 14: 48: 40.304061 | Исключение, создающее ssl-соединение с Apple: [Errno 1] _ssl.c: 480: error: 14094414: SSL-подпрограммы: SSL3_READ_BYTES: сертификат оповещения sslv3 отозван

Примечание: Точная ошибка будет зависеть от конкретной операционной среды.

Одна из распространенных ошибок OpenSSL - ошибка проверки : число = 20: невозможно получить сертификат местного эмитента .

Это сообщение означает, что один или несколько сертификатов с сервера не могут быть проверены, поскольку сертификаты издателя (корневые или промежуточные) не найдены.

Аргумент CAfile для s_client указывает доверенные корневые сертификаты, которые будут использоваться для проверки сертификата сервера. Доверенный корневой сертификат для push-серверов - это корневой сертификат GeoTrust или Entrust, упомянутый ранее.

Если вы не можете даже открыть соединение с APN, возможно, срок действия вашего сертификата TLS / SSL APN истек.Эти сертификаты действительны в течение одного года, но производственные сертификаты APN могут быть продлены в любое время.

Другая возможность состоит в том, что вы подключались к APN слишком много раз, и дальнейшие подключения были временно заблокированы. Как описано в Руководстве по программированию локальных и удаленных уведомлений, разработчики должны открывать соединение и оставлять его открытым. Если соединение открывается и закрывается неоднократно, APN будет рассматривать это как атаку отказа в обслуживании и блокировать соединения на определенный период времени.

Срок действия этой временной блокировки истечет, если в течение часа не будет предпринято никаких попыток подключения.

Еще одна возможность состоит в том, что существует брандмауэр, блокирующий доступ к портам, используемым APN. См. Подробности в разделе «Диапазон IP-адресов, используемый службой push-уведомлений». Попробуйте запустить на своем сервере команду telnet , чтобы проверить, может ли сервер достичь APN, например:

 $ telnet 1-courier.push.apple.com 5223 
 $ telnet gateway.sandbox.push.apple.com 2195 
 $ telnet gateway.push.apple.com 2195 

Обработка искаженных уведомлений

Простой формат уведомлений разрывает соединение, если служба push получает уведомление, которое некорректно в некотором роде. Ваш провайдер может увидеть это как ошибку EPIPE или сломанный канал в ответ на отправку уведомления. С другой стороны, расширенный формат уведомления отправит ответ об ошибке с более подробной информацией о том, что было не так с уведомлением, прежде чем разорвать соединение.Убедитесь, что ваш провайдер правильно улавливает и обрабатывает эти условия.

Многие серверы push-уведомлений не обрабатывают ответы об ошибках или разорванные соединения надежно. Простой способ проверить это - намеренно отправить уведомление токену устройства среды песочницы, если ваш сервер обменивается данными с рабочей средой push-уведомлений. Это должно вернуть неверный ответ токена и разорвать соединение. Чтобы узнать больше о проверке ответов об ошибках от службы push, см. Раздел «Пропускная способность push-уведомлений» и «Проверка ошибок».

Самая распространенная проблема - неверный токен устройства. Если токен поступил из среды песочницы, например, когда вы тестируете сборку для разработки внутри компании, вы не можете отправить его в службу push-уведомлений. Каждая среда push-уведомлений будет выпускать разные токены для одного и того же устройства или компьютера. Если вы отправите токен устройства в неправильную среду, служба push увидит это как недопустимый токен и отклонит уведомление.

Маркер устройства также действителен только для того приложения, которое получило его во время регистрации.Если вы попытаетесь использовать этот токен для отправки уведомления другому приложению (другой идентификатор пакета), он будет отклонен как недействительный.

Примечание: Рекомендуется запускать отдельный экземпляр вашего провайдера для каждой среды push, чтобы избежать проблемы с отправкой токенов устройств в неправильную среду.

Пользователь удалил ваше приложение со своего устройства или компьютера. Вы должны проверять службу обратной связи не реже одного раза в день на предмет наличия токенов устройств, которые больше не активны.

Другие возможные проблемы могут заключаться в отправке полезной нагрузки длиной более 2048 байт, возможно, ваши полезные данные имеют неправильный формат или, возможно, ваш словарь JSON имеет неправильный синтаксис.

Случайное отключение во время простоя вашего провайдера - не о чем беспокоиться; просто восстановите соединение и продолжайте. Если один из push-серверов не работает, механизм балансировки нагрузки прозрачно направит ваше новое соединение на другой сервер, предполагая, что вы подключаетесь по имени хоста, а не по статическому IP-адресу.

Использование расширенного формата уведомлений

Если ваш провайдер использует исходный простой формат уведомлений, рассмотрите возможность миграции на более новый API. Новые API-интерфейсы обеспечивают больший контроль над приоритетом и сроком действия уведомлений, а также возвращают более подробные ответы об ошибках, если проблема возникает с конкретным уведомлением.

Подробнее об API провайдера HTTP / 2 APN можно прочитать в Руководстве по программированию локальных и удаленных уведомлений.

Проблемы с использованием службы обратной связи

Если вы удалите приложение со своего устройства или компьютера, а затем отправите ему push-уведомление, вы ожидаете, что токен устройства будет отклонен, а недействительный токен устройства должен появиться в службе обратной связи .Однако, если это было последнее приложение с включенной функцией push на устройстве или компьютере, оно не будет отображаться в службе обратной связи. Это связано с тем, что удаление последнего приложения разрывает постоянное соединение с службой push до того, как можно будет отправить уведомление об удалении.

Эту проблему можно обойти, оставив на устройстве или компьютере хотя бы одно приложение с поддержкой push-уведомлений, чтобы поддерживать постоянное соединение. Чтобы поддерживать постоянное соединение с производственной средой, просто установите любое бесплатное приложение с поддержкой push из App Store, после чего вы сможете удалить свое приложение и увидеть, как оно отображается в службе обратной связи.

Напомним, что каждая среда push-уведомлений имеет собственное постоянное соединение. Поэтому, чтобы поддерживать постоянное подключение к среде песочницы, установите другое приложение с поддержкой push-разработки.

Другие советы и рекомендации

Пропускная способность push-уведомлений и проверка ошибок

Для использования APN нет ограничений на размер или размер пакета. В пресс-релизе iOS 6.1 говорится, что с момента своего создания APN отправили более 4 триллионов push-уведомлений. На WWDC 2012 было объявлено, что APN отправляют 7 миллиардов уведомлений ежедневно.

Если вы видите пропускную способность ниже 9000 уведомлений в секунду, ваш сервер может выиграть от улучшенной логики обработки ошибок.

Вот как можно проверить наличие ошибок при использовании расширенного формата уведомлений. Продолжайте писать, пока запись не закончится. Если поток снова готов к записи, повторно отправьте уведомление и продолжайте. Если поток не готов к записи, посмотрите, доступен ли поток для чтения.

Если да, прочтите все, что доступно из потока. Если вы получаете нулевые байты обратно, соединение было закрыто из-за ошибки, такой как недопустимый командный байт или другая ошибка синтаксического анализа.Если вы получили шесть байтов назад, это ответ об ошибке, который вы можете проверить по коду ответа и идентификатору уведомления, вызвавшего ошибку. Вам нужно будет снова отправлять каждое уведомление, следующее за этим.

После того, как все было отправлено, выполните последнюю проверку на наличие ответа об ошибке.

Может потребоваться некоторое время, чтобы разорванное соединение вернулось от APN к вашему серверу только из-за нормальной задержки. Можно отправить более 500 уведомлений, прежде чем запись не удастся из-за разрыва соединения.Приблизительно 1700 записей уведомлений могут завершиться ошибкой только потому, что канал заполнен, поэтому просто повторите попытку в этом случае, когда поток снова будет готов к записи.

Теперь вот где компромиссы становятся интересными. Вы можете проверять ответ об ошибке после каждой записи и сразу же обнаружите ошибку. Но это приводит к значительному увеличению времени, необходимого для отправки пакета уведомлений.

Токены устройства почти все должны быть действительными, если вы правильно их записали и отправляете в правильную среду.Поэтому имеет смысл оптимизировать, предполагая, что сбои будут редкими. Вы получите гораздо лучшую производительность, если дождетесь сбоя записи или завершения пакета, прежде чем проверять ответ об ошибке, даже если подсчитаете время для повторной отправки отброшенных уведомлений.

Ничто из этого на самом деле не относится к APN, это применимо к большинству программирования на уровне сокетов.

Если выбранный вами инструмент разработки поддерживает несколько потоков или межпроцессное взаимодействие, у вас может быть поток или процесс, постоянно ожидающий ответа об ошибке, и пусть основной поток или процесс-отправитель знает, когда он должен отказаться и повторить попытку.

Диапазон IP-адресов, используемый службой push

Провайдеры push, устройства iOS и компьютеры Mac часто находятся за брандмауэрами. Чтобы отправлять уведомления, вам необходимо разрешить входящие и исходящие TCP-пакеты через порт 443 для API поставщика HTTP / 2 или порт 2195 для API поставщика двоичных файлов.

Чтобы получить доступ к службе обратной связи, вам необходимо разрешить входящие и исходящие TCP-пакеты через порт 2196.

Устройства и компьютеры, подключающиеся к push-сервису через Wi-Fi, должны будут разрешать входящие и исходящие TCP-пакеты через порт 5223, или порт 443 для резервного копирования, когда устройства не могут получить доступ к APN на порту 5223.

Системы OS X также должны будут разрешать входящий и исходящий TCP-трафик через порт 80.

Диапазон IP-адресов для службы push может быть изменен; ожидается, что провайдеры будут подключаться по имени хоста, а не по IP-адресу. Служба push использует схему балансировки нагрузки, которая дает другой IP-адрес для того же имени хоста. Однако весь блок адресов 17.0.0.0/8 назначен Apple, поэтому вы можете указать этот диапазон в правилах брандмауэра.

Сброс оповещения о разрешениях push-уведомлений в iOS

Когда приложение с поддержкой push-уведомлений впервые регистрируется для push-уведомлений, iOS спрашивает пользователя, хотят ли они получать уведомления для этого приложения.После того, как пользователь ответил на это предупреждение, оно больше не отображается, если устройство не будет восстановлено или приложение не было удалено как минимум в течение дня.

Если вы хотите смоделировать первый запуск своего приложения, вы можете оставить приложение неустановленным на день. Вы можете достичь последнего, не дожидаясь дня, выполнив следующие действия:

  1. Удалите приложение с устройства.

  2. Полностью выключите устройство и снова включите его.

  3. Перейдите в «Настройки»> «Основные»> «Дата и время» и установите дату вперед на день или более.

  4. Снова полностью выключите устройство и снова включите его.

Просмотр запроса на подпись сертификата (CSR)

Частью настройки идентификатора приложения для push-уведомлений является создание запроса на подпись сертификата или CSR. Иногда полезно просматривать содержимое CSR, что можно сделать с помощью команды OpenSSL req :

 $ openssl req -noout -text -in server.csr 
Дата Примечания 28.07.2016

Обновлены ссылки на Руководство по программированию локальных и удаленных уведомлений.

25.07.2016

Обновлено для iOS 8 и новее. Обновлен профиль ведения журнала.

20.07.2016

Обновлено для iOS 8 и новее. Обновлен профиль ведения журнала.

Обновлено для iOS 8 и новее. Обновлен профиль ведения журнала.

2014-10-01

Обновлен максимальный размер полезной нагрузки.

24.09.2013

Незначительные редакционные изменения.

2013-09-17

Обновлен профиль конфигурации PersistentConnectionLogging и инструкции по сбросу предупреждения о разрешениях push. Прочие мелкие изменения.

29.03.2013

Фиксированная ссылка на профиль конфигурации PersistentConnectionLogging.

2013-03-27

Расширенный охват проверки прав подписи кода и ответов об ошибках.

26.09.2011

Обновите ссылку на корневой сертификат Entrust.Замените профиль конфигурации ведения журнала apsd подписанной версией.

2011-06-08

Добавлена ​​информация о push-уведомлениях в Mac OS X Lion.

29.09.2010

Новый документ, описывает шаги, которые разработчики могут предпринять для устранения неполадок при отправке и получении push-уведомлений.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Ионы металлов как воспалительные инициаторы остеолиза

  • 1.

    Оливер Б., Вимхерст Дж. А., Кларк И. М., Донелл С. Т. (2012) Современные концепции остеолиза.J Bone Jt Surg Br 94-B: 10–15

    Артикул Google Scholar

  • 2.

    Singh JA, Vessely MB, Harmsen WS, Schleck CD, Melton LJ, Kurland RL, Berry DJ (2010) Популяционное исследование тенденций в использовании тотальной артропластики тазобедренного сустава и тотального коленного сустава, 1969–2008 . Mayo Clin Proc 85 (10): 898–904

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 3.

    Espigares JLN, Torres EH (2008) Анализ затрат и результатов замены сустава: данные государственной больницы Испании.Gac Sanit 22 (4): 337–343

    Статья Google Scholar

  • 4.

    Talmo CT, Aghazadeh M, Bono JV (2012) Периоперационные осложнения после тотального эндопротезирования сустава. Clin Geriatr Med 28 (3): 471–487

    Статья PubMed Google Scholar

  • 5.

    Talmo CT, Robbins LE, Bono JV (2010) Полная замена сустава у пожилого пациента. Clin Geriatr Med 26 (3): 517–529

    Статья PubMed Google Scholar

  • 6.

    Langlois J, Hamadouche M (2011) Новые животные модели остеолиза частиц износа. Int Orthop 35: 245–251

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 7.

    Gallo J, Goodman SB, Lostak J, Janout M (2012) Преимущества и недостатки керамики при керамической тотальной артропластике тазобедренного сустава: обзор. Биомед Пап Мед Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 156 (3): 204–212

    Статья PubMed Google Scholar

  • 8.

    Charnley J (1971) Текущее состояние полной замены тазобедренного сустава. Ann Rheum Dis 30: 560

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 9.

    Sadoghi P, Schröder C, Fottner A, Steinbrück A, Betz O, Müller PE, Jansson V, Andreas Hölzer A (2012) Кривая применения и выживаемости тотальных артропластик тазобедренного сустава: систематический сравнительный анализ с использованием всемирной артропластики тазобедренного сустава регистры. Int Orthop 36: 2197–2203

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 10.

    Kurtz S, Ong K, Lau E, Mowat F, Halpern M (2007) Прогнозы первичной и повторной артропластики тазобедренного и коленного суставов в США с 2005 по 2030 год. J Bone Jt Surg Am 89 (4): 780–785

    Статья Google Scholar

  • 11.

    Schwab LP, Marlar J, Hasty KA, Smith RA (2011) Макрофагальная реакция на большое количество частиц титана является цитотоксической и опосредованной ЦОГ-2, и на нее не влияет содержание эндотоксина в частицах или очищающая обработка.Интернет-библиотека Wiley

  • 12.

    Ingham E, Fisher J, Stone MH (2003) Износ исторических полиэтиленов в тотальных протезах бедра. Биомеханический успех и биологический провал. Hip Int 13 (1): 17–27

    CAS PubMed Google Scholar

  • 13.

    Бек Р.Т., Иллингворт К.Д., Салех К.Дж. (2011) Обзор перипротезного остеолиза при тотальном артропластике сустава: акцент на факторах хозяина и будущих направлениях. Онлайн-библиотека Wiley

  • 14.

    Sargeant A, Goswami T (2006) Патофизиологические аспекты имплантатов бедра. J Surg Orthop Adv 15 (2): 111–112

    PubMed Google Scholar

  • 15.

    Сарджант А., Госвами Т. (2007) Имплантаты бедра - бумага VI - концентрации ионов. Mater Des 28: 155–171

    Статья CAS Google Scholar

  • 16.

    Cooper HJ, Ranawat AS, Potter HG, Foo LF, Koob TW, Ranawat CS (2010) Ранний реактивный синовит и остеолиз после тотальной артропластики бедра.Clin Orthop Relat Res 468: 3278–3285

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 17.

    Hallab NJ, Jacobs JJ (2009) Биологические эффекты обломков имплантата. Bull NYU Hosp Jt Dis 67 (2): 182–188

    PubMed Google Scholar

  • 18.

    Десаи М.А., Бэнкрофт Л.В. (2008) Перипротезный остеолиз. Ортопедия 31 (6): 1–5

    Статья. Google Scholar

  • 19.

    Fang Q, Wang H, Zhu S, Zhu Q (2011) N-ацетил-l-цистеин ингибирует расшатывание протеза, вызванное частицами износа. J Surg Res 168: 163–172

    Статья Google Scholar

  • 20.

    Галло Дж., Гудман С.Б., Конттинен Ю.Т., Раска М. (2012) Болезнь частиц: биологические механизмы перипротезного остеолиза при тотальном эндопротезировании тазобедренного сустава. Врожденный иммунитет 1–12

  • 21.

    Галло Дж., Слоуф М., Гудман С.Б. (2010) Взаимосвязь износа полиэтилена с размером, распределением и количеством частиц: возможный фактор, объясняющий риск остеолиза после тотального эндопротезирования тазобедренного сустава.Wiley InterScience

  • 22.

    Callaghan JJ, Rosenberg AG, Rubash HE (2007) Бедро взрослых 2 (2): 1505–1506

  • 23.

    Schwarz EM, Looney RJ, O'Keefe RJ (2000) Anti -TNF-A терапия как клиническое вмешательство при перипротезном остеолизе. Arthritis Res 2: 165–168

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 24.

    Hjorth MH, Soballe K, Jakobsen SS, Lorenzen ND, Mechlenburg L, Stilling M (2014) Отсутствует связь между ионами металлов в сыворотке крови и фиксацией имплантата при тотальном артропластике тазобедренного сустава металл-металл с большой головкой.Acta Orthop 85 (4): 355–362

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 25.

    Хосман А.Х., Мей Х.К., Булстра С.К., Бюшер Х.Дж., Нейт Д. (2010) Влияние износа металла на металл на иммунную систему хозяина и инфекцию при артропластике тазобедренного сустава. Acta Orthopaedica 81 (5): 526–534

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 26.

    Grosse S, Haugland HK, Lilleng P, Ellison P, Hallan G, Hol PJ (2014) Частицы износа и ионы из цементированных и нецементированных протезов бедра на основе титана - гистологический и химический анализ извлекаемого материала.J Biomed Mater Res B Appl Biomater

  • 27.

    Minoda Y, Kobayashi A, Iwaki H, Iwakiri K, Inori F, Sugama R, Ikebuchi M, Kadoya Y, Takaoka K (2009) Анализ частиц износа полиэтилена in vivo после тотальное эндопротезирование коленного сустава: влияние улучшенных материалов и конструкций. J Bone Jt Surg Am 91 (Приложение 6): 67–73

    Статья Google Scholar

  • 28.

    Shon WY, Gupta S, Biswal S, Han SH, Hong SJ, Moon JG (2009) Связь остеолиза таза с рентгенограммами и износом полиэтилена.J Arthroplast 24: 743–750

    Статья Google Scholar

  • 29.

    Cadosch D, Chan E, Gautschi OP, Filgueira L (2009) Металл не инертен: роль ионов металла, высвобождаемых биокоррозией, в концепциях асептического ослабления тока. Wiley InterScience

  • 30.

    Галло Дж., Каминек П., Тиха В., Зигакова П., Дитмар Р. (2002) Болезнь частиц. Комплексная теория перипротезного остеолиза: обзор. Biomed Pap 146 (2): 21–28

    Статья Google Scholar

  • 31.

    Sinha R, Peris M (2001) Эффекты остеолиза и асептического расшатывания. http://www.medscape.org

  • 32.

    Yadav J, Samelko L, Gilvar P, McAllister K, Hallab NJ (2013) Остеокласты теряют врожденную воспалительную реактивность на металл и остатки полимерного имплантата по сравнению с моноцитами / макрофагами. Orthop J 18 (7): 605–613

    Google Scholar

  • 33.

    Gustafson K, Jakobsen SS, Lorenzen ND, Thyssen JP, Johansen JD, Bonefeld CM, Stilling M, Baad-Hansen T, Søballe K (2014) Выделение металлов и аллергия на металл после полной замены тазобедренного сустава с шлифовкой поверхности по сравнению с традиционной гибридный протез.Acta Orthop 85 (4): 348–354

    Артикул PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 34.

    Галло Дж., Раска М., Мразек Ф., Петрек М. (2008) Ремоделирование костей, болезнь частиц и индивидуальная восприимчивость к перипротезному остеолизу. Physiol Res 57: 339–349

    CAS PubMed Google Scholar

  • 35.

    Эммануэль А.Р., Бергин К.М., Келли Г.Е., Маккой Г.Ф., Возняк А.П., Куинлан Дж.Ф. (2014) Влияние наклона вертлужной впадины на уровни ионов металлов после артропластики тазобедренного сустава металлом по металлу.J Arthroplast 29 (1): 186–191

    Статья Google Scholar

  • 36.

    Hallab NJ, Caicedo M, McAllister K, Skipor A, Amstutz H, Jacobs JJ (2013) Бессимптомные проспективные и ретроспективные когорты с артропластикой тазобедренного сустава металлом показывают, что приобретенная реактивность лимфоцитов зависит от уровня ионов металлов на групповая основа. J Orthop Res 31 (2): 173–182

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 37.

    Ingham E, Fisher J (2005) Роль макрофагов в остеолизе полной замены сустава. Биоматериалы 26: 1271–1286

    Артикул CAS PubMed Google Scholar

  • 38.

    Tomazic-Jezic VJ, Merritt K, Umbreit TH (2001) Значение типа и размера частиц биоматериала на фагоцитоз и распределение тканей. J Biomed Mater Res 55: 523–529

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 39.

    Chan E, Cadosch D, Gautschi OP, Sprengel K, Filgueira L (2011) Влияние ионов металлов на лимфоциты человека и образование титан-специфичных Т-лимфоцитов. J Appl Biomater Biomech 9: 137–143

    CAS PubMed Google Scholar

  • 40.

    Cadosch D, Sutanto M, Chan E, Mhawi A, Gautschi OP, Katterfeld B, Simmen HP, Filgueira L (2009) Поглощение титана, индукция экспрессии RANK-L и усиленная пролиферация Т-лимфоцитов человека .Wiley InterScience

  • 41.

    Caicedo MS, Desai R, McAllister K, Reddy A, Jacobs JJ, Hallab NJ (2008) Растворимые и твердые частицы металлов имплантата из сплава Co-Cr-Mo активируют путь передачи сигналов об опасности воспаления в макрофагах человека: a новый механизм реактивности обломков имплантата. Wiley InterScience

  • 42.

    Гудман С.Б., Ма Т (2010) Хемотаксис клеток, вызванный частицами износа при замене суставов. Биоматериалы 31: 5045–5050

    Артикул PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 43.

    Niki Y, Matsumoto H, Suda Y, Otani T, Fujikawa K, Toyama Y, Hisamori N, Nozue A (2003) Ионы металлов индуцируют выработку цитокинов, резорбирующих костную ткань, через окислительно-восстановительный путь в синовиоцитах и ​​макрофагах костного мозга. Биоматериалы 24: 1447–1457

    Артикул CAS PubMed Google Scholar

  • 44.

    Ritchlin CT, Schwarz EM, O’Keefe RJ, Looney RJ (2004) RANK, RANKL и OPG при воспалительном артрите и перипротезном остеолизе.J Musculoskel Neuron Interact 4 (3): 276–284

    CAS Google Scholar

  • 45.

    Merkel KD, Erdmann JM, McHugh KP, Abu-Amer Y, Ross FP, Teitelbaum SL (1999) Фактор некроза опухоли-a опосредует остеолиз ортопедических имплантатов. Am J Pathol 154: 203–210

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 46.

    Wang JY, Wicklund BH, Gustilo RB, Tsukayama DT (1996) Ионы титана, хрома и кобальта модулируют высвобождение связанных с костями цитокинов моноцитами / макрофагами человека in vitro.Биоматериалы 17 (23): 2233–2240

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 47.

    Hanawa T (2004) Высвобождение ионов металлов из металлических имплантатов. Mater Sci Eng 24: 745–752

    Статья Google Scholar

  • 48.

    Hallab NJ, Skipor A, Jacobs JJ (2003) Межфазная кинетика сплавов имплантатов на основе титана и кобальта в сыворотке крови человека: высвобождение металлов и образование биопленок.Wiley Periodicals

  • 49.

    Cadosch D, Chan E, Gautschi O, Meagher J, Zellweger R, Filgueira L (2008) Ионы титана IV индуцировали дифференцировку остеокластов человека и увеличивали резорбцию кости in vitro. Wiley InterScience

  • 50.

    Chan EP, Mhawi A, Clode P, Saunders M, Filgueira L (2009) Влияние ионов титана (IV) на дендритные клетки, полученные из моноцитов человека. Металломика 1: 166–174

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 51.

    Mishra PK, Wu W, Rozo C, Hallab NJ, Benevenia J, Gause WC (2011) Титановые частицы микрометрового размера могут вызывать мощные ответы типа Th3 через TLR4-независимые пути. Иммунология 187: 6491–6498

    Статья CAS Google Scholar

  • 52.

    Haleem-Smith H, Argintar E, Bush C, Hampton D, Postma WF, Chen FH, Rimington T, Lamb J, Tuan RS (2012) Биологические реакции мезенхимальных стволовых клеток человека на частицы обломков титанового износа.J Orthop Res 30 (6): 853–863

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 53.

    Lohmann CH, Dean DD, Oster GK, Casasola D, Buchhorn GH, Fink U, Schwartz Z, Boyan BD (2002) Керамические частицы и частицы ПММА по-разному влияют на фенотип остеобластов. Биоматериалы 23: 1855–1863

    Артикул CAS PubMed Google Scholar

  • 54.

    Карр А.М., Дестейгер Р. (2008) Остеолиз у пациентов с артропластикой тазобедренного сустава металлом по металлу.Anz J Surg 78: 144–147

    Статья PubMed Google Scholar

  • 55.

    Hallab NJ, Caicedo M, Epstein R, McAllister K, Jacobs JJ (2009) Реактивность in vitro к металлам имплантата демонстрирует зависимую от человека связь с активацией как Т-клеток, так и В-клеток. Wiley InterScience

  • 56.

    Hallab NJ, Caicedo M, Finnegan A, Jacobs JJ (2008) Реактивность лимфоцитов типа Th2 к металлам у пациентов с тотальной артропластикой бедра.J Orthop Surg Res 3: 6

    Артикул PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 57.

    Griem P, Gleichmann E (1995) Аутоиммунитет, индуцированный ионами металлов. Иммунология 7: 831–838

    CAS Google Scholar

  • 58.

    Caicedo MS, Pennekamp PH, McAllister K, Jacobs JJ, Hallab NJ (2009) Растворимые ионы в большей степени, чем частицы обломков имплантата из кобальтового сплава, индуцируют экспрессию костимулирующих молекул моноцитов и высвобождение провоспалительных цитокинов, критически важных для индуцированной металлом реактивности лимфоцитов. .Wiley InterScience

  • 59.

    Catelas I, Petit A, Zukor DJ, Antoniou J, Huk OL (2003) Секреция TNF-α и смертность макрофагов, вызванная ионами кобальта и хрома, качественный анализ апоптоза in vitro. Биоматериалы 24: 383–391

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 60.

    Patton MS, Lyon TDB, Ashcroft GP (2008) Уровни системных ионов металлов у пациентов с интрамедуллярными ногтями. Acta Orthop 79 (6): 820–825

    Статья PubMed Google Scholar

  • 61.

    Savarino L, Maci GS, Greco M, Baldini N, Giunti A (2007) Высвобождение ионов металлов из устройств для фиксации переломов: потенциальный маркер отказа имплантата. Wiley InterScience

  • 62.

    Sidaginamale RP, Joyce TJ, Lord JK, Jefferson R, Blaine PG, Nargol AVF, Langton DJ (2013) Анализ ионов металлов в крови - это эффективный инструмент скрининга для выявления плохо функционирующих металлических подшипников. поверхности. Bone Jt Res 2 (5): 84–95

    Статья CAS Google Scholar

  • 63.

    Delaunay C, Petit I, Learmonth ID, Oger P, Vendittoli PA (2010) Полная артропластика тазобедренного сустава с металлическими подшипниками: проблема высвобождения ионов кобальта и хрома. Orthop Traumatol Surg Res 96: 894–904

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 64.

    Lin HY, Bumgardner JD (2004) Биокоррозия сплава имплантата Co-Cr-Mo in vitro клетками макрофагов. J Orthop Res 22: 1231–1236

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 65.

    Шривастава Р., Упрети Р.К., Сет П.К., Чатурведи UC (2002) Влияние хрома на иммунную систему. FEMS Immunol Med Microbiol 34: 1–7

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 66.

    Hallab NJ, Vermes C, Messina C, Roebuck KA, Glant TT, Jacobs JJ (2002) Зависящие от концентрации и состава эффекты ионов металлов на человеческие остеобласты MG63. J Biomed Mater Res 60 (3): 420–433

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 67.

    Vermes C, Glant TT, Hallab NJ, Fritz EA, Roebuck KA, Jacobs JJ (2001) Потенциальная роль остеобластов в развитии перипротезного остеолиза: обзор реакций остеобластов in vitro на остатки износа, продукты коррозии, цитокины и факторы роста. J Arthroplast 16: 95–100

    Статья CAS Google Scholar

  • 68.

    Wang JY, Wicklund BH, Gustilo RB, Tsukayama DT (1997) Металлы для протезирования вмешиваются в функции клеток остеобластов человека in vitro.Clin Orthop Relat Res 339: 216–226

    Статья PubMed Google Scholar

  • 69.

    Николс К.Г., Пулео Д.А. (1997) Влияние ионов металлов на образование и функцию остеокластических клеток in vitro. J Biomed Mater Res 35: 265–271

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 70.

    Burton L, Paget D, Binder NB, Bohnert K, Nestor BJ, Sculco TP, Santambrogio L, Ross FP, Goldring SR, Purdue PE (2012) Воспалительный остеолиз, опосредованный остатками ортопедического износа, частично опосредуется NALP3 активация инфламмасом.Онлайн-библиотека Wiley

  • 71.

    Lewis JB, Wataha JC, Randol TM, McCloud VV, Lockwood PE (2003) Ионы металлов изменяют индуцированное липополисахаридом связывание NFkb в моноцитах. Wiley Periodicals, Inc.

  • 72.

    Wei S, Siegal GP (2008) Механизмы модуляции воспалительного остеолиза: обзор терапевтических целей. Pathol Res Pract 204: 695–706

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 73.

    Рао А.Дж., Гибон Э., Ма Т., Яо З., Смит Р.Л., Гудман С.Б. (2012) Ревизионная замена сустава, частицы износа и поляризация макрофагов. Acta Biomaterialia 8: 2815–2823

    Статья PubMed Central CAS PubMed Google Scholar

  • 74.

    Catelas I, Jacobs JJ (2010) Биологическая активность частиц износа. Instr Course Lect 59: 3–16

    PubMed Google Scholar

  • 75.

    Ингам Э., Фишер Дж. (2000) Биологические реакции на обломки износа при полной замене суставов. Proc Inst Mech Eng H 214 (1): 21–37

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 76.

    Meneghini RM, Hallab NJ, Jacobs JJ (2005) Биология альтернативных опорных поверхностей при тотальном артропластике суставов. Instr Course Lect 54: 481–493

    PubMed Google Scholar

  • 77.

    Николау В.С., Эдвардс М.Р., Богох Э., Шемитч Э.Х., Уодделл Дж. П. (2012) Проспективное рандомизированное контролируемое исследование, в котором сравниваются три альтернативные опорные поверхности при первичной полной замене тазобедренного сустава. J Bone Jt Surg Br 94 (4): 459–465

    Артикул CAS Google Scholar

  • 78.

    Sato T, Nakashima Y, Akiyama M, Yamamoto T, Mawatari T, Itokawa T, Ohishi M, Motomura G, Hirata M, Iwamoto Y (2012) Износостойкие характеристики сильно сшитых и отожженных ультра- высокомолекулярный полиэтилен против керамических головок при тотальном эндопротезировании тазобедренного сустава.J Orthop Res 30 (12): 2031–2037

    Статья CAS PubMed Google Scholar

  • 79.

    Clarke IC (1992) Роль керамических имплантатов. дизайн и клинический успех с керамико-керамическими подшипниками для протезирования бедра. Clin Orthop Relat Res 282: 19–30

    PubMed Google Scholar

  • 80.

    Дамблтон Дж. Х., Мэнли М. Т., Эдидин А. А. (2002) Обзор литературы о связи между скоростью износа и остеолизом при тотальном эндопротезировании тазобедренного сустава.J Arthroplast 17 (5): 649–661

    Статья Google Scholar

  • 81.

    Nho Jh, Park JS, Song US, Kim WJ, Suh YS (2013) Перелом керамической головки при тотальном артропластике сустава керамика на полиэтилене. Yonsei Med J 54 (6): 1550–1553

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 82.

    Bouras T, Repantis T, Fennema P, Kororessis P (2013) Низкое асептическое расшатывание и частота ревизий при тотальном артропластике тазобедренного сустава Zweymuller-Plus с керамико-керамическими подшипниками.Eur J Orthop Surg Traumatol

  • 83.

    Nehme A, Maalouf G, Tricoire JL, Giordano G, Chiron P, Puget J (2003) Влияние алендроната на перипротезную потерю костной ткани после цементной первичной тотальной артропластики бедра: проспективное рандомизированное исследование. Rev Chir Orthop Reparatrice Appar Mot 89 (7): 593–598

    CAS PubMed Google Scholar

  • 84.

    Arabmotlagh M, Pilz M, Warzecha J, Rauschmann M (2009) Изменения минеральной плотности бедренной перипротезной кости через 6 лет после лечения алендронатом после тотального эндопротезирования тазобедренного сустава.J Orthop Res 27 (2): 183–188

    Статья PubMed Google Scholar

  • 85.

    Tapaninen TS, Venesmaa PK, Jurvelin JS, Miettinen HJA, Kröger HPJ (2010) Алендронат снижает перипротезную потерю костной ткани после несцементированной первичной тотальной артропластики тазобедренного сустава - 5-летнее наблюдение за 16 пациентами. Scand J Surg 99: 32–37

    CAS PubMed Google Scholar

  • 86.

    Khurjekar KS, Vidyadhara S, Dheenadhayalan J, Rajasekaran S (2006) Спонтанный быстрый остеолиз при болезни Педжета после внутренней фиксации подвертельного перелома бедренной кости.Singap Med J 47 (10): 897–900

    CAS Google Scholar

  • 87.

    Кинов П., Тивчев П., Доукова П., Лейтнер А. (2006) Влияние ризедроната на метаболизм костей после тотального эндопротезирования тазобедренного сустава: проспективное рандомизированное исследование. Acta Orthop Belg 72 (1): 44–50

    PubMed Google Scholar

  • 88.

    Васудеван А., ДиКарло Е.Ф., Райт Т., Чен Д., Фигги М.П., ​​Голдринг С.Р., Мандл Л.А. (2012) Клеточная реакция на остатки износа протезов различается у пациентов с ревматоидным артритом и без него.Arthritis Rheum 64 (4): 1005–1014

    Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 89.

    Hagman S, Kirsch J, Kretzer J, Moradi B (2013) Анализ воздействия ионов металлов на культуры лимфоцитов человека in vitro. Ортопад 42 (8): 643–650

    Артикул Google Scholar

  • Наноматериалы | Бесплатный полнотекстовый | Воздействие наночастиц TiO2 увеличивает инфицирование эпителиальных клеток кишечника Listeria monocytogenes

    1.Введение

    Наночастицы диоксида титана (TiO 2 НЧ) являются одними из наиболее часто используемых наночастиц во многих областях жизни, таких как защита окружающей среды, строительная техника, медицина, сельское хозяйство, пищевая и косметическая промышленность [1]. TiO 2 представляет собой полупроводниковый материал n-типа, характеризующийся показателем преломления как в ультрафиолетовом, так и в видимом диапазоне. Это широко используемый материал в фотокаталитических приложениях для различных продуктов, таких как краски, кремы для загара, пьезоэлектрические устройства, сенсибилизированные красителем солнечные элементы и газовые сенсорные устройства [2].Благодаря своим фотокаталитическим свойствам наночастицы TiO 2 могут довольно легко генерировать активные формы кислорода (АФК), что приводит к хорошим антибактериальным свойствам [3]. НЧ титана также обладают многообещающими свойствами в качестве агентов для фотодинамической терапии, систем-носителей лекарств и радиосенсибилизаторов. Исследования в этих областях в основном сосредоточены на методах допирования и функционализации для повышения активности TiO 2 НЧ и минимизации побочных эффектов [4]. В пищевых продуктах TiO 2 НЧ являются распространенными добавками, которые усиливают белый цвет и яркость пищевых продуктов. продукты, включая сыры, соусы, обезжиренное молоко, мороженое и даже кондитерские изделия и жевательные изделия в качестве покрытия [5,6,7,8,9].Его содержание в конфетах, жевательных резинках, шоколаде и продуктах с белой глазурью очень велико, достигая 2,5 мг Ti / г [5,8]. TiO 2 Применение NP в пищевой промышленности вызывает множество споров вокруг безопасности пищевых продуктов. По данным Европейского агентства по безопасности пищевых продуктов (EFSA), которое в 2016 году провело последнее исследование безопасности E171 (диоксида титана), значения концентрации и воздействие на людей TiO 2 НЧ через пищевые продукты не вызывают опасений. Тем не менее, Международное агентство по изучению рака (IARC) классифицировало TiO 2 как потенциальный канцерогенный агент, основываясь на животных моделях тестов на ингаляционную токсичность [10,11,12].Кроме того, некоторые исследования показали, что наночастицы могут вызывать дефицит макро- и микроэлементов, приводящий к расстройствам пищеварения и неадекватному усвоению компонентов пищи [13]. После перорального воздействия НЧ попадают в желудочно-кишечный тракт, что является важным путем всасывания TiO 2 НЧ. Тесты in vivo показали, что НЧ TiO 2 , принятые перорально или ингаляционно, накапливаются в легких, пищеварительном тракте, печени, сердце, селезенке, почках и сердечной мышце [14]. Было высказано предположение, что НЧ TiO 2 могут перемещаться как через эпителий подвздошной кишки, так и через пейеровы бляшки, что приводит к повреждению и, скорее всего, хронической недостаточности кишечного эпителия [15], что также наблюдается в тонком кишечнике мышей после перорального желудочного зондирования. введение TiO 2 НЧ [16].Ранее мы продемонстрировали [17], что НЧ TiO 2 , вводимые перорально в низкой дозе крысам, проникают в слизистую кишечника и влияют на эндокринную систему самцов, вызывая более высокую продукцию тестостерона, вероятно, ответственную за увеличение размеров ворсинок. Кроме того, воздействие наночастиц желудочно-кишечного тракта свидетельствовало о гистопатологическом повреждении печени и повреждении миокарда [18], а также токсическом повреждении мозга мышей [19,20]. На эндокринную систему также может влиять наноразмерный Ti, TiO 2 , была продемонстрирована модуляция репродуктивно-эндокринной иммунной системы после многократного перорального приема у взрослых крыс [21].Токсичность НЧ TiO 2 также была изучена на предмет антимикробной активности из-за сильного окислительного потенциала, вызванного УФ-активацией. Однако приложение для доставки пищевых добавок и лекарств [22] не требует активации. Сообщается, что в отсутствие УФ-излучения TiO 2 токсичен в первую очередь для эукариотических клеток, а не для бактерий [23,24,25], за исключением очень высоких концентраций [26]. Возможная проблема может возникнуть, когда клетки подвергаются воздействию частиц и бактерий одновременно.Среди бактерий пищевого происхождения Listeria monocytogenes представляет серьезную проблему для здоровья населения и безопасности пищевых продуктов [27,28,29,30]. Эти организмы нацелены на людей с ослабленной иммунной системой, таких как беременные женщины, новорожденные, пожилые люди и хозяева с ослабленным иммунитетом. Адаптация L. monocytogenes зависит от процесса нескольких хорошо скоординированных молекулярных событий, необходимых для противодействия защитным силам хозяина и облегчения инфицирования различных клеток-хозяев, включая эпителиальные клетки кишечника и макрофаги [31].Ранее мы сообщали, что взаимодействие между не облученными УФ излучением НЧ TiO 2 и L. monocytogenes привело к увеличению образования биопленок [32], тогда как интернализация бактерий в кишечных клетках снижалась с увеличением концентрации наночастиц. Поскольку как НЧ TiO 2 , так и Listeria monocytogenes переносятся через пищу, мы предположили, что повышенное образование биопленок в кишечнике может защищать бактерии от действия антимикробных агентов; более того, планктонные клетки могут постоянно выделяться из биопленки, чтобы повторно инфицировать одного и того же хозяина или передаваться.

    В настоящее время нет данных о модуляции патогенной бактериальной инфекции наноразмерным материалом, адсорбируемым слизистой оболочкой кишечника. Ежедневное потребление TiO 2 НЧ было оценено как высокое, поскольку этот наноматериал присутствует в различных пищевых продуктах; Таким образом, разумно предположить, что непрерывное воздействие на кишечник TiO 2 НЧ может создать микросреду, благоприятную для бактериальных инфекций.

    Чтобы проверить, могут ли НЧ TiO 2 влиять на эффективность бактериальной инфекции, мы исследовали инвазивность Listeria monocytogenes в эпителиальных клетках кишечника, предварительно обработанных НЧ TiO 2 .

    2. Материалы и методы

    2.1. Суспензии наночастиц

    TiO 2 НЧ анатаза с первичным размером <25 нм (Sigma-Aldrich Company Ltd., Gillingham, Dorset, UK) диспергировали либо в воде Milli-Q, либо в модифицированной минимально необходимой среде Дульбекко (DMEM) (HyClone Laboratories , Южный Логан, Юта, США) без сыворотки. Суспензии обрабатывали ультразвуком с помощью ультразвукового зонда (Vibracell, Sonics & Materials Inc, Ньютаун, Коннектикут, США, 750 Вт, 20 кГц, амплитуда 20%, 6.Диаметр зонда 5 мм) в условиях контролируемой температуры в течение 13 мин для уменьшения агломерации.

    2.2. Характеристика

    TiO 2 Суспензии НЧ (36 мкг / мл) были охарактеризованы методом динамического светорассеяния (DLS) для определения распределения по размерам, состояния агломерации и заряда поверхности. Затем суспензии объемом 1 мл анализировали с помощью Zetasizer Ultra (Malvern Instruments, Малверн, Великобритания), и для каждой из них было выполнено 10 измерений. Шаг уравновешивания при 37 ° C был установлен на 2 мин, число считываний и продолжительность каждого измерения были установлены автоматически.Учитывались данные о распределении интенсивности. Гидродинамический диаметр (Z-среднее) и индекс полидисперсности (PDI) определяли с помощью ZS Xplorer Software (Malvern Instruments, Malvern, UK).

    Измерения дзета-потенциала TiO 2 суспензии НЧ в DMEM (pH 7,4) были выполнены для оценки стабильности препарата НЧ и заряда поверхности. Измерения проводили в трех экземплярах на 750 мкл суспензии НЧ с использованием протокола автоматического измерения Zetasizer Ultra.

    Кроме того, наночастицы TiO 2 были охарактеризованы с помощью электронной микроскопии с использованием просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) (EM 208, FEI Company, Эйндховен, Нидерланды) и сканирующей электронной микроскопии (SEM) (FE-SEM Quanta Inspect, FEI Company, Эйндховен). , Нидерланды), оснащенный системой Soft Imaging System для определения формы, первичного размера, распределения по размерам и состояния агломерации, как описано Ammendolia et al.(2014) [32].
    2.3. Бактериальный штамм
    Listeria monocytogenes Штамм EGD-e [33] (серогруппа 1/2а) был получен из Американской коллекции типовых культур (АТСС) (Манассас, Вирджиния, США). Бактерии культивировали в агаре для инфузии мозга и сердца (BHI) (DIFCO Laboratories, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США) и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. Ночную культуру штамма получали инокуляцией 6 мл бульона BHI стерильной петлей рабочего раствора и инкубировали при 37 ° C в течение 18–20 часов для достижения клеточной нагрузки 1 × 10 8 Колониеобразующих единиц. (КОЕ) / мл.Гемолитическую активность измеряли, как описано Alonzo et al. (2009) [34]. Гемолитические единицы (HU) рассчитывали после установки 0 HU в качестве активности отрицательного контроля и 100 HU для общего гемолиза, наблюдаемого в образцах эритроцитов, лизированных 0,01% додецилсульфатом натрия (SDS).
    2.4. Клеточная линия

    Клетки линии колоректальной аденокарциномы человека HT-29 были получены из ATCC (Манассас, Вирджиния, США) (номер по каталогу: ATCC ® HTB-38 ™) и выращены в DMEM (HyClone Laboratories, Южный Логан, Юта, США). США) с добавлением инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FCS) (10% об. / Об.) И L-глутамина (2 ммоль / л).Для тестов на лактатдегидрогеназу (ЛДГ) и 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид (МТТ) клетки HT-29 высевали в 96-луночные планшеты и обрабатывали различными концентрациями TiO 2 НП. Перед всеми экспериментами для обеспечения диспергирования частиц TiO 2 НЧ предварительно диспергировали в культуральной среде с помощью ультразвука (средняя эффективность / пик 90/180 Вт, +4 ° C) в течение 45 мин.

    2,5. TiO
    2 NP Цитотоксичность
    2.5.1. Анализ утечки лактатдегидрогеназы (ЛДГ)

    Высвобождение ЛДГ определяли с использованием набора для определения цитотоксичности (плюс) (LDH) от Roche Diagnostics (Мангейм, Германия).Клетки (20 × 10 4 клеток / мл), засеянные в 24-луночные планшеты, обрабатывали TiO 2 НЧ (0, 1 и 20 мкг / см 2 , что соответствует 0, 1,8 и 36 мкг / мл) в течение 6, 24 и 48 часов. Через определенные промежутки времени культуральную среду собирали, добавляли раствор субстрата и планшеты инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Высвобождение ЛДГ измеряли с помощью считывающего устройства для микропланшетов (Perkin-Elmer, Бостон, Массачусетс, США) с использованием длины волны 490 нм. Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах. Цитотоксичность выражали в процентах относительно базального высвобождения ЛДГ необработанными контрольными клетками, установленного как 0%.

    2.5.2. Анализ на 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид (МТТ)

    Клетки HT-29 (1 × 10 5 клеток / мл) выращивали в 96-луночных микропланшетах для 24 ч в атмосфере 5% CO 2 и обработанные НЧ (0, 1 и 20 мкг / см 2 ). После инкубации при 37 ° C в течение 6, 24 и 48 ч в каждую лунку добавляли раствор MTT (Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури, США) (5 мг / мл), и планшеты инкубировали еще 3 раза. час Диметилсульфоксид (100 мкл) добавляли в каждую лунку после удаления супернатантов для растворения кристаллов формазана.Оптическую плотность определяли при 570 нм (A570) с помощью считывающего устройства для микропланшетов спектрофотометра / флуориметра (Perkin-Elmer, Бостон, Массачусетс, США). Жизнеспособность клеток выражали как процент от контрольных необработанных образцов, принятый за 100%.

    2.6. Бактериальная адгезия и инвазия после предварительной обработки клеток TiO
    2 НЧ

    Монослои клеток, обработанные TiO 2 НЧ (0, 1 и 20 мкг / см 2 ) в течение разного времени (6 и 24 ч) , были инфицированы бактериями для тестов на адгезию и инвазию после смывания избытка наночастиц.

    Для анализа адгезии бактериальные культуры, содержащие логарифмически выращенные бактерии с множественностью заражения (MOI) 100 бактерий / клетку, инкубировали с клетками в течение 1 ч при 37 ° C. После этого периода инкубации клетки тщательно промывали, лизировали ледяным 0,1% Triton X-100 и высевали на триптон-соевый агар (TSA) (DIFCO Laboratories, Франклин-Лейкс, Нью-Джерси, США) для определения прилипания бактерий.

    Для анализа инвазии после промывания в каждую лунку добавляли 1 мл свежей среды, содержащей 50 мкг / мл гентамицина, и выдерживали в течение 1 ч при 37 ° C.Затем клетки лизировали, как для анализа адгезии.

    Эффективность адгезии выражали как процент извлеченных инокулированных КОЕ. Процент адгезии бактерий к клеткам HT-29 в присутствии НЧ оценивали по отношению к проценту адгезии L. monocytogenes в отсутствие НЧ, принятому за 100%.

    Эффективность инвазии выражалась в процентах от инокулированных бактерий, которые были восстановлены. Процент инвазии бактерий в клетки HT-29 в присутствии НЧ оценивали по отношению к проценту инвазии L.monocytogenes в отсутствие НЧ считается за 100%.

    2.7. Выживаемость бактерий после предварительной обработки клеток TiO
    2 NPs

    Для анализов внутриклеточного роста инкубация инфицированных клеток в среде, содержащей гентамицин, была продлена на дополнительный период 3 часа и еще 24 часа при 37 ° C ( со свежесбавленным 15 мкг / мл гентамицина) с последующим лизисом и подсчетом КОЕ. Выживаемость бактерий выражалась как процент КОЕ, рассчитанный через 24 часа после инфицирования, деленный на количество КОЕ через 3 часа после заражения.

    2,8. Измерение продукции внутриклеточных активных форм кислорода (ROS).

    Карбокси-2 ’, 7’-дихлородигидрофлуоресцеиндиацетат (H 2 DCFDA) (Molecular Probe, Eugene, OR, USA) использовали для мониторинга образования ROS. Клетки HT-29, инкубированные с TiO 2 НЧ (0, 1 и 20 мкг / см 2 ) в течение 6 и 24 часов в стандартных условиях, обрабатывали 40 мкМ карбокси-H 2 DCFDA в течение 30 минут. при 37 ° С. Затем измеряли флуоресценцию 2 ', 7'-дихлорфлуоресцеина (DCF) при возбуждении / испускании при 488/535 нм с помощью флуоресцентного ридера для микропланшетов (Perkin-Elmer, Бостон, Массачусетс, США).Клетки без наночастиц и 100 мкМ H 2 O 2 использовали в качестве отрицательного и положительного контролей соответственно. Предварительно обработанные клетки с наночастицами, инкубированные в течение разного времени, также инфицировали штаммом EGD-e при MOI 100 бактерий / клетку и оценивали на продукцию ROS через 3 и 24 часа после инфицирования, как описано выше.

    2.9. Окрашивание актином и E-кадгерином

    Для визуализации актиновых нитей, клеток, выращенных на 8-камерных предметных стеклах (Lab-Tek, Nunc, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) в течение 48 часов при 37 ° C в 5% CO. 2 атмосферы, инкубировали с выбранными концентрациями TiO 2 НЧ (1 и 20 мкг / см 2 ) в течение 2 и 6 часов при 37 ° C.Затем клетки фиксировали путем инкубации с 3,7% параформальдегидом в фосфатно-солевом буфере (PBS) в течение 5 минут при комнатной температуре, промывали PBS и проницали путем инкубации со 100 мкл PBS, содержащего 0,1% Triton X-100, в течение 10 минут при комнатной температуре. . После промывания PBS клетки инкубировали в темноте в течение 20 минут при комнатной температуре с флуоресцеин-5-изотиоцианат (FITC) -фаллоидином (Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури, США), разведенным в PBS. После обширной промывки PBS стеклянные предметные стекла помещали в глицерин и наблюдали с помощью микроскопа Olimpus BX53 (Waltham, MA, USA), оснащенного Tucsen Camera GT H series и Tucsen ISCapture 5.1.1 программное обеспечение.

    Кроме того, клетки HT-29, обработанные, как описано выше, окрашивали на экспрессию E-кадгерина с использованием кроличьих поликлональных антител против E-кадгерина человека (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Даллас, Техас, США) и инкубировали при 37 ° С. C в течение 40 мин. После 1 ч дальнейшей инкубации с FITC-конъюгированным козьим антителом против кроличьего IgG (Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури, США) клетки промывали PBS и устанавливали для визуализации флуоресценции.

    2.10. Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЕМ)

    Клетки помещали в 12-луночные планшеты для тканевых культур и обрабатывали 1 и 20 мкг / см 2 наночастиц TiO 2 .Через 2, 6 и 24 ч инкубации обработанные клетки фиксировали 2,5% глутаровым альдегидом в какодилатном натрий-буфере (0,1 М, pH 7,2) при комнатной температуре в течение 1 ч, затем фиксировали 1% -ным раствором тетроксида осмия, обезвоживали в этаноле градуированной концентрации. и залит эпоксидной смолой. Вырезали ультратонкие срезы 80 нм, помещали на медные сетки и окрашивали цитратом свинца и насыщенным водным уранилацетатом. Образцы исследовали с помощью просвечивающего электронного микроскопа Philips 280S при 80 кВ.

    TiO 2 Клетки, подвергшиеся воздействию NP (2, 6 и 24 ч), также инфицировали логарифмически выращенным EGD-e (MOI: 100) и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C.Затем добавляли среду, содержащую гентамицин, на дополнительное время инкубации 3 часа. Затем инфицированные клетки фиксировали и обрабатывали для электронной микроскопии, как описано выше.

    2.11. Статистический анализ

    Все результаты были рассчитаны на основе данных по крайней мере трех независимых экспериментов и выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD). Во всех экспериментах инфицированные образцы, обработанные NP и предварительно обработанные NP, сравнивали с соответствующими контролями. Статистический анализ проводился с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующими апостериорными попарными t-критериями (Graph Pad Prism, Version 5.0). Значение p менее 0,05 (* p <0,05) считалось значимым.

    4. Обсуждение

    Воздействие TiO 2 НЧ, вероятно, будет происходить в сочетании с другими патогенными воздействиями, такими как микробные инфекции. Поскольку НЧ TiO 2 и L. monocytogenes передавались через пищу, их взаимодействие может запускать реакции на уровне кишечника и вызывать дополнительные повреждающие эффекты. В этом исследовании последовательное воздействие на клетки кишечника наночастиц TiO , 2, и L.monocytogenes, по-видимому, вызывает модификации, приводящие к увеличению бактериальной инфекции. Разрешение основных клеток бактериальной инфекции наблюдалось, когда монослои были предварительно обработаны низкой дозой TiO 2 НЧ, концентрация, сравнимая с концентрацией, сообщенной при приеме внутрь человека, которая составляет приблизительно 0,03–3 мг / кг массы тела / день [5, 37,38,39].

    L. monocytogenes использует различные бактериальные белки, называемые интерналинами, для вторжения в нефагоцитарные эпителиальные клетки. Интерналин A, белок, прикрепленный к стенке бактериальной клетки, связывается с рецептором эпителиальной клетки-хозяина E-кадгерином, который обеспечивает физическую связь между бактерией и нитчатым актином (F-актином).

    Мы продемонстрировали, что TiO 2 НЧ в низких концентрациях, таких как 5 мкг / см 2 , были способны индуцировать экспрессию селектинов E и P и ICAM-1, VCAM-1 и PECAM-1 в эндотелиальных клетках. [40]; недавно Руэда-Ромеро и др. (2016) [41] продемонстрировали, что НЧ TiO 2 в низких концентрациях могут активировать человеческие моноциты, повышая экспрессию лигандов молекул адгезии. Пытаясь объяснить увеличение количества внутриклеточных бактерий, мы выполнили окрашивание клеточной мембраны на E-кадгерин.Мы не наблюдали существенной разницы между обработанными TiO 2 NP и необработанными клетками в отношении количества мембранной экспрессии E-кадгерина. Хотя взаимодействия между интерналином A и E-кадгерином являются критическими для инвазии эпителиальных клеток L. monocytogenes in vitro. [42] и in vivo [43], кажется, что весь комплекс E-cadherin / catenin / F-actin не всегда необходим для инвазии. Ортега и др. (2017) [44] продемонстрировали, что истощение αE-катенина или экспрессия укороченного E-кадгерина предотвращает L.monocytogenes от взаимодействия с F-актином и оказывает лишь незначительное влияние на эффективность проникновения бактерий в эпителиальные клетки. Следовательно, в дополнение к этой системе L. monocytogenes может использовать альтернативные способы проникновения в эпителиальные клетки.

    Несмотря на то, что предварительная обработка TiO 2 NP не увеличивала количество рецепторов кишечных клеток листерий, флуоресцентное окрашивание актином предварительно обработанных монослоев NP показало модификации цитоскелета, которые не наблюдались в контрольных клетках. Как при низких, так и при высоких дозах клетки показали увеличенное количество расширений поверхности мембраны, что также было визуализировано с помощью электронной микроскопии.В частности, мы наблюдали выступы плазматических мембран, такие как филоподиальные или ламеллиподиальные выступы, которые при высокой дозе, по-видимому, достигают НЧ и окружают их. По нашим наблюдениям, эти прогнозы, кажется, не различаются количественно для низких и высоких доз NP, несмотря на разницу в уровнях бактериальной инвазии. Когда монослои были предварительно обработаны низкой дозой НЧ и инфицированы L. monocytogenes, изменения цитоскелета стали более выраженными с драматическими изменениями в динамике актиновых филаментов, что привело к интернализации многих бактерий клетками.

    Предыдущие работы свидетельствовали об изменении гомеостаза кальция в разных типах клеток после воздействия TiO 2 НЧ [45,46]. Изменения внутриклеточного уровня кальция опосредуют различные клеточные процессы, такие как реорганизация цитоскелета, обмен фокальной адгезии, формирование инвадоподий, сократимость актомиозина и запуск ламеллиподий [47]. Фагоцитарные процессы также управляются тонко контролируемой перестройкой актинового цитоскелета, где кальций играет важную роль, контролируя активность нескольких сократительных белков или активируя внутриклеточные сигнальные пути.В нашей системе изменения цитоскелета могут быть связаны с модуляцией кальция с помощью НЧ TiO 2 , что, вероятно, влияет на клеточный путь в обеих дозах диоксида титана. Было продемонстрировано, что минимальное внутриклеточное содержание титана необходимо для того, чтобы вызвать заметное изменение гомеостаза кальция [48]. Таким образом, разумно предположить, что низкая доза NPs достаточна для воздействия на биологические пути, регулирующие приток или высвобождение кальция из запасов кальция эндоплазматического ретикулума, следовательно, влияя на белки цитоскелета.Этот механизм не был усилен в образцах, предварительно обработанных высокими дозами, из-за других факторов, таких как статус агрегации, который снижает интернализацию наночастиц, а затем и реальную внутриклеточную концентрацию НЧ. Наши анализы адгезии и инвазии показывают, что адгезия бактериальных клеток и эффективность проникновения были снижены при Высокая доза НП по сравнению с низкой дозой. Эти результаты можно объяснить жесткостью мембраны из-за крупных агломератов НЧ, которые вызывают модификацию текучести мембраны. Титан анатаз имеет большое количество гидроксильных групп (-ОН) на своей поверхности [49].Гидроксильные группы приводят к более сильному связыванию наночастиц с клеточными мембранами, тем самым увеличивая жесткость клеточных мембран [50]. da Rosa (2013) [51] наблюдали повышенную жесткость мембраны у нейтрофилов, обработанных TiO 2 НЧ. Хорошо известно, что отрицательно заряженные частицы TiO 2 связываются преимущественно с аминокислотами с -OH, -NH и -NH 2 в своих боковых цепях [52]. Наши данные по характеристике НЧ TiO 2 в DMEM показали, что НЧ объединяются в большие агломераты и имеют отрицательный заряд.Таким образом, НЧ TiO 2 , возможно, могут нарушать функцию клеточной мембраны, это также наблюдали Xu et al. (2016) [53], которые показали, что мембраны клеток HeLa были значительно более твердыми после воздействия наночастиц титананатаза 100 мкг / мл с уменьшением связывания и проникновения Staphylococcus aureus. Большое количество бактерий интернализовалось в клетках, предварительно обработанных низкой дозой НЧ TiO 2 демонстрируют замечательную способность избегать механизмов деградации клеток, демонстрируя высокую степень выживаемости также через 24 часа после заражения по сравнению с 3 часами после заражения.Известно, что L. monocytogenes способны не только ингибировать слияние фагосома-лизосома [54], но также активно избегать аутофагической деградации [55,56]. При проникновении в клетки-хозяева бактерии могут ускользать из фагосомы благодаря активности трех факторов вирулентности: листериолизина O (LLO), фосфатидилинозитол-специфической фосфолипазы C (PI-PLC) и фосфолипазы C широкого спектра действия (PC-PLC). . Активность LLO по формированию пор предотвращает закисление фагосом в макрофагах, тем самым задерживая их слияние с лизосомами до того, как будет опосредовано ускользание фагосом [54].LLO способствует выходу из фагосомы клеток-хозяев и защищает L. monocytogenes от АФК [57]. Повышенная регуляция LLO в условиях окислительного стресса [57] приводит к ингибированию НАДФН-оксидазы, которая индуцирует продукцию АФК, обеспечивая выживаемость L. monocytogenes до тех пор, пока она не ускользнет из фагосомы [58].

    Мы наблюдали, что уровни ROS, по-видимому, не изменились, и огромное количество клеток листерий проникло в клетки, предварительно обработанные низкими дозами. Таким образом, можно предположить, что высокие уровни LLO из-за большого количества введенных бактериальных клеток могут вызывать заметное ингибирование клеточной продукции ROS, что приводит к увеличению количества бактериальных клеток, которые покидают фагосомы и распространяют клетки. в ячейку.Действительно, по мере увеличения интервала времени мы наблюдали, что большинство бактерий были свободны в цитоплазме и покрыты актином, вместе с несколькими покрытыми бактериями, заключенными в вакуоли. Это указывает на то, что большинство бактерий могли переходить от клетки к клетке. Напротив, при высоких дозах выживаемость была ниже, как показывает электронная микроскопия, наблюдая только деградирующие вакуоли и цитоплазму, свободную от бактерий. Помимо низкого бактериального поглощения, низкая выживаемость бактерий в клетках, предварительно обработанных высокой дозой TiO 2 NP, также может быть связана с повышенным окислительным стрессом, вызванным NP, начиная с 6 часов обработки.Во время проникновения бактерий L. monocytogenes обнаружила среду с высоким окислительным стрессом, который еще больше усилился после заражения, возможно, также из-за низкого количества LLO, который был неспособен ингибировать продукцию ROS в фагосомах.

    Эффект НЧ TiO 2 на увеличение роста листерий был неожиданным, но не без прецедентов в литературе. Xu et al. (2016) [53] показали, что неактивированные НЧ TiO 2 увеличивают прикрепление / интернализацию Staphylococcus aureus в клетки HeLa.Более того, было продемонстрировано, что воздействие наноразмерных частиц титана на бронхиальные эпителиальные клетки человека до инфицирования респираторно-синцитиальным вирусом (RSV) значительно увеличивало эффективность репликации вируса [59]. Богданов и др. (2017) [60] продемонстрировали, что неактивированные НЧ TiO 2 увеличивают рост C. trachomatis в зависимости от концентрации, с примерно четырехкратным увеличением при 100 мкг / мл. Поскольку ежедневное потребление TiO 2 НЧ является значительным, и их выведение ограничено, взаимодействие НЧ TiO 2 с кишечной средой может вызвать тревожные условия, благоприятные для инфицирования патогенными микроорганизмами.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *