Шнур барьер: Бентонитовый шнур БАРЬЕР, Гидропрокладка, аналог Bentorub, Redstop — mkada.ru

Содержание

расширяющийся шнур БАРЬЕР, гидрошнур, саморасширяющийся шнур, ООО Геотехнологии, Санкт-Петербург

Вернуться в меню Руководства >>>>>

Саморасширяющийся шнур «БАРЬЕР» (синонимы: гидрошнур, расширяющийся шнур) используется в установке на горизонтальных и вертикальных поверхностях бетонных стен в проекциях конструкционных швов, а также в местах перекрытий при домостроении монолитного типа, в местах локализации инженерных коммуникаций, в проекциях стыков фундаментных балок и перекрытий со сваями, в металлоконструкциях, проведенных через бетон.

Гидрошнур «БАРЬЕР» был создан специально для работы как в условиях присутствия гидростатического давления, так и в условиях его полного отсутствия. Гидрошнур можно использовать в во время строительства емкостей (резервуаров) для питьевой воды. Он является безопасным в экологическом аспекте, что подтверждено соответствующим заключением (санитарно-эпидемиологическое Заключение ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии, Санкт-Петербург»).

Расширяющийся шнур «БАРЬЕР», как правило, используется в процессе строительства блочного и монолитного типа с бетоном, класс которого составляет В10 и выше.
Гидрошнур «БАРЬЕР» имеет поперечное сечение 19х25мм и 15х25мм, что позволяет использовать его в бетонных конструкциях, толщина которых составляет 200мм и больше, причем дистанция от наружной (внешней) поверхности должна быть 75 мм (не менее этого значения) (см.рис.2.1).

Рис.2.1 Установка расширяющегося шнура «БАРЬЕР» в монолитных бетонных конструкциях

Гидрошнур «БАРЬЕР», имеющий полукруг R9мм и поперечное сечение 10х20мм можно использовать в бетоне, толщина которого составляет от 100 до 150 мм, причем дистанция (расстояние) от наружной поверхности должно быть 40 мм (не меньше).

Саморасширяющийся шнур «Барьер» (гидрошнур). Технические характеристики

Таблица 2.1
Наименование	Размеры	Тара	Кол-во в таре	Вес брутто
«БАРЬЕР			(короб)
	5 х 10 х 10000мм	320х320х200мм	100 пог.м	20,0 кг
	10 х 20 х 6250мм	320х320х200мм	50 пог.м	18,5 кг
	15 х 25 х 5000мм	350х350х215мм	30 пог.м	18,5 кг
	19 х 25 х 5000мм	350х350х215мм	30 пог.м	23,5 кг
	25 х 40 х 5000мм	500х500х280мм	30 пог.м	45,0 кг
	50 х 50 х 5000мм	500х500х280мм	5 пог.м	20,0 кг
	Диаметром 40мм	500х500х280мм	30 пог.м	52,5 кг

Расширяющийся шнур «БАРЬЕР», поперечное сечение которого составляет 5х10мм, используется как изолятор участков прохождения инженерных коммуникаций при наличие мелких зазоров, располагающихся между отверстиями в бетоне и трубами.
Саморасширяющийся шнур можно приобрести у нас по самым доступным ценам. Обращайтесь, мы ждем ваших предложений.

Все материалы, в т.ч. саморасширяющийся шнур (гидрошнур) «Барьер», рекомендованы к применению ОАО «ЛЕННИИПРОЕКТ», ЗАО «Ленинградский Промстройпроект», ФГУ «Мосстройресурс», ОАО «ЛЕНМОРНИИПРОЕКТ», ОАО «Ленинградский ВОДОКАНАЛПРОЕКТ».

Вернуться в меню Руководства >>>>>

Бентонитовый шнур Барьер

Расширяющаяся прокладка «БАРЬЕР» — это гибкий бентонито-каучуковый шнур, предназначенный для герметизации стыков бетонных конструкций и мест прохода инженерных коммуникаций и металлоконструкций через бетонные панели.

«БАРЬЕР» — это активный бентонит натрия на каучуковой основе, разработанный для замены ПВХ профилей, требующих сварки стыков и трескающихся при высоком статическом давлении. «БАРЬЕР» выпускается в виде жгута различного сечения и длины, при установке не требует сварки, жгуты соединяются встык или с нахлестом 40мм. Бентонит натрия при гидратации имеет свойство увеличиваться в объеме от 5-ти до 8-ми раз. Это свойство при ограниченном окружающем объеме создает непроницаемый для дальнейшего проникновения влаги барьер. Кроме того происходит заполнение всех мелких пустот и трещин на стыках бетонных конструкций (см.рис. 1.1). «БАРЬЕР» прошел сертификационные испытания в Испытательном Центре ВНИИГС и по всем параметрам соответствует ТУ 5775-001-76278057-2005. Стойкость к гидростатическому давлению — до 7-ми атмосфер, водопроницаемость — 2х10

-9 см/сек, диапазон температур при установке от -15 до +50 град С, коэффициент разбухания — до 400%. «БАРЬЕР» выпускается сечениями 5×10 мм, 10 х 20мм, 15 х 25мм, 19 х 25мм и длиной соответственно 10м, 6,25м, 5м, 5м. Под заказ могут быть изготовлены жгуты любого сечения, длины и требуемой эластичности.

Таблица основных размеров упаковки расширяющейся прокладки «Барьер» различного сечения и их масса

Размеры	Тара	Кол-во в таре (короб)	Вес брутто
5 х 10 х 10000мм	320х320х200мм	120м	12 кг
10х20х 6250мм	320х320х200мм	50м	16 кг
15х25х 5000мм	360x360x215мм	30м	18 кг
19х25х 5000мм	390x390x260	40м	32 кг

К основным преимуществам и техническим характеристикам прокладки «Барьер» можно отнести:

Низкая водопроницаемость. Скорость проникновения влаги составляет не более 1/100 000 000 см/сек (1 Х 10-8)
Высокая стойкость к гидравлическому (гидростатическому) давлению. В норме — до 7-ми атмосфер.
Практически не ограниченный срок службы. Материал не подвержен гниению и разложению, устойчив к действию микроорганизмов и многих активных материалов.
Экологическая чистота. Материал не загрязняет окружающую среду и изготавливается из естественных составных частей с соблюдением экологических норм.
Широкий температурный диапазон. При установке «Барьера» температура воздуха и конструкций может быть от 15 градусов мороза до 50 градусов тепла. В любом случае, материал сохраняет свои свойства в полной мере.

Высокий коэффициент разбухания. Прокладка может увеличиваться в объеме до 4 — 5 раз, надежно закрывая малейшую возможность попадания влаги в конструкции.

Принцип действия: Бентонитовый шнур (жгут) «БАРЬЕР» устанавливается на бетонную поверхность без зазоров и при небходимости фиксируется с помощью дюбелей. Шнуры соединяются между собой встык.

Рис.2.1 Установка расширяющегося шнура «БАРЬЕР» в монолитных бетонных конструкциях

Саморасширяющийся шнур «Барьер» (гидрошнур). Технические характеристики

Таблица 2.1
Наименование	Размеры	Тара	Кол-во в таре	Вес брутто
«БАРЬЕР			(короб)
	5 х 10 х 10000мм	320х320х200мм	100 пог.м	20,0 кг
	10 х 20 х 6250мм	320х320х200мм	50 пог.м	18,5 кг
	15 х 25 х 5000мм	350х350х215мм	30 пог.м	18,5 кг
	19 х 25 х 5000мм	350х350х215мм	30 пог.м	23,5 кг
	25 х 40 х 5000мм	500х500х280мм	30 пог.м	45,0 кг
	50 х 50 х 5000мм	500х500х280мм	5 пог.м	20,0 кг
	Диаметром 40мм	500х500х280мм	30 пог.м	52,5 кг

Бентонитовый шнур «Барьер»

Бентонитовый шнур «Барьер» – композиционный материал для выполнения работ по гидроизоляции подземных конструкций и сооружений самого разного назначения. «Барьер» поставляется в виде жгутов длиной по 5 метров прямоугольного сечения. Для максимально полного удовлетворения потребностей потребителей предлагается семь типоразмеров бентонитового шнура, которые отличаются друг от друга по размеру сечения. Бентонитовый шнур состоит из натриевого бентонита (75 %) и бутилового каучука (25 %). Основным действующим элементом композиции является натриевый бентонит, который обеспечивает выполнение гидроизоляционной функции. Бутиловый каучук используется в качестве армирующей основы, обеспечивающей стабильность геометрической формы и должную эластичность жгута.

Бентонитовый шнур «Барьер», благодаря своим отличным техническим характеристикам и эксплуатационным свойствам, имеет чрезвычайно широкую область применения. Этот материал может использоваться для создания надежных комплексных систем гидроизоляции самого разнообразного спектра объектов. При помощи бентонитового шнура «Барьер» может обеспечиваться гидроизоляция объектов гражданского строительства, в том числе фундаментов и подвальных помещений зданий и сооружений, подземных паркингов, бассейнов. Также «Барьер» может служить одним из важнейших компонентов гидрозащиты промышленных и инфраструктурных объектов, таких как мосты, тоннели, подземные галереи. Кроме этого, бентонитовый шнур «Барьер» применяется в системах гидроизоляции гидротехнических сооружений, в том числе водоводов, резервуаров, насосных станций и многих других. При этом бентонитовый шнур обеспечивает эффективную герметизацию наиболее сложных, с точки зрения гидроизоляции, участков конструкций. С его помощью герметизируются технологические и «холодные» швы бетонирования, мест прохода через ограждающие конструкции зданий трубопроводов и других инженерных коммуникаций, стыков элементов конструкции, в том числе выполненных из материалов различного состава. «Барьер», в большинстве случаев, используется в комплекте с бентонитовыми матами, которыми выполняется гидроизоляция основной части изолируемых объектов. Однако применение бентонитового шнура возможно совместно с другими гидроизоляционными материалами, а также самостоятельно.

Именно в обеспечении эффективной гидроизоляции сложных конструктивных зон и заключается главная ценность бентонитового шнура. Традиционные материалы пленочного и мембранного типа, а также обмазочная гидроизоляция, не дают возможности изолировать подобные участки, поскольку не лежат в плоскости конструкции. В результате этого возможно проникновение влаги во внутренние помещения, что может создавать неудовлетворительные условия для их нормальной эксплуатации. Кроме этого, постоянное увлажнение строительных и конструктивных материалов неизбежно приводит к потере их прочностных характеристик и, в итоге, к снижению долговечности всего здания или сооружения. Это может происходить в результате химического взаимодействия конструкционных материалов с агрессивными веществами, содержащимися в воде, в результате их вымывания. Кроме этого, значительную проблему представляет попеременное замерзание и оттаивание влаги, находящейся в порах бетона, кирпича и других материалов. В связи с этим большое значение имеет выбор технологий и материалов, способных обеспечить надежную и качественную герметизацию технологических швов, выводов трубопроводов и других проблемных участков. Одним из самых распространенных сегодня таких материалов является бентонитовый шнур, используемый в качестве гидропрокладки.

Бентонитовый шнур Барьер – производство РФ

Бентонитовый шнур «Барьер» является высококачественным гидроизоляционным материалом отечественного производства. Это экологически безопасный композиционный материал в форме жгута на минеральной основе, в качестве которого выступает природный натриевый бентонит. Армирующую функцию выполняет бутиловый каучук, благодаря которому обеспечивается стабильная геометрическая форма изделия во время транспортировки и хранения, а также высокая эластичность жгута. Принцип действия бентонитового шнура основан на уникальных свойствах натриевого бентонита. Этот природный материал, относящийся к монтмориллонитовым глинам, при полной гидратации поглощает значительный объем воды, увеличиваясь в размерах до 400 % и более. В процессе гидратации бентонита, этот материал приобретает форму густого геля. В условиях закрытого пространства расширение бентонита ограничено механически, поэтому в структуре геля возникает напряженное состояние, в котором он становится отличным гидроизоляционным материалом, практически не пропускающим воду. Кроме этого, в напряженном состоянии бентонитовый гель обладает высокой проникающей способностью. Благодаря этим особенностям, бентонитовый шнур «Барьер» обеспечивает эффективную гидроизоляцию технологических швов бетонирования, выводов трубопроводов и других сложных конструктивных участков. Действие «Барьера» начинается при проникновении влаги в изолируемую зону. При полной гидратации разбухание материала происходит в течение 48-72 часов. При этом бентонитовый шнур образует непреодолимый барьер для воды. При расширении бентонит полностью заполняет собой свободное пространство, проникая в мельчайшие щели и трещины. Таким образом, удается обеспечить сплошной слой гидроизоляции подземных частей зданий и сооружений.

Для полноценного выполнения гидроизоляционных функций бентонитовым шнуром «Барьер» очень важно обеспечить его правильный монтаж. Это подразумевает, прежде всего, качественное крепление материала на основании, а также – предотвращение преждевременной гидратации натриевого бентонита, которая возможна при контакте шнура с водой во время монтажа, транспортировки или хранения. Бентонитовый шнур должен укладываться на основание плотно, без зазоров. Отдельные отрезки жгута также плотно стыкуются между собой. Во время монтажа должен быть обеспечен технологический зазор между бентонитовым шнуром и краями бетонной конструкции не менее 75-80 миллиметров. Такой зазор позволяет не допустить разрушение бетона в результате воздействия распирающих усилий, возникающих при разбухании бентонита. На поверхности основания бентонитовый шнур «Барьер» может фиксироваться различными клеевыми составами. Также возможна фиксация жгута на бетонном основании при помощи дюбелей.
Высокие технические характеристики и эксплуатационные свойства бентонитового шнура «Барьер» делают его одним из самых эффективных материалов своей категории на современном строительном рынке. Он может эксплуатироваться в самых разных условиях. Высокая температурная устойчивость позволяет использовать «Барьер» для качественной герметизации в любой климатической зоне нашей страны. Материал выдерживает воздействие агрессивных сред при pH 5-10, а также является устойчивым к долговременному воздействию нефти и нефтепродуктов. При этом бентонитовый шнур представляет собой абсолютно экологически безопасный материал (допускается контакт с питьевой водой). «Барьер» также обладает высокой биологической устойчивостью и не подвержен гниению. Свойства натриевого бентонита позволяют жгуту сохранять свои гидроизоляционные характеристики в течение неограниченного времени, выдерживая неограниченное количество циклов замерзания и оттаивания. А характеристики эти очень высоки, и позволяют материалу конкурировать с лучшими импортными аналогами. В частности, коэффициент фильтрации бентонитового шнура «Барьер» составляет не более 1х10 -8 см/с. Кроме этого, гидроизоляционные узлы, выполненные при помощи этого материала, способны выдерживать гидростатическое давление до 7 атмосфер, что позволяет использовать его в зоне значительного притока грунтовых вод. Кроме этого, дополнительным преимуществом является простой монтаж бентонитового шнура «Барьер», который осуществляется с минимальными трудозатратами в кратчайшие сроки. Укладку материала можно проводить в самых разных условиях ведения работ для строящихся и уже эксплуатируемых объектов.

Благодаря своим характеристикам, бентонитовый шнур «Барьер» дает возможность выполнения качественной и надежной герметизации с минимальными затратами.

гернит.com — Бентонитовый шнур «Барьер»

Бентонитовый шнур «Барьер» — (гидропрокладка) ТУ 5774-002-96814664-2006

Новейшие технологии в строительстве требуют применения современных и качественных материалов, это касается и гидроизоляции. Таким материалом является бентонитовый шнур (жгут)Барьер, который предназначен для высоконадёжнойгидроизоляции бетонных конструкций, строительных сооружений, инженерных коммуникаций ниже уровня земли (при постоянном гидравлическом давлении грунтовых вод), а так же для других элементов гидроизоляции. Принципиальность действия Бентонитового жгутаБарьер в увеличении объема материала при проникновении влаги.

Бентонитовый шнур (жгут) «Барьер» гидропрокладка

Наименование	Сечение,мм		Длина шнура, пог.м	Кол-во в таре	Тара
Наименование	Высота	Ширина	Длина шнура, пог.м	пог.м	короб,мммммм
Бентонитовый шнур «Барьер»	5	10	10	100	320х320х200
	10	20	6,25	50	320х320х200
	15	25	5	30	360х360х215
	19	25	5	40	380х380х250
	25	40	5	30	500х500х280
	35	35	5	30	500х500х280
	50	50	5	5	500х500х60
	Диаметр 40мм		5	30	500х500х280

Преимущество и техническая характеристика бентонитовогошнура «Барьер»:

Обладает минимальной водопроницаемостью (скорость проникновения влаги составляет не более 1/100 000 000 см/сек (1 Х 10-8)
Имеет высокую стойкость к гидравлическому (гидростатическому) давлению (в норме — до 7 атмосфер).
Неограниченный срок службы. Не подвластен гниению и разложению, устойчив к действию микроорганизмов и многих активных материалов.
Является экологически чистым материалом. Не загрязняет окружающую среду, т.к. изготовлен из натуральных составных частей с соблюдением экологических норм.
Удобный диапазон температур (при установке от -15 до +50 градусов сохраняет все свои свойства).
Высочайший коэффициент разбухания. Гидропрокладка «Барьер» способна увеличиваться в 4-5 раз, тем самым прочно закрывая малейшую возможность попадания влаги.
Бентонитовый жгут устойчив к рН 5-10, неполярным жидкостям (маслам, бензинам и другим).

Бентонитовый шнур (гидропрокладка) «Барьер» устанавливают на поверхность бетонной конструкции без зазоров, зафиксировав при необходимости с помощью дюбелей. Шнуры соединяются между собой встык.
Входящий в состав бентонит натрия увеличиваться в объеме до 10-16 раз при полной гидратации в течении 48-72 часов. При локализации пространства для свободного увеличения в объеме в присутствии воды происходит образование изолирующего слоя.

Бентонитовый шнур ((гидропрокладка) Барьер. Описание, технические характеристики, подбор аналогов.

Область применения:

Гидроизоляционная прокладка (гидропрокладка) «БАРЬЕР» устанавливается на вертикальных и горизонтальных поверхностях конструкционных швов бетонных стен и перекрытий при монолитном домостроении, в местах прохода инженерных коммуникаций и металлоконструкций через бетон, в местах стыка свай, фундаментных балок и перекрытий.

ТАБЛИЦА АНАЛОГОВ

Описание материала:

Бентонитовая прокладка (бентонитовый шнур) представляет собой жгут на основе смеси бутил-каучука, бентонит-натриевой глины и активных полимерных добавок. Выпускается в виде жгута различного сечения и длины, при установке не требуется сварки (соединяются встык или с нахлестом 50 мм). Бентонит натрия при гидратации имеет свойство увеличиваться в объеме до 16-ти раз, в смеси с бутил-каучуком при гидратации увеличение через 24-48 часов происходит до 5 раз. При поступлении воды бентонито-каучуковый шнур находясь в ограниченном пространстве (например бетоне) начинает увеличиваться и заполняет собой все мелкие пустоты и трещины, на стыках конструкций, что позволяет создать непроницаемый барьер для проникновения воды и иных жидкостей.

Бентонитовый жгут (шнур) «БАРЬЕР» разработан для работы, как при наличии гидростатического давления, так и при его отсутствии. Может применяться при строительстве резервуаров для питьевой воды. Экологическая безопасность подтверждена санитарно-эпидемиологическим Заключением ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Санкт-Петербурге».

Минимальное расстояние при установке от прокладки «Барьер» до края изолируемой конструкции составляет 40 мм для изделий сечением 10х20 мм и 75 мм для сечения 15х25 мм.

Преимущества материала:

Гидропрокладка «Барьер» устойчива к жидкостям с показателем pH от 4 до 10 и к неполярным жидкостям типа бензина, масел и прочих. Применяется при любых погодных условиях, (не устанавливать в стоячей воде). Выдерживает неограниченное количество циклов гидратация-дегидратация. При этом его свойства не изменяются, что делает срок службы неограниченным.

ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Наименование показателя	Значение
Водонепроницаемость, см/сек:	2.0*10^-9
Стойкость к гидростатическому давлению, атм:	до 7
Величина разбухания в воде, %:	400
Диапазон температур при установке, ^оС:	от -15 до + 50

Размеры, вес, упаковка:

Сечение жгута, мм	5×10	10х20	15х25	25х40	19х25
Длина жгута, м.пог:	10,0	6,25	5,0	5,0	5,0
Количество в коробке, шт:	14	8	6	6	8
Общая длина, м.пог.:	140	50	30	30	40
Вес брутто, кг:	11	16,0	17,5	45,0	32,0

Вся продукция марки «Барьер» подвергается жёсткому контролю при производстве и проходит все необходимые испытания, поэтому потребитель может быть уверен в надёжности и высоком качестве этого гидроматериала.

Рекомендации по применению:

Расширяющийся шнур «БАРЬЕР» устанавливается на вертикальных и горизонтальных поверхностях конструкционных швов бетонных стен и перекрытий при монолитном домостроении, в местах прохода инженерных коммуникаций и металлоконструкций через бетон, в местах стыка свай и фундаментных балок и перекрытий.

«БАРЬЕР» разработан для условий работы как при наличии гидростатического давления, так и при его отсутствии. Может применяться при строительстве резервуаров для питьевой воды. Экологическая безопасность подтверждена санитарно-эпидемиологическим Заключением ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Санкт-Петербурге».

«БАРЬЕР» пригоден для использования при монолитном и блочном строительстве с бетоном класса В10 и выше.

«БАРЬЕР» сечениями 15х25 мм и 19х25 мм используются для установки в бетонных конструкциях толщиной 200 мм и выше, при этом расстояние от внешней поверхности должно быть не менее 75 мм (см.рис.1.1).

Рис.1.1 Установка расширяющегося шнура «БАРЬЕР» в монолитных бетонных конструкциях.

«БАРЬЕР» сечением 10х20 мм используется для установки в бетоне толщиной от 100 до 150 мм, при этом расстояние от внешней поверхности должно быть не менее 40 мм. «БАРЬЕР» сечением 5х10 мм предназначен для изоляции мест прохода инженерных коммуникаций при небольших зазорах между трубами и отверстиями в бетоне.

Противопожарный шнур-барьер «ОГНЕКОНТУР-ПШ» — Деформационный шов. Москва

Противопожарный шнур-барьер «ОГНЕКОНТУР-ПШ»

1. ОПИСАНИЕ

1.1 Противопожарный шнур-барьер «ОГНЕКОНТУР-ПШ» — представляет собой негорючий (группа горючести-НГ ) многослойный шнур для заполнения деформационных швов с круглым/прямоугольным сечением , диаметром от 10 до 150 мм, из специально обработанного минерального базальтового супертонкого волокна, в виде скрученного и оформленного жгута с обкладкой из фольги толщиной 40мкм и специального волокна НГ, состоящего из кремнеземной ткани с специальным полимерным противопожарным покрытием, работающим в условиях деформации.

Многослойные противопожарные конструкции «ОГНЕКОНТУР-ПШ» производятся путем прошивки оболочки жгута кремнеземной нитью (НГ) и последующим заполнением ее теплоизоляцией с устройством стыковочных узлов (припуски ткани по краям) для формирования непрерывного заполнения шва любой длины. Сращивание отдельных шнуров производится «стык в стык», с помощью припусков ткани по краям шнуры собираются как «пазлы» в непрерывную систему.

Для усиления мест стыковки разрешается пользоваться промышленным степлером с оцинкованными скобами и последующим обертыванием стыка и склеиванием последнего слоя кремнеземной негорючей тканью. При склеивании «слабых мест» используются исключительно негорючие клеи.

1.2 Многослойные противопожарные конструкции «ОГНЕКОНТУР-ПШ» (противопожарный шнур для заполнения швов) предназначены для обеспечения надежной защиты от проникновения огня, дыма (теплового излучения) через деформационные, линейные швы, строительные примыкания и стыки элементов конструкций сооружений (в соответствии с требованиями ст. 88 Технического Регламента ФЗ №123-ФЗ от 22.07.2008 г.)

Противопожарные шнуры «ОГНЕКОНТУР-ПШ» устанавливаются в горизонтальные, вертикальные, деформационные, линейные швы и строительные примыкания, стыки монолитных и сборных железобетонных конструкций зданий и сооружений различного назначения (швы между стенами и потолком, швы между разновысотными зданиями, деформационные швы внутри зданий, в промышленных полах и на «зеленых» кровлях, швы на фасаде, швы в кирпичной/каменной кладке, швы между несущими и ненесущими конструкциями, температурные, осадочные и усадочные швы и др.)

При возникновении пожара шнуры «ОГНЕКОНТУР-ПШ» препятствуют распространению пламени через деформационный шов, чем способствуют сокращению площадей горения и минимизируют риски пострадать от пожара как людям, так и имуществу. Данные конструкции шнуров устанавливаются как отдельно, так и совместно с дилатационными системами ТМ «ГидроКонтур®» для внешнего обустройства деформационных швов зданий и сооружений.

Ширина шва от 10 до 150 мм

Предел огнестойкости EI 240 мин (до 4 часов).

Растяжение+30%

Сжатие-80%

«ОГНЕКОНТУР-ПШ» — сертифицированное комплексное решение для защиты от проникновения огня и угарного газа через деформационные швы:

cертифицированы на предел огнестойкости EI240:

4-часовая защита от проникновения огня и угарного газа через горизонтальные и вертикальные деформационные швы;

Горизонтальная и вертикальная установка

возможность деформаций с сохранением EI при изменении ширины шва от -80% / до + 30%, а также сдвигов в других плоскостях до 30%, сохраняют свои механические свойства при сжатии или растяжении (упругость, целостность, однородность структуры) ;

Допустимая деформация противопожарного шва

относятся к классу строительных материалов КМ0, группа горючести -НГ : негорючие, не выделяют дыма и не горят, не способствуют распространению пламени или пожара;
дополнительно обеспечивают теплоизоляцию и акустическую изоляцию;
воздухо- и дымонепроницаемы;
не содержат асбеста и керамики, стойкие к плесени и грибку, а также к большинству химически-агрессивных веществ, устойчивы к воде и влажности, безопасны для здоровья людей и окружающей среды;
шнур виброустойчив до 9 баллов и вибростоек;
расчетный минимальный срок эксплуатации противопожарного шнура-барьера «ОГНЕКОНТУР-ПШ» 30-40 лет;
применяется в жилых домах, торговых центрах, многоуровневых паркингах, школах, аэропортах, стадионах, зданиях и сооружениях с массовым скоплением людей.

Общий вид противопожарного шва «ОГНЕКОНТУР-ПШ»

Размерный ряд противопожарного шнура-барьера «ОГНЕКОНТУР ПШ» представлен в Таблице 1.

Диаметр шнура выбирается по Таблице 1 в зависимости от ширины деформационного шва.
Таблица 1 Диаметр противопожарного шнура выбирается на 20% шире ширины шва с учетом компрессии/сжатия шнура при установке до 33%
ШШ – ширина шва,мм

!!! Для конструкций шнуров диаметром более 50мм, показателем диаметра в таблице считается измерение по горизонтальной прямой, так как шнуры диаметром свыше 50мм могут иметь формы овала, прямоугольника, эллипса. Они могут не иметь ровную форму круга и могут иметь показатель диаметра разный в разных плоскостях. Данное условие не влияет на физико-механические характеристики и другие показатели ( в том числе предел огнестойкости)

Таблица 1

Диаметр шнура «ОГНЕКОНТУР-ПШ»	Рекомендуемая ширина деформационного шва	Максимальная ширина шва после деформаций при растяжении на 20%
ПШ-20	10-12	17
ПШ-30	13-20	25
ПШ-40	20-25	32
ПШ-50	26-33	39
ПШ-60	35-40	48
ПШ-75	41-50	61
ПШ-90	51-60	71
ПШ-105	61-70	85
ПШ-120	71-80	95
ПШ-150	85-100	120
ПШ-180	101-120	145
ПШ-200	121-150	175
ПШ-300	160-250	260

1.3 Обозначение многослойных противопожарных конструкций шнуров состоит из двух частей:

первая часть: ТМ и наименование

вторая часть: диаметр шнура, в миллиметрах

Пример записи: ОГНЕКОНТУР-ПШ 30 – конструкция для шва шириной 13-20 мм, макс 25мм, огнестойкость EI 240 (4 часа)

1.4 Типовая единица фасовки : отрезки «ОГНЕКОНТУР-ПШ» упаковываются в полиэтиленовую пленку. Количество шнуров в упаковке может меняться в зависимости от диаметра шнуров. Длины шнуров также различны, в зависимости от диаметров. Возможен выпуск других типo-размеров и длин противопожарного барьера по согласованию с производителем.

1.5 Маркировка:

На каждую упаковку прикрепляется этикетка установленного образца с указанием:

предприятия-изготовителя
обозначения номера настоящих ТУ
дата изготовления
номера партии
метраж и длины отрезков шнуров

1.6 При хранении, транспортировке , монтаже и эксплуатации, шнур «ОГНЕКОНТУР-ПШ» следует оберегать от механических повреждений.

1.7 Противопожарный барьер «ОГНЕКОНТУР-ПШ» монтируется специалистами, имеющими допуски в установленном порядке к проведению подобных работ.

1.8 Качество монтажа должно быть подтверждено актом о приемке выполненных огнезащитных работ, оформленным в установленном порядке.

2. ПОДГОТОВКА К МОНТАЖУ

2.1Предварительно поверхность шва, в который планируется монтаж «ОГНЕКОНТУР-ПШ» должна быть очищена от загрязнений, пыли, строительного мусора, должна быть сухой и чистой.

2.2 Готовность шва к монтажу огнезащитного шнура оценивается визуально специалистами.

2.3 Произвести распаковку огнезащитных шнуров «ОГНЕКОНТУР-ПШ», которые поставляются в готовом для монтажа виде и специальной крепежной сетки-лотка для установки шнура.

3. МОНТАЖ

3.1 После визуальной оценки подготовки шва к монтажу и распаковки крепежной сетки-лотка, можно приступать к монтажу противопожарной конструкции «ОГНЕКОНТУР-ПШ».

Устанавливаем сетку-лоток в шов, как показано на рис.1

Готовая полоса сетки сжимается и в виде лотка (для обеспечения ее растяжения/cжатия) и обеспечения места для укладки шнура, аккуратно вставляется в шов (обязательно использовать строительные перчатки, так как края сетки могут быть опасны для кожи рук и могут нанести порез острыми краями).

Края сетки крепятся к поверхности бетона обычным строительным дюбель-гвоздем, для надежной фиксации сетки-лотка в шве, с шагом 20 см с каждой стороны.

Сетка-лоток поставляется определенной ширины под каждый размер шва. В отличии от других методов крепления шнура ( скобы, клей) сетка-лоток обеспечивает равномерное (без провисаний, без возможности провалиться) нахождение огнестойкого шнура в шве на протяжении большого срока службы противопожарной защиты.

Так как сам шнур тоже крепится механически к поверхностям с 2-ух сторон, то сетка-лоток выполняет роль дополнительной двойной защиты конструкции и полностью сводит на нет любые риски неправильной установки или провисания/потери конструкции огнезащиты.

3.2 После установки сетки-лотка в шов можно приступать к монтажу огнезащитного шнура «ОГНЕКОНТУР-ПШ». Шнур имеет специальные «выпуски» с 2-ух сторон для крепления к поверхностям бетона. Данный метод крепления позволяет обеспечить надежное крепление шнура между поверхностями, также, при растяжении шва, механически прикрепленные «выхлысты» будут способствовать максимальному растяжению шнура «ОГНЕКОНТУР-ПШ» в шве, не оставляя пространства между огнезащитным шнуром и поверхностями бетона, препятствуя тем самым распространению огня и дыма между стеной и шнуром. Противопожарный шнур «ОГНЕКОНТУР-ПШ» всегда выбирается шире шва (согласно табл.1). Устанавливается исключительно в сжатом состоянии (до 33%). Аккуратно сжимая шнур «ОГНЕКОНТУР-ПШ», он вдавливается на глубину до 50 мм от поверхности края плит, внутрь сетки-лотка. Выхлысты остаются по-бокам, как показано на рис.2, для дальнейшего их механического крепления. После установки шнура в сетку-лоток, расправляем выхлысты по бетонным поверхностям, как показано на рис.2. Крепление выхлыстов осуществляется дюбель-гвоздями, с отступом вниз от края плит 1,5-2 см и с шагом 20 см через сетку-лоток. Выхлысты из кремнеземной ткани со специальным полимерным покрытием имеют прочную структуру на разрыв и допускается крепление дюбель-гвоздями без дополнительных защитных прокладок между головкой гвоздя и тканью. Рис.2

3.3 Так как шнуры «ОГНЕКОНТУР-ПШ», в зависимости от диаметра, поставляются разной длины, в процессе монтажа возникает необходимость «сращивания» шнуров между собой для достижения непрерывной защитной конструкции огнезащиты деформационного шва. Отдельные шнуры имеют «припуски» ткани в местах соединения, что позволяет собирать их как «пазл», вставляя друг в друга отдельные части. Данный метод очень удобен при монтаже. Соединение происходит стык в стык. Для защиты соединения рекомендуется применять промышленный степлер с оцинкованными скобами. Для дополнительной защиты мест соединения рекомендуется усилить его методом обертывания в 2 слоя и склеивания (негорючим клеем) стеклотканью. Также можно склеивать и сам шнур, до соединения частей, намазав негорючим клеем один конец шнура. Эти меры являются дополнительными. Использование клея при монтаже возможно при температуре воздуха не ниже +5°С. При температурах ниже по согласованию с ответственными лицами возможно применять специальные марки клея, уделив особенное внимание устранению влаги и конденсата.

3.4 Монтаж противопожарного барьера «ОГНЕКОНТУР-ПШ» осуществляется в диапазоне температур от -40°С до +50°С.

3.5 Варианты установки противопожарных шнуров «ОГНЕКОНТУР-ПШ»

Деформационные швы на полу, стене и потолке

Варианты установки противопожарных барьеров «ОГНЕКОНТУР- ПШ» для заполнения швов вверху стены

Прочие варианты укладки противопожарных швов:

Открытый шов

Шов закрыт герметиком

С гидроизоляционной мембраной

С дилатационными системами «ГидроКонтур»

Бентонитовый шнур. Цены. Характеристики. Консультация.

При попадании воды в швы рабочих и конструкционных швов бетонных блоков происходит разрушение бетона, что требует значительных затрат на восстановление. Избежать этого и защитить швы от влаги поможет бентонитовый шнур, который ставит барьер для водной среды и предотвращает разрушение бетона.

Гидропрокладки этого типа обладают свойством расширяться при контакте с водой и высокой водонепроницаемостью. Добиться этих качеств бентонитовым шнурам помогает наличие в составе бутилкаучука и натриевого бентонита. При взаимодействии с водой шнур превращается в плотный гель и заполняет всю полость рабочих и конструкционных швов.

Гидропрокладки устанавливаются перед бетонированием и не требуют специальных навыков для монтажа. Простота установки, надёжность и минимальная цена расширяют сферу применения бентонитовых шнуров, делая изделия незаменимыми при бетонировании. При контакте с влагой шнуры не вступают в химическую реакцию, поэтому грунтовые воды не загрязняются, а срок службы бетонных конструкций увеличивается на 10−20%.

Из основных преимуществ гидроизоляционных жгутов выделим:

Способность выдерживать высокое гидростатическое давление,
Низкую водопроницаемость,
Сохранение свойств весь срок эксплуатации,
Оперативность и простоту монтажа.

Установка шнуров возможна даже при минусовой температуре, что расширяет климатический пояс применения и позволяет выполнять бетонирование даже зимой. Расширение при контакте с водой в среднем 250%, поэтому у воды не остаётся шансов попасть внутрь шва и нанести ущерб бетонной конструкции при её эксплуатации.

Изделия доказали эффект на рабочих и конструкционных швах, а разнообразие размеров профиля позволяет использовать шнуры при любой конфигурации бетонирования. Наиболее популярны среди покупателей шнуры марки Стилобат.

В компании Геотех разумные цены на шнуры с бентонитом, а отгрузка товара совершается в день проведения оплаты. При необходимости профили доставляются по регионам, на все товары компания предоставляет гарантии.

Гематоэнцефалический барьер и спинной мозг — Блог

Давайте поговорим о гематоэнцефалическом барьере, ГЭБ или, как его иногда называют, гематоэнцефалическом барьере спинного мозга. Как вы, возможно, помните из «Биологии 101», это физическая структура, своего рода стена, разделяющая кровь и спинномозговую жидкость, окружающую головной и спинной мозг.

Ученые открыли ГЭБ около 125 лет назад, недоумевая, почему, когда они вводили синий краситель в тело, все клетки стали синими, кроме клеток головного и спинного мозга.Точно так же, когда они ввели краситель в мозг, только ткань мозга стала синей.

Ограничены головной и спинной мозг; гематоэнцефалический барьер сохраняет спинномозговую жидкость сверхчистой и предлагает центральной нервной системе дополнительный уровень защиты от обломков и струй в кровотоке.

В последние годы молекулярная биология разделила ГЭБ и исследовала его на живых животных. Мощные двухфотонные микроскопы позволяют визуализировать в реальном времени; это, конечно, намного сложнее, чем кто-либо мог подумать.ГЭБ больше похож на сосудисто-нервный орган сам по себе. Похоже, существует огромное количество молекулярных перекрестных помех между нервной системой, иммунной системой и сердечно-сосудистой системой. И похоже, что сам BBB может привести к проблемам. Например, показано, что негерметичный ГЭБ может быть основной причиной нескольких заболеваний, включая эпилепсию, болезнь Альцгеймера и рассеянный склероз.

ГЭБ играет важную роль при травме спинного мозга по двум причинам. Во-первых, травма пуповины обычно приводит к разрыву ГЭБ, что способствует воспалению, отеку и клеточному разрушению в месте повреждения.Ниже мы увидим, как одна группа ученых надеется решить проблему токсичности, опосредованной ГЭБ, с помощью клеточной нейрозащитной стратегии.

Во-вторых, BBB по самой своей природе является весьма ограничительным; очень немногие вещества могут переходить из крови в спинномозговую жидкость. Алкоголь, героин и кокаин проходят; то же самое делают большинство антидепрессантов и снотворных (они представляют собой небольшие молекулы). Некоторые пептиды способны преодолевать барьер. Но у большинства лекарств нет доступа — но что, если бы можно было проскользнуть мимо ГЭБ, чтобы доставить лекарства к нервным клеткам центральной нервной системы? Это может иметь большое значение, например, при раке нервной системы, а также для ухода и, возможно, восстановления поврежденных нервных клеток в головном или спинном мозге.

Здесь мы сообщаем, что группа из Вашингтонского университета разработала способ доставки молекулярных грузов, включая биологические препараты, в нейроны головного и спинного мозга. Работа сделана в лаборатории Сьюзи Хван Пун; Фил Хорнер, ученый, занимающийся спинным мозгом, о котором мы говорили здесь ранее (сейчас он является директором отдела нейродегенеративной медицины в Хьюстонском методистском научно-исследовательском институте), является одним из главных исследователей этого проекта. Они придумали пептид, который они назвали TAxI, сокращенно от «направленного импорта аксонов», чтобы своего рода лазейка с потенциально терапевтическим белком в нервную клетку, без скрининга и отторжения со стороны ГЭБ.

Из пресс-релиза UW:

Исследование, опубликованное 16 февраля в журнале Национальной академии наук , показало, что мышечная инъекция TAxI может транспортировать рекомбинантный белок в двигательные нейроны позвоночника. Эти нервные клетки расположены внутри спинного мозга, но расширяют свои волокна, чтобы иннервировать мышцы и контролировать их движение.

«Биологические терапевтические препараты, такие как белки или нуклеиновые кислоты, как известно, трудно попасть в центральную нервную систему», — сказал Пун, профессор биоинженерии Вашингтонского университета и соавтор работы.«Наша группа инициировала эту работу по разработке средств доставки, которые получают доступ к спинному мозгу, имитируя путь, по которому проходят некоторые вирусы и токсины».

Из опубликованной статьи:

Демонстрация невирусно-опосредованной системы доставки демонстрирует клинический потенциал этой технологии для разработки мощных терапевтических инструментов для лечения заболеваний двигательных нейронов.

Здесь мы сообщаем об идентификации пептида, который попадает в спинной мозг после внутримышечной (IM) инъекции. Мы показываем, что пептид локализуется в моторных нейронах после введения и может использоваться для переноса белков в спинной мозг через интактный моторный аксон, который проецируется на периферию.Мы также используем этот пептид … для доставки активного фермента в нейроны спинного мозга после инъекции в периферические мышцы мышей. Этот пептид TAxI обладает потенциалом клинического применения, поскольку он также связывается с двигательными нейронами в спинном мозге человека.

Возможно, самым захватывающим аспектом наших данных является демонстрация адресной доставки биологически активного белка в ЦНС и продемонстрированное связывание с нейронами в спинном мозге человека. Впечатляет то, что однократная инъекция TAxI-Cre в икроножную мышцу привела к эффективной передаче функционального белка моторным нейронам спинного мозга.

Итак, вы можете подумать, разве мы не слышали о людях, пытающихся преодолеть BBB, используя, например, вирусные векторы в качестве своего рода троянского коня? да. Были достигнуты определенные успехи в загрузке генетически модифицированного груза на вирусы, которые способны проскользнуть через барьер, но при использовании вирусов герпеса, бешенства или ВИЧ существует неизбежный критический фактор, даже если они были модифицированы и не могут воспроизводиться.

Из статьи:

На протяжении десятилетий было известно, что вирусы простого герпеса (HSV) проникают в ЦНС посредством ретроградного аксонального транспорта, и HSV был разработан для удаленного переноса генов на животных моделях болезней.Сконструированные вирусы и белковые химеры также успешно использовались в моделях на животных для переноса терапевтических генов для таких состояний, как повреждение спинного мозга, спинальная мышечная атрофия, хроническая боль и боковой амиотрофический склероз. Однако вирус-опосредованная генная терапия была ограничена в клинической трансляции из-за проблем иммуногенности, безопасности переносчиков и стоимости производства.

В то время как доставка вирусов может обеспечивать высокие уровни стабильной экспрессии, TAxI-опосредованная доставка белков обеспечивает лучший контроль над дозированием и лучше переносится при повторных схемах дозирования.Следовательно, химеры пептид: белок на основе TAxI предлагают потенциальную замену вирусным методам, используемым в настоящее время для доставки белка в спинной мозг.

Почему TAxI важен? Я попросил Хорнера порассуждать.

Я думаю, что потенциальное применение этой технологии для SCI — это возможность напрямую модифицировать активные белки в избранных двигательных нейронах. До сих пор нам приходилось использовать вирусные векторы для доставки генов и последующего контроля экспрессии. Некоторые вирусы перемещаются ретроградно и могут быть поглощены мышечной инъекцией.Что было для нас удивительным и уникальным для этого пептида TAxI, так это то, что мы можем доставлять активные белки.

Итак, я предполагаю, что для SCI мы можем вводить определенные мышцы для доставки активных белков к двигательным нейронам. Кандидаты могут быть оптогенетическими каналами, чтобы мы могли активировать группы мышц, которым не хватает нисходящего контроля. Или мы можем предоставить белки, которые могут вызвать трансформационные изменения в двигательных нейронах, чтобы сделать их более пластичными, например факторы транскрипции, которые, как известно, вызывают рост дендритов.

В целом, я думаю, что TAxI открывает возможность нового метода избирательного воздействия на многие клетки мозга посредством пептидно-связанной доставки, которая, возможно, могла бы нести меньший риск, чем вирус, не быть постоянной и более простой для титрования доставки в клинике.

Вернемся к обсуждению нейрозащиты. Вот один из примеров того, как ГЭБ может быть целью терапии. Лаборатория Джеффа Косциса в Йельском университете опубликовала в прошлом году статью, показывающую, что инъекции мезенхимальных стволовых клеток снижают тяжесть экспериментального повреждения спинного мозга.Они не уверены, что это за механизм, но утечка BBB была уменьшена, и животные стали лучше.

Из статьи:

Одним из важных последствий травмы спинного мозга является повреждение микрососудов и нарушение гематоэнцефалического барьера спинного мозга (BSCB). В настоящем исследовании мы вызвали у крыс контузионную ТСМ в точке Т9 и изучили влияние внутривенной инфузии МСК на проницаемость СКБ, архитектуру микрососудов и восстановление опорно-двигательного аппарата в течение 10-недельного периода.

ТСМ привела к длительной утечке BSCB, которая была наиболее серьезной в месте удара, но широко распространялась рострально и каудально к поражению в течение 6 недель.

У крыс, получавших MSC, утечка BSCB была уменьшена … и двигательная функция улучшилась через 1 неделю после инфузии MSC, то есть через 2 недели после SCI. Эти результаты предполагают, что внутривенно введенные МСК оказывают важное влияние на уменьшение утечки через СКБ, что может способствовать их терапевтической эффективности.

Нарушение гематоэнцефалического / спинномозгового барьера у пациентов с БАС

https://doi.org/10.1016/j.brainres.2012.05.056Получить права и содержание

Резюме

Сосудистая патология, включая гематоэнцефалический / спинномозговой барьер (BBB / BSCB), недавно было признано ключевым фактором, возможно, усугубляющим повреждение двигательных нейронов, идентифицируя сигнатуру нервно-сосудистого заболевания для БАС.Однако компетентность BBB / BSCB при спорадическом БАС (SALS) все еще не определена. В этом исследовании изучалась целостность BBB / BSCB в посмертном сером и белом веществе продолговатого и спинного мозга пациентов с SALS и контрольной группы. Основные результаты включают (1) повреждение эндотелиальных клеток и дегенерацию перицитов, (2) тяжелый внутри- и внеклеточный отек, (3) снижение экспрессии CD31 и CD105 в эндотелии, (4) значительное накопление периваскулярного коллагена IV и отложения фибрина (5) значительно увеличилась плотность микрососудов в поясничном отделе спинного мозга, (6) микрососудистая утечка IgG, (7) уменьшилась экспрессия белков плотного соединения и адгезии.Нарушения микрососудистого барьера, определенные в сером и белом веществе продолговатого, шейного и поясничного отделов спинного мозга пациентов с SALS, являются новыми открытиями. Распространенное повреждение барьера, обнаруженное при БАС, может иметь значение для патогенеза и прогрессирования заболевания, а также для обнаружения новых терапевтических целей.

Основные моменты

► Целостность капиллярного барьера исследована в посмертных тканях пациентов с БАС. ► Определены нарушения микрососудистого барьера в сером и белом веществе ЦНС.► Дегенерация клеток эндотелия и перицитов нарушила капиллярные барьеры. ► Определяется периваскулярное накопление коллагена и отложения фибрина. ► Широкое повреждение барьера может иметь значение для патогенеза заболевания.

Аббревиатуры

ALS

боковой амиотрофический склероз

BSCB

гемато-спинномозговой барьер

CNS

центральная нервная система

GAPDH

глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

G93A

молекула адсорбции

Глицин 9-93 к алан-соединению

MMP

матриксная металлопротеиназа

мРНК

мессенджер рибонуклеиновая кислота

SOD1

супероксиддисмутаза 1

TIMP

тканевый ингибитор металлопротеиназы

VE-кадгерин

эндотелиальный кадгерин сосудов

поздний склерозовый эндотелиальный кадгерин

поздний склерозирующий сердечник

латентный спарившийся мозг

шнур барьер

Обесценение

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Полный текст

Ссылки на статьи

Frontiers | Сероводород улучшает нарушение барьера между кровью и спинным мозгом и улучшает функциональное восстановление за счет ингибирования стресс-зависимой аутофагии эндоплазматического ретикулума

Введение

Гемато-спинномозговой барьер (BSCB) в основном состоит из специализированной системы эндотелиальных клеток (ЭК) и дополнительных структур, включая базальную мембрану, концевые отростки астроцитов и перициты.BSCB образует плотную структуру благодаря хорошо развитым белкам плотных соединений (TJs) и белкам adherens junction (AJs), которые блокируют проникновение молекул в спинной мозг (Bartanusz et al., 2011; Zheng et al., 2017). Распад белков TJs и AJs вызывает разрушение BSCB и, как следствие, увеличивает проницаемость BSCB после повреждения спинного мозга (SCI) (Lee J.Y. et al., 2012). Нарушение BSCB позволяет клеткам крови проникать в поврежденную паренхиму и усугубляет вторичные повреждения, такие как местный отек, ишемия, очаговое кровоизлияние и воспаление (Fang et al., 2015; Ли и др., 2017; Ли и др., 2018). Таким образом, нацеливание на разрушение BSCB рассматривается как основной терапевтический подход к SCI.

Сероводород (H ₂ S) — это газообразная молекула с запахом тухлых яиц, обладающая токсическим действием. Недавние исследования также показали, что H ₂ S играет решающую роль в физиологических и биологических эффектах (Abe and Kimura, 1996; Fiorucci et al., 2006; Martelli et al., 2012). Как новый почти повсеместный газотрансмиттер H ₂ S играет важную роль в окислительном стрессе (Xie et al., 2017b), воспаление (Magierowski et al., 2017) и сердечно-сосудистая защита (Calvert et al., 2009). Более того, сообщалось, что H ₂ S обладает нейропротективным действием против повреждения нейронов, вызванного кислородно-глюкозной депривацией (OGD) (Yu et al., 2017). Недавно было продемонстрировано, что H ₂ S улучшает индуцированное гомоцистеином нарушение гематоэнцефалического барьера у мышей (Kamat et al., 2016). Однако неясно, играет ли H ₂ S роль в защите целостности BSCB после SCI.

В физиологических условиях агрегация неправильно свернутых белков в эндоплазматическом ретикулуме (ER) нарушает функцию ER, и этот процесс известен как стресс ER (Lai et al., 2007). Недавние исследования показали, что стресс ER играет жизненно важную роль в ряде неврологических заболеваний, включая церебральную ишемию, нейродегенеративные расстройства и SCI (Gong et al., 2017; Mercado et al., 2018; Wu et al., 2018). Предыдущие исследования показали, что различные клетки, такие как нейроны, олигодендроциты и астроциты, могут вызывать стресс ER после SCI (Kuang et al., 2010; Mecha et al., 2012; Wu et al., 2016). Ингибирование стресса ER заметно защищает нейроны от SCI (Acioglu et al., 2016), но роль стресса ER в разрушении BSCB после SCI полностью не определена. Все больше доказательств показывает, что H ₂ S участвует в регуляции гомеостаза ER, а одно исследование показало, что H ₂ S может снижать стресс ER и апоптоз в бронхиальных эпителиальных клетках, обработанных сигаретным дымом (Lin et al., 2017). Здесь мы пытаемся выяснить, участвует ли снижение стресса ER в защитном эффекте H ₂ S на восстановление BSCB после SCI.

Аутофагия, зависимый от лизосом процесс самодеградации, является жизненно важным путем для поддержания клеточного гомеостаза как при патологических, так и при физиологических условиях в ЦНС (Yang and Klionsky, 2010; Mizushima and Komatsu, 2011). Предыдущее исследование предполагает, что аутофагия активируется для удаления дисфункциональных белков, вызванных стрессом ER, указывая тем самым, что стресс ER может быть триггером для активации аутофагии (Ding and Yin, 2008; Rzymski et al., 2010). Кроме того, большое количество исследований показали, что аутофагия играет важную роль при острых травмах, таких как травма спинного мозга и черепно-мозговая травма (He et al., 2016; Бай и др., 2017; Xie et al., 2017a). Недавно некоторые исследования показали, что H ₂ S связан с аутофагией. Было показано, что H ₂ S ингибирует аутофагию, активируя путь PI3K / AKT во время терапии фиброза миокарда (Xiao et al., 2016). Кроме того, H ₂ S участвует в восстановлении кардиозащиты от посткондиционирования за счет усиления аутофагии (Xiao et al., 2015; Chen et al., 2016). Однако доказательства, касающиеся роли аутофагии во время H ₂ S-опосредованной защиты от разрушения BSCB после SCI, не представлены, и взаимосвязь между аутофагией и ER стрессом во время лечения H ₂ S остается неясной.

В настоящем исследовании мы исследовали влияние H ₂ S на восстановление SCI in vivo, и in vitro , и обнаружили, что H ₂ S ослабляет разрушение BSCB и проницаемость, следовательно, улучшает функциональное восстановление после SCI. Механистические исследования также продемонстрировали, что H ₂ S предотвращает потерю белков TJ и AJ, включая P120, β-катенин и окклюдин, in vivo, и ЭК, обработанные OGD. Кроме того, мы дополнительно исследовали роль ER стресса и аутофагии во время лечения H ₂ S для SCI.

Материалы и методы

Управление по делам животных и лекарств

Восеминедельные взрослые самки крыс Sprague-Dawley (200–220 г, n = 80) были приобретены в Центре животных Китайской академии наук (Шанхай, Китай). Животных содержали при 12-часовом цикле свет / темнота при 21–23 ° C и давали ad libitum доступ к пище и воде. Протокол по уходу и использованию животных соответствовал рекомендациям Национального института здоровья.Все эксперименты были одобрены Комитетом по этике лабораторных животных Медицинского университета Вэньчжоу. Для введения лекарства NaHS (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) растворяли в фосфатно-солевом буфере (PBS). Крысам внутрибрюшинно (внутрибрюшинно) вводили NaHS (5,6 мг / кг) за 30 минут до SCI и вводили ту же дозу NaHS ежедневно в течение 7 дней. Активатор стресса ER туникамицин ™ (10 мкг / кг), ингибитор стресса ER 4-фенилмасляная кислота (4-PBA) (100 мг / кг), активатор аутофагии рапамицин (Rapa) (0.5 мг / кг) и ингибитор аутофагии 3-метиладенин (3-MA) (2,5 мг / кг) вводили внутрибрюшинно. вводится сразу после ТСМ. TM, 4-PBA, Rapa и 3-MA были приобретены у Sigma (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Контрольная группа получала эквивалентный объем физиологического раствора в течение того же времени. Были приложены все усилия, чтобы свести к минимуму боль и дискомфорт животных.

Индукция травмы спинного мозга Крыса Модель

Чтобы вызвать модель SCI, крыс анестезировали 10% (мас. / Об.) Хоралгидратом (3.6 мл / кг, внутрибрюшинно). Кожа и мышцы, прилегающие к остистым отросткам, были рассечены, чтобы обнажить позвоночник, а затем была выполнена ламинэктомия на уровне Т9. Обнаженный спинной мозг подвергали умеренной травме с раздавливанием с помощью сосудистого зажима (сила 30 г, Оскар, Китай) в течение 1 мин (Zheng et al., 2016). Ложная группа подверглась идентичным процедурам, но не пострадала. Послеоперационный мониторинг включал опорожнение мочевого пузыря вручную два раза в день. Все крысы не проявили заметных побочных эффектов в результате лечения препаратом.

Анализ синего красителя Эванса

Целостность BSCB оценивали с использованием красителя Evans blue (EB). Крысам вводили 2% краситель EB (2 мл / кг) через 1 день после SCI путем внутривенной инъекции в хвост. Через два часа после инъекции крыс анестезировали и умерщвляли посредством внутрисердечной перфузии 0,9% физиологического раствора. Затем ткани спинного мозга были извлечены и захвачены.

Оценка восстановления двигательной активности

Шкала Basso Beaattie Bresnahan (BBB) и анализ следа были использованы для анализа восстановления двигательной активности (Li et al., 2018). Оценки варьировались от 0 (полный паралич) до 21 (нормальное движение). Двигательную активность крыс оценивали в открытом экспериментальном поле в течение 5 мин. Животных оценивали через 0, 1, 3, 5, 7 и 14 дней после операции. Анализ отпечатка ног проводили путем погружения задней конечности крысы в красный краситель, а переднюю конечность в синий краситель. Измерения результатов были получены пятью независимыми исследователями, которые не знали условий эксперимента.

Культура клеток и кислородно-глюкозная депривация

HUVEC были увеличены и сохранены в среде эндотелиальных клеток (ECM, ScienCell, Карлсбад, Калифорния, США) с добавлением 1% ECGS (ScienCell, Карлсбад, Калифорния, США), 5% FBS (ScienCell, Карлсбад, Калифорния, США). ) и антибиотики (100 мкг / мл стрептомицина и 100 Ед / мл пенициллина, ScienCell, Карлсбад, Калифорния, США) в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ и 95% воздухом при 37 ° C.В нашем исследовании использовалось четвертое поколение клеток. Для обработки OGD клетки обновляли не содержащей глюкозы DMEM, содержащей TM (3 мкМ) или Rapa (100 нМ), и сразу же помещали в герметичную камеру, загруженную газовой смесью 5% CO ₂ и 95% N _{. 2} на 6 ч. Клетки предварительно обрабатывали NaHS (100 мкМ) в течение 2 ч перед стимуляцией OGD. Все эксперименты проводили в трех повторностях.

Вестерн-блоттинг-анализ

Образцы ткани спинного мозга были извлечены через 1 день после операции и немедленно сохранены при -80 ° C для вестерн-блоттинга.Вкратце, ткани лизировали с использованием буфера RIPA (0,5% дезоксихолата натрия, 1% Triton X-100, 1 мМ EDTA, 1 мМ PMSF, 10 мкг / мл лейпептина, 20 мМ Tris-HCl, pH 7,5 и 150 мМ NaCl). In vitro клетки дважды промывали PBS и лизировали в буфере для лизиса (0,1% SDS, 1% дезоксихолат натрия, 1% Nonidet P-40, 25 мМ Tris-HCl, pH 7,6 и 150 мМ NaCl). Лизаты тканей и клеток центрифугировали при 12000 об / мин в течение 10 минут при 4 ° C, и супернатант получали для анализа белка. Концентрации белка определяли количественно с помощью реагентов BCA (Thermo).Аликвоту белка 80 мкг ( in vivo, ) или 40 мкг ( in vitro, ) разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на мембрану PVDF (Bio-Rad). Мембрану блокировали 5% (мас. / Об.) Обезжиренным молоком (Bio-Rad) в TBST (трис-буферный раствор с 0,1% твин-20) в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем мембраны инкубировали с следующие первичные антитела: GAPDH (1: 10000 Bio-world), β-катенин (1: 1000, Abcam), P120 (1: 1000, Abcam), Occludin (1: 1000, Abcam), фосфор-JNK (1: 200 Санта-Крус), JNK (1: 200 Санта-Крус), GRP78 (1: 1000, Abcam), PDI (1: 1000, Abcam), ATF6 (1: 1000 Abcam), CHOP (1: 1000 CST), Cle-caspase 12 (1: 1000 Abcam), фосфор-mTOR (1: 1000 Abcam), mTOR (1: 1000 Abcam), ATG7 (1: 1000 Abcam), ATG5 (1: 1000 Novus), Beclin1 (1: 1000, Abcam) и LC3B I / II (1: 1000, Novus) при 4 ° C в течение ночи.Мембраны трижды промывали TBST и инкубировали со вторичными антителами в течение 1 ч при комнатной температуре. Сигналы визуализировали с помощью системы визуализации Chemi DocXRS + (Bio-Rad). Мы проанализировали полосы с помощью программного обеспечения Quantity-One.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Ткани крысы фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA) в PBS в течение 24 часов, заливали парафином и затем разрезали на срезы 5 мкм. Срезы депарафинизировали, регидратировали и промывали трижды по 15 мин в PBS.Для иммунофлуоресцентного окрашивания in vitro клетки высевали на покровные стекла и фиксировали в течение 15 мин с использованием 4% PFA. Затем клетки промывали PBS трижды по 2 мин каждый. Срезы и клетки инкубировали с 5% BSA в PBS, содержащем 0,1% Triton X-100, при 37 ° C в течение 30 минут. Затем срезы инкубировали в течение ночи при 4 ° C со следующими антителами: P120 (1: 250 Abcam), β-катенин (1: 300, Abcam), окклюдин (1: 200, Abcam), PDI (1: 200, Abcam) и LC3B (1: 500, Novus).Срезы промывали четыре раза PBS и инкубировали с ослиными вторичными антителами против кролика / мыши AlexaFluor 488 (1: 1000) в течение 1 ч при 37 ° C. Срезы промывали четыре раза, инкубировали с DAPI в течение 10 мин, промывали PBS и закрывали покровным стеклом. Все изображения были получены на конфокальном флуоресцентном микроскопе (Nikon, A1 PLUS, Токио, Япония).

Тест TUNEL

Фрагментацию ДНК

детектировали с использованием набора для обнаружения гибели клеток In situ (Roche, Южный Франциско, Калифорния, США), а окрашивание TUNEL проводили через 1 день после SCI.Срезы депарафинизировали и регидратировали. Затем эти срезы обрабатывали в рабочем растворе протеиназы К с концентрацией 20 мкг / мл в течение 20 мин при 37 ° C. Срезы трижды промывали PBS и инкубировали с реакционной смесью TUNEL в темной увлажненной камере в течение 1 ч при 37 ° C. После этого срезы промывали PBS и обрабатывали DAPI в течение 10 мин при комнатной температуре. Положительный контроль был получен с 10 ед. / Мл буфера для ДНКазы I в течение 10 мин при комнатной температуре перед инкубацией с реакционной смесью TUNEL.Отрицательный контроль инкубировали с реагентом TUNEL без фермента TdT. Положительные клетки наблюдали под конфокальным флуоресцентным микроскопом (Nikon, A1 PLUS, Токио, Япония) и анализировали с помощью программного обеспечения Image J.

Статистический анализ

Все данные были выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (SEM) по крайней мере из трех независимых экспериментов. Статистически значимые различия оценивали, используя односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным тестом Даннета .Различия считались статистически значимыми, когда значение P <0,05.

Результаты

SCI активирует стресс ER и аутофагию

Чтобы определить, участвуют ли стресс ER и аутофагия в SCI, мы определили уровни экспрессии факторов стресса ER (GRP78 и PDI) и производителей аутофагии (LC3 и Beclin-1) в модели SCI у крыс. Было обнаружено, что уровни GRP78 и PDI были значительно повышены после SCI и достигли пика через 1 и 12 часов после операции, соответственно (Рисунки 1A – C).Кроме того, соотношение LC3-II / I и уровни Beclin-1 были заметно увеличены через 1 день после SCI (рисунки 1D-F). На основании вышеизложенных результатов мы пришли к выводу, что SCI активировал стресс ER и аутофагию, и модель крысы с разрешением 1 dpi использовалась для проведения последующих экспериментов.

РИСУНОК 1. SCI активировал стресс ER и аутофагию. (A) Уровни экспрессии GRP78 и PDI в спинном мозге из фиктивной группы и через 6, 12, 1, 3 и 7 дней после травмы. (B, C) Количественная оценка данных вестерн-блоттинга GRP78 и PDI. (D) Уровни экспрессии Beclin1 и LC3B I / II в спинном мозге через 6 часов, 12 часов, 1 день, 3 дня и 7 дней после травмы. (E, F) Количественная оценка данных вестерн-блоттинга Beclin1 и LC3B I / II. Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные представлены как среднее ± SEM, n = 5. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01 и ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с фиктивной группой .

Введение NaHS значительно снижает стресс ER и аутофагию, вызванный SCI

Здесь мы пытаемся оценить, может ли введение NaHS ослабить SCI-индуцированный стресс ER и аутофагию.Крысы были случайным образом разделены на три группы: (i) фиктивная группа; (ii) группа SCI; и (iii) группа SCI с обработкой NaHS (SCI + NaHS). Было замечено, что уровни GRP78, PDI, p-JNK, ATF6, CHOP и Cle-Caspase 12 были значительно увеличены после SCI, и это повышение заметно ингибировалось обработкой NaHS (Фигуры 2A, B). Затем мы дополнительно обнаружили уровни экспрессии p-mTOR, ATG5, ATG7, LC3 и Beclin-1. Как показано на фиг. 2C, D, экспрессия ATG5, ATG7, отношения LC3-II / I и уровней Beclin-1 увеличивалась после SCI, а введение NaHS резко ослабляло индуцированное SCI увеличение ATG5, ATG7, LC3-II. Отношение / I и уровни Beclin-1 (Рисунки 2C, D).Более того, обработка NaHS значительно блокировала вызванное SCI снижение p-mTOR (Фигуры 2C, D). Кроме того, с помощью окрашивания TUNEL было обнаружено, что SCI резко запускает апоптоз клеток (45,4 ± 2,81 против 4,15 ± 1,18, ^∗∗∗ P <0,001, N = 3), а обработка NaHS улучшала его (45,4 ± 2,81). против 24,78 ± 2,33, ^∗∗ P <0,01, N = 3) (рисунки 3A, B). В соответствии с TUNEL обработка NaHS значительно блокировала вызванное SCI снижение экспрессии Bcl-2 (0.79 ± 0,07 против 0,41 ± 0,06, ^∗∗ P <0,01, N = 3) и увеличение экспрессии Bax (1,31 ± 0,09 по сравнению с 2,2 ± 0,2, ^∗∗ P <0,01, N = 3) (Рисунки 3C – E). Взятые вместе, приведенные выше результаты показывают, что обработка NaHS значительно снижала уровни стресса ER и аутофагии после SCI.

РИСУНОК 2. Обработка NaHS значительно ослабляла вызванный SCI стресс ER и аутофагию через 1 день после SCI. (A) Репрезентативные вестерн-блоты фосфор-JNK (p-JNK), JNK, GRP78, PDI, ATF6, CHOP и Cle-каспазы 12 в имитационной модели, модели SCI и группах, обработанных SC + NaHS. (B) Количественная оценка данных вестерн-блоттинга p-JNK / JNK, GRP78, PDI, ATF6, CHOP и Cle-каспазы 12. (C) Репрезентативные вестерн-блоттинги фосфора-mTOR (p-mTOR), mTOR, ATG5, ATG7, Beclin1 и LC3B I / II для каждой группы после SCI. (D) Количественная оценка данных вестерн-блоттинга p-mTOR / mTOR, ATG5, ATG7, Beclin1 и LC3B I / II.Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные были представлены как среднее значение ± SEM, n = 5. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01 и ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с указанной группой.

РИСУНОК 3. Обработка NaHS блокировала апоптоз, запускаемый SCI, через 1 день после SCI. (A, B) Окрашивание TUNEL в имитационной модели, модели SCI и группах, обработанных SC + NaHS, масштабная полоса = 50 мкм. (C – E) Репрезентативные вестерн-блоты Bax и Bcl2 в имитационной модели, модели SCI и группах, обработанных SC + NaHS. Все данные были представлены как среднее значение ± SEM, n = 3. ^∗∗ P <0,01 и ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с указанной группой.

SCI вызывает потерю белков TJ и AJ

Хорошо известно, что TJ и AJ в ЭК кровеносных сосудов важны для поддержания целостности BSCB (Bartanusz et al., 2011; Zheng et al., 2017). Таким образом, мы оценили уровни экспрессии окклюдина, P120 и β-катенина, чтобы определить, изменились ли уровни белков TJ (окклюдин) и AJ (P120 и β-катенин) в ответ на SCI. По сравнению с имитационной группой, окклюдин, P120 и β-катенин были значительно снижены через 6, 12, 1 и 3 дней после SCI (Рисунки 4A – D). В заключение, в соответствии с предыдущими исследованиями (Lee J.Y. et al., 2012), эти данные позволяют предположить, что SCI индуцировал потерю белков TJ и AJ.

РИСУНОК 4. SCI вызывает потерю белков TJ и AJ. (A) Типичные результаты вестерн-блоттинга для белков TJ (окклюдин) и белков AJ (P120 и β-катенин) в фиктивной группе, через 6 часов, 12 часов, 1 день, 3 дня и 7 дней после группы SCI. (B – D) Количественная оценка экспрессии окклюдина, P120 и β-катенина. Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные представлены как среднее ± SEM, n = 5. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0.01 и ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с фиктивной группой.

Введение NaHS предотвращает потерю белков TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии после SCI

Чтобы определить, предотвращает ли NaHS потерю белков TJ и AJ после SCI, мы исследовали уровни экспрессии белков TJ и AJ после обработки NaHS для SCI. Результаты вестерн-блоттинга показали, что уровни окклюдина, P120 и β-катенина в спинном мозге снижались после SCI, что заметно блокируется обработкой NaHS (рисунки 5A – D).Чтобы дополнительно оценить, предотвращает ли лечение NaHS потерю TJs и AJs после SCI путем ингибирования ER стресса и аутофагии, для активации ER стресса и аутофагии были использованы туникамицин (TM, специфический активатор ER стресса) и рапамицин (Rapa, специфический активатор аутофагии). , соответственно. Как показано на фиг. 5A – D, обработка как TM, так и Rapa значительно изменила защитный эффект NaHS против SCI-индуцированной потери белков TJ и AJ. Результаты иммунофлуоресцентного окрашивания дополнительно подтвердили эффект NaHS (Фигуры 5E, F).Приведенные выше результаты демонстрируют, что обработка NaHS предотвращала потерю TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии.

РИСУНОК 5. NaHS предотвращает потерю белков TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии через 1 день после SCI. (A) TM и Rapa применялись для специфической активации ER стресса и аутофагии соответственно. Крыс случайным образом разделили на пять групп: (i) мнимая группа; (ii) модельная группа SCI; (iii) модель SCI с группой обработки NaHS (SCI + NaHS); (iv) модель SCI с обработкой NaHS и TM (SCI + NaHS + TM); и (v) модель SCI с группой обработки NaHS и Rapa (SCI + NaHS + Rapa).Репрезентативные вестерн-блоты P120, β-катенина и окклюдина из каждой группы. (B – D) Количественная оценка экспрессии P120, β-катенина и окклюдина. Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные представлены как среднее значение ± SEM, n = 5. ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с фиктивной группой. ^# P <0,05 и ^## P <0,01 по сравнению с указанной группой. (E, F) Типичные флуоресцентные изображения β-катенина и P120 (зеленый) в срезах ткани спинного мозга в каждой группе.Масштабная линейка = 50 мкм, n = 5.

ER стресс запускает аутофагию после SCI

Предыдущие сообщения показали, что стресс ER может опосредовать аутофагию (Kouroku et al., 2007; Lee H. et al., 2012). Чтобы еще больше подтвердить связь между стрессом ER и аутофагией во время SCI, для лечения SCI применяли 4-PBA (классический ингибитор стресса ER) и 3-MA (классический ингибитор аутофагии). Было замечено, что 4-PBA не только подавлял стресс ER, о чем свидетельствует снижение GRP78 и PDI, но также ингибировал аутофагию, о чем свидетельствует снижение уровня Beclin-1 и соотношения LC3-II / I (Рисунки 6A – C). ).Однако 3-MA только подавлял экспрессию Beclin-1 и соотношение LC3-II / I, без очевидных эффектов на GRP78 и PDI (Фигуры 6A, D, E). Приведенные выше результаты позволяют предположить, что стресс ER, вызванный SCI, значительно запускает аутофагию.

РИСУНОК 6. ER стресс запускает аутофагию после SCI. (A) 4-PBA и 3-MA применяли для специфического ингибирования ER стресса и аутофагии. Показаны репрезентативные вестерн-блоты GRP78, PDI, Beclin1 и LC3B I / II. (B – E) Количественная оценка экспрессии GRP78, PDI, Beclin1 и LC3B I / II.Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные представлены как среднее ± SEM, n = 5. ^∗∗ P <0,01 по сравнению с фиктивной группой, ^# P <0,05 и ^## P <0,01 по сравнению с Группа SCI.

Введение NaHS снижает проницаемость BSCB и улучшает функциональное восстановление за счет ингибирования стресса ER и аутофагии после SCI

Чтобы определить, снижает ли обработка NaHS индуцированное SCI увеличение проницаемости после SCI, краситель EB был использован для изучения влияния NaHS на проницаемость BSCB через 1 день после SCI.Как показано на фиг. 7A, B, по сравнению с фиктивной группой, экстравазация EB красителя была значительно увеличена в группе SCI, что позволяет предположить, что целостность BSCB была нарушена после SCI. После введения NaHS содержание ЭБ было заметно снижено по сравнению с таковым в группе SCI. Однако как TM, так и Rapa значительно снижали влияние NaHS на целостность BSCB (1,31 ± 0,15 против 0,53 ± 0,09, ^∗∗ P <0,01; 121 ± 0,15 против 0,53 ± 0,09, ^∗ P <0 .05) (Рисунки 7A, B). Мы также оценили шкалу оценок BBB и анализ следа, чтобы оценить восстановление опорно-двигательного аппарата у крыс после травмы спинного мозга. Не было заметных различий в показателях BBB между SCI, SCI + NaHS, SCI + NaHS + TM и SCI + NaHS + Rapa в группах 1, 3 и 5 дней после травмы. Однако через 7 и 14 дней после травмы было замечено, что оценка BBB группы SCI + NaHS была выше, чем оценка SCI (5,83 ± 0,65 против 2,33 ± 0,42, ^∗∗∗ P <0,001, N = 10), SCI + NaHS + TM (5.83 ± 0,65 против 3,67 ± 0,56, ^∗ P <0,05, N = 10) и группы SCI + NaHS + Rapa (5,83 ± 0,65 против 3,33 ± 0,42, ^∗∗ P <0,01, N = 10) (Рисунки 7C – E). При анализе следа у крыс, получавших NaHS, наблюдалось скоординированное ползание задней конечности (красные чернила) через 14 дней после SCI. Однако крысы из групп SCI, SCI + NaHS + TM и SCI + NaHS + Rapa по-прежнему демонстрировали нескоординированное ползание и обширное волочение (фигура 7F, N = 10).Эти данные показывают, что лечение NaHS эффективно предотвращало нарушение BSCB и улучшало восстановление двигательной функции за счет ингибирования стресса ER и аутофагии после SCI.

РИСУНОК 7. NaHS предотвращает нарушение BSCB и улучшает функциональное восстановление, подавляя стресс ER и аутофагию после SCI. (A, B) Типичные ткани всего спинного мозга и количественная оценка проницаемости BSCB для каждой группы, что указывает на то, что краситель EB проникает в спинной мозг.Все данные представлены как среднее ± SEM, n = 5. ^∗ P <0,05 и ^∗∗ P <0,01 по сравнению с группой SCI + NaHS. (C) Оценка локомоции BBB в различных группах 1, 3, 5, 7 и 14d после SCI, n = 10. (D, E) Количественная оценка оценки локомоции BBB на 7 и 14d от (С) . Все данные представлены как среднее значение ± SEM, n = 10. ^∗ P <0.05, ^∗∗ P <0,01 и ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с группой SCI + NaHS. (F) Результаты анализа следов от различных групп.

Введение NaHS подавляет стресс ER и аутофагию в ECs, обработанных OGD

Здесь мы дополнительно определили влияние обработки NaHS на стресс ER и аутофагию in vitro с использованием модели HUVEC, обрабатывающей OGD. По сравнению с контрольной группой, обработка OGD приводила к усиленной регуляции уровней экспрессии GRP78 и PDI, и это повышение значительно подавлялось введением NaHS (Фигуры 8A-C).Кроме того, в соответствии с результатами вестерн-блоттинга, группа, обработанная OGD, демонстрировала повышенную интенсивность флуоресценции PDI. Однако обработка NaHS заметно ослабила интенсивность флуоресценции PDI (рис. 8G). Кроме того, мы также обнаружили уровни экспрессии маркеров аутофагии. По сравнению с контрольной группой, уровни отношения Beclin-1 и LC3-II / I были значительно увеличены в группе, получавшей OGD, что было резко блокировано введением NaHS (Фигуры 8D-F).Кроме того, результаты иммунофлуоресцентного окрашивания также показали, что группа OGD проявляла повышенную интенсивность флуоресценции LC3 по сравнению с контрольной группой, которая значительно снижалась после обработки NaHS (фигура 8H). Взятые вместе, вышеуказанные результаты показывают, что обработка NaHS значительно ингибировала стресс ER и аутофагию in vitro .

РИСУНОК 8. Обработка NaHS ингибирует активацию стресса ER и аутофагию в HUVEC, обработанных OGD. (A) Репрезентативные вестерн-блоты GRP78 и PDI в HUVEC, подвергнутых OGD и обработанных NaHS. (B, C) Количественная оценка экспрессии GRP78 и PDI. Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ^∗ P <0,05 и ^∗∗ P <0,01 по сравнению с группой OGD. (D) Репрезентативные вестерн-блоты Beclin1 и LC3B I / II для каждой группы после OGD. (E, F) Количественная оценка экспрессии Beclin1 и LC3B I / II.Все данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ^∗ P <0,05 и ^∗∗ P <0,01 по сравнению с группой OGD. (G, H) Типичные флуоресцентные изображения PDI и LC3 (зеленый) в HUVEC. Ядро помечено DAPI (синий). Масштабная линейка = 50 мкм (PDI) и масштабная линейка = 25 мкм (LC3), n = 3.

Введение NaHS снижает потерю белков TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии

in vitro
Для дальнейшего определения того, связано ли защитное действие NaHS на BSCB с ингибированием стресса ER и аутофагии, HUVEC вводили NaHS, TM и Rapa.В соответствии с результатами, полученными in vivo , уровни экспрессии P120, β-катенина и окклюдина были снижены в группе OGD и значительно повышены в группе OGD + NaHS. Однако и TM, и Rapa заметно ослабляли защитный эффект NaHS (Рисунки 9A – D). Кроме того, результаты иммунофлуоресцентного окрашивания также показали, что интенсивность β-катенина и окклюдина в группе OGD была снижена по сравнению с таковой в контрольной группе. Однако обработка NaHS значительно изменила деструктивный эффект OGD, о чем свидетельствует повышенная интенсивность β-катенина и окклюдина (рисунки 9E, F).И TM, и Rapa отменили такой эффект NaHS. Эти данные показывают, что NaHS эффективно ослабляет потерю TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии в ECs, обработанных OGD.
РИСУНОК 9. NaHS защищает обработанные OGD HUVEC, ингибируя стресс ER и аутофагию in vitro . (A) Репрезентативные вестерн-блоты P120, β-катенина и окклюдина для каждой группы. (B – D) Количественная оценка экспрессии P120, β-катенина и окклюдина.Значение относительной плотности полосы было нормализовано к GAPDH. Все данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. ^∗∗∗ P <0,001 по сравнению с группой Con. ^# P <0,05 и ^## P <0,01 по сравнению с указанной группой. (E, F) Типичные флуоресцентные изображения β-катенина и окклюдина (зеленый) в HUVEC для каждой группы. Ядро помечено DAPI (синий). Масштабная линейка = 50 мкм, n = 3.
Обсуждение
Травма спинного мозга — разрушительное неврологическое заболевание, от которого ежегодно страдают тысячи пациентов.Ряд вторичных повреждений, включая сосудистые изменения, оксидативный стресс и апоптоз, считаются основными причинами инвалидности (Fan et al., 2013; Colon et al., 2016; Измайлов и др., 2017). Таким образом, важно изучить эффективные терапевтические методы лечения ТСМ и уменьшить повреждение тканей, вызванное ТСМ, и неврологические расстройства. В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что введение NaHS эффективно снижает деградацию белков TJ и AJ, предотвращает проницаемость BSCB и, в конечном итоге, защищает спинной мозг от вторичного повреждения для улучшения функционального восстановления.Ингибирование стресса ER и аутофагии были потенциальными молекулярными механизмами, лежащими в основе лечения NaHS для SCI.
Как донор H ₂ S, NaHS широко использовался для оценки терапевтического потенциала экзогенной доставки H ₂ S. В предыдущем исследовании использовались водные растворы NaHS для оценки ответа кольца аорты крысы in vitro (Zhao et al., 2001). NaHS уменьшал степень острого повреждения легких за счет снижения уровней IL-6 и IL-8, одновременно повышая уровни IL-10 в легочной ткани и плазме (Li et al., 2008). Более того, NaHS продемонстрировал эффективность в предотвращении повреждения клеток, вызванного ROS в клетках мозга (Whiteman et al., 2005). Недавние исследования также показали, что NaHS оказывает защитное действие при повреждении периферических нервов и реперфузии ишемии спинного мозга (Park et al., 2015; Xie et al., 2017b). Наши результаты показали, что NaHS может улучшить функциональное восстановление после SCI, предполагая, что NaHS, вероятно, представляет собой потенциальный терапевтический подход к травматическому SCI.
Хорошо известно, что поддержание целостности BSCB эффективно способствует восстановлению центральной нервной системы (ЦНС) после SCI, а белки TJ и AJ являются ключевыми компонентами BSCB (Lee J.Ю. и др., 2012). Нарушение BSCB позволяет нейтрофилам и другим иммунным клеткам проникать в область повреждения, что приводит к серьезным вторичным повреждениям (Penas et al., 2007). Следовательно, регуляция белков TJ и AJ может быть потенциальным механизмом индуцированной NaHS нейропротекторной роли во время SCI. Кроме того, было продемонстрировано, что введение NaHS защищает целостность гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) после церебральной ишемии и черепно-мозговой травмы (Wang et al., 2014; Xu et al., 2018). BSCB аналогичен BBB в том, что он избирательно проницаем и блокирует проникновение клеток крови и других молекул в ЦНС (Bartanusz et al., 2011). Таким образом, мы оценили влияние NaHS на BSCB после SCI. Мы обнаружили, что обработка NaHS снижает утечку красителя EB. Кроме того, уменьшение белков TJ (P120, β-катенин) и AJ (окклюдин) значительно ингибировалось обработкой NaHS по сравнению с проницаемостью BSCB во время SCI. Кроме того, обработка NaHS ингибировала деградацию белков TJ и AJ в условиях OGD in vitro .Взятые вместе, эти результаты показали, что лечение NaHS способствует поддержанию целостности BSCB после SCI.
ER стресс происходит, когда неправильно свернутые белки накапливаются в просвете ER и вызывают дисфункцию ER, которая известна как ответ на развернутый белок (UPR) (Schroder and Kaufman, 2005). ER стресс является одним из важнейших молекулярных механизмов, лежащих в основе патогенеза SCI. Недавние исследования показали, что ингибирование стресса ER предотвращает нарушение BSCB (Zheng et al., 2017), а лечение NaHS может подавлять активацию стресса ER (Xu et al., 2017). В соответствии с предыдущим исследованием, мы оценили роль стресса ER в эффекте NaHS на восстановление BSCB после SCI или OGD и обнаружили, что обработка NaHS ингибировала активацию стресса ER. Кроме того, активация ER стресса с помощью TM значительно изменила защитный эффект NaHS на восстановление BSCB и, следовательно, функциональное моторное восстановление после SCI. Эти данные в совокупности предполагают, что лечение NaHS спасает нарушение BSCB от SCI посредством ингибирования стресса ER.
Аутофагия, катаболический процесс клеточной органеллы, удаляет нежелательные клеточные компоненты через двухмембранные аутофагосомы, слитые с лизосомами, и, таким образом, важна для выживания, дифференциации, развития и гомеостаза (Noda and Inagaki, 2015).Предыдущие исследования показали, что аутофагия играет деструктивную роль во время ТСМ, и ингибирование аутофагии может способствовать восстановлению опорно-двигательной функции мышей (Wu et al., 2018). В соответствии с предыдущими исследованиями, наши результаты показали, что аутофагия заметно активируется во время острой фазы SCI. Введение NaHS подавляло экспрессию Beclin1 и соотношение LC3-II / I in vivo и in vitro и предотвращало потерю белка TJs и AJs. Однако роль аутофагии в SCI и реципрокная регуляция между H ₂ S и аутофагией остается спорной.Недавнее исследование показало, что H ₂ S способствует аутофагии через сигнальный путь PI3K / Akt / mTOR в клетках гепатоцеллюлярной карциномы (Wang et al., 2017). Более того, стимуляция или усиление аутофагии может улучшить защиту нейронов и функциональное восстановление во время SCI (Bai et al., 2017; Hu et al., 2017). Как известно, патологический статус спинного мозга после травмы спинного мозга меняется. Мы предполагаем, что разные периоды ТСМ могут быть обусловленным фактором различной роли аутофагии и H ₂ S в ТСМ, особенно в острой фазе и хронической фазе.
Наши исследования механизмов показали, что стресс ER и активация аутофагии участвуют в лечении NaHS при разрушении BSCB во время SCI. Однако до сих пор неясно, имеет ли ER стресс перекрестную связь с аутофагией во время лечения NaHS для BSCB. Предыдущее и наше текущее исследование продемонстрировало, что существует взаимная перекрестная связь между стрессом ER и аутофагией (Hoyer-Hansen and Jaattela, 2007). Кроме того, некоторые исследования показали, что активированный стресс ER может запускать аутофагию (Chandrika et al., 2015; Feng et al., 2017). Более того, стресс ER может индуцировать инициацию образования аутофагосом через сигнальный путь IRE1 / JNK (Ogata et al., 2006) и сигнальный путь PERK / eIF2α (Kouroku et al., 2007; B’Chir et al., 2013). В нашем настоящем исследовании 4-PBA заметно блокировал аутофагию, вызванную SCI, однако ингибитор аутофагии (3-MA) может только подавлять активность аутофагии без заметного воздействия на стресс ER. Эти результаты предполагают, что обработка NaHS блокировала SCI-индуцированный ER-стресс и ER-стресс-связанную аутофагию, впоследствии улучшая SCI.
Интересное открытие в настоящем исследовании было подтверждено, что ингибирование аутофагии и стресса ER способствует лечению H ₂ S для SCI. Было продемонстрировано, что H ₂ S регулирует окислительный стресс (Kimura et al., 2010; Xie et al., 2017b). Но роль H ₂ S в окислительном стрессе остается спорной. Некоторые исследования демонстрируют, что H ₂ S напрямую подавляет окислительный стресс (Kimura et al., 2010), тогда как другие исследования демонстрируют, что h3S оказывает вредное влияние на окислительный стресс, увеличивая образование активных форм кислорода и приводя к образованию глутатиона (GSH ) истощение (Truong, 2006).Настоящее исследование не предоставило дополнительных доказательств связи между h3S и окислительным стрессом в нарушении BSCB после SCI. В некоторых исследованиях сообщается, что концентрация H ₂ S является решающим фактором его значимой физиологической и токсикологической роли. Было продемонстрировано, что концентрация (∼15 мМ) H ₂ S быстро вызывает смерть (Roth, 1993). Однако уровни H ₂ S <0,1 мМ генерируются эндогенно и, как было показано, влияют на нейронную связь и регуляцию тонуса гладких мышц (Wang, 2002; Teague et al., 2010). Таким образом, важно использовать разумную концентрацию H ₂ S для лечения связанного заболевания. В нашем текущем исследовании использовали NaHS (5,6 мг / кг) и NaHS (100 мкМ) in vivo и in vitro , что составляет менее 0,1 мМ. Таким образом, в нашем исследовании разумно предположить, что обработка NaHS может подавлять окислительный стресс и улучшать разрушение BSCB после SCI.
Таким образом, наше исследование продемонстрировало, что введение NaHS значительно улучшает нарушение BSCB и, следовательно, улучшает функциональное моторное восстановление после SCI.Ингибирование стресса ER и аутофагии, связанной со стрессом ER, были вовлечены в лечение NaHS для SCI. Наше открытие предполагает, что рациональное лечение H ₂ S способствует восстановлению SCI, что является потенциальной терапевтической стратегией для SCI.
Авторские взносы
JX и HX задумали и разработали эксперименты. HW и WH проводили эксперименты. HW и YW выполнили статистический анализ и написали статью. JL, KX, ZL, QW, YL, LX, JW и HH оказывали помощь в проведении экспериментов.Все авторы обсудили результаты и одобрили окончательную рукопись.
Финансирование
Эта работа была поддержана исследовательскими грантами Национального фонда естественных наук Китая (81572237, 81722028 и 81701809), Провинциального фонда естественных наук Чжэцзян (LQ18H0
и R18H50001), а также грантами на открытие проекта по открытию ключевой фармацевтической дисциплины провинции Чжэцзян. Наук.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Ссылки
Абэ К. и Кимура Х. (1996). Возможная роль сероводорода как эндогенного нейромодулятора. J. Neurosci. 16, 1066–1071. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.16-03-01066.1996
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Acioglu, C., Mirabelli, E., Baykal, A. T., Ni, L., Ratnayake, A., Heary, R. F., et al. (2016). Антагонизм Toll-подобного рецептора 9 модулирует функцию нейронов спинного мозга и выживаемость: прямые механизмы против опосредованных астроцитами. Brain Behav. Иммун. 56, 310-324. DOI: 10.1016 / j.bbi.2016.03.027
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бай, Л., Мэй, X., Ван, Ю., Юань, Ю., Би, Ю., Ли, Г., и др. (2017). Роль нетрина-1 в улучшении функционального восстановления за счет стимуляции аутофагии после травмы спинного мозга у крыс. Front Cell Neurosci 11, 350. doi: 10.3389 / fncel.2017.00350
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бартануш, В., Джезова, Д., Аладжаджян, Б., и Дигичейлиоглу, М. (2011). Гемато-спинномозговой барьер: морфология и клинические значения. Ann. Neurol. 70, 194-206. DOI: 10.1002 / ana.22421
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Б’Чир В., Маурин А. К., Карраро В., Авероус Дж., Жусс К., Мураниши Ю. и др. (2013). Путь eIF2alpha / ATF4 важен для индуцированной стрессом экспрессии гена аутофагии. Nucleic Acids Res. 41 (16), 7683-7699.DOI: 10.1093 / nar / gkt563
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Calvert, J. W., Jha, S., Gundewar, S., Elrod, J. W., Ramachandran, A., Pattillo, C. B., et al. (2009). Сероводород опосредует кардиозащиту посредством передачи сигналов Nrf2. Circ. Res. 105, 365-374. DOI: 10.1161 / CIRCRESAHA.109.199919
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чандрика, Б. Б., Янг, К., Оу, Ю., Фэн, X., Мухоза, Д., Холмс, А.F., et al. (2015). Аутофагия, вызванная стрессом эндоплазматической сети, обеспечивает цитопротекцию от химической гипоксии и оксидантного повреждения, а также уменьшает травмы почек, вызванные ишемией-реперфузией. PLoS ONE 10 (10), e0140025. DOI: 10.1371 / journal.pone.0140025
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чен, Дж., Гао, Дж., Сан, В., Ли, Л., Ван, Ю., Бай, С. и др. (2016). Участие экзогенного h3S в восстановлении кардиозащиты от ишемического посткондиционирования за счет увеличения аутофагии в старых сердцах. Внутр. J. Cardiol. 220, 681-692. DOI: 10.1016 / j.ijcard.2016.06.200
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Колон, Дж. М., Торрадо, А. И., Кахигас, А., Сантьяго, Дж. М., Сальгадо, И. К., Арройо, Ю. и др. (2016). Введение тамоксифена сразу или через 24 часа после травмы спинного мозга улучшает восстановление опорно-двигательного аппарата и снижает вторичные повреждения у самок крыс. J. Neurotrauma 33 (18), 1696-1708. DOI: 10.1089 / neu.2015.4111
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Дин, W.X. и Инь X. М. (2008). Сортировка, распознавание и активация путей деградации неправильно свернутого белка посредством макроаутофагии и протеасомы. Аутофагия 4, 141–150. DOI: 10.4161 / auto.5190
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фань, З. К., Цао, Ю., Львов, Г., Ван, Ю. С., и Го, З. П. (2013). Влияние воздействия сигаретного дыма на повреждение спинного мозга у крыс. J. Neurotrauma 30, 473-479. DOI: 10.1089 / neu.2012.2574
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фанг, Б., Li, X.Q., Bi, B., Tan, W.F., Liu, G., Zhang, Y., et al. (2015). Дексмедетомидин ослабляет нарушение гемато-спинномозгового барьера, вызванное ишемическим реперфузионным повреждением спинного мозга у крыс. Cell Physiol. Biochem 36, 373-383. DOI: 10.1159 / 000430107
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фэн Д., Ван Б., Ван Л., Абрахам Н., Тао К., Хуанг Л. и др. (2017). Лечение мелатонином до ишемии облегчало острое повреждение нейронов после ишемического инсульта путем ингибирования стресс-зависимой аутофагии эндоплазматического ретикулума посредством передачи сигналов PERK и IRE1. J. Pineal Res. 62. DOI: 10.1111 / jpi.12395
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фиоруччи, С., Диструтти, Э., Чирино, Г., и Уоллес, Дж. Л. (2006). Новые роли сероводорода в желудочно-кишечном тракте и печени. Гастроэнтерология 131, 259-271. DOI: 10.1053 / j.gastro.2006.02.033
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гонг, Л., Тан, Ю., Ан, Р., Лин, М., Чен, Л., и Ду, Дж.(2017). RTN1-C опосредует церебральную ишемию / реперфузионное повреждение через ER стресс и митохондриально-ассоциированные пути апоптоза. Диск смерти клетки 8 (10), e3080. DOI: 10.1038 / cddis.2017.465
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Хэ, М., Дин, Ю., Чу, К., Тан, Дж., Сяо, К., и Ло, З. Г. (2016). Индукция аутофагии стабилизирует микротрубочки и способствует регенерации аксонов после повреждения спинного мозга. Proc. Natl. Акад. Sci. США 113 (40), 11324-11329.DOI: 10.1073 / pnas.1611282113
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Хойер-Хансен, М., и Яаттела, М. (2007). Связь стресса эндоплазматического ретикулума с аутофагией за счет развернутого белкового ответа и кальция. Смерть клетки. Дифференц 14, 1576-1582. DOI: 10.1038 / sj.cdd.4402200
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Hu, J., Han, H., Cao, P., Yu, W., Yang, C., Gao, Y., et al. (2017). Ресвератрол улучшает защиту нейронов и функциональное восстановление за счет усиления аутофагии после травмы спинного мозга у мышей. Am J Transl Res 9, 4607–4616.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Измайлов А.А., Повышева Т.В., Баширов Ф.В., Соколов М.Е., Фадеев Ф.О., Гарифулин Р.Р. и др. (2017). Молекулярные и клеточные изменения спинного мозга, вызванные аденовирусной векторной и клеточно-опосредованной тройной генной терапией после тяжелого ушиба. Front Pharmacol 8, 813. doi: 10.3389 / fphar.2017.00813
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Камат, П.К., Кайлес, П., Калани, А., Тьяги, Н. (2016). Сероводород улучшает индуцированную гомоцистеином патологию, подобную болезни Альцгеймера, нарушение гематоэнцефалического барьера и синаптические расстройства. Мол. Neurobiol. 53, 2451-2467. DOI: 10.1007 / s12035-015-9212-4
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кимура Ю., Гото Ю. и Кимура Х. (2010). Сероводород увеличивает выработку глутатиона и подавляет окислительный стресс в митохондриях. Антиоксиданты и сигнализация окислительно-восстановительного потенциала 12, 1.DOI: 10.1089 / ars.2008.2282
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Куроку Ю., Фудзита Э., Танида И., Уэно Т., Исоаи А., Кумагаи Х. и др. (2007). ER стресс (фосфорилирование PERK / eIF2alpha) опосредует индуцированное полиглутамином превращение LC3, важный этап для формирования аутофагии. Смерть клетки. Дифференц 14, 230-239. DOI: 10.1038 / sj.cdd.4401984
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Куанг, X., Ху, В., Ян, М., и Вонг, П. К. (2010). Фенилмасляная кислота подавляет вызванный накоплением белка ER стресс в астроцитах, инфицированных ретровирусом, и задерживает начало паралича у инфицированных мышей. Neurochem. Int. 57, 738-748. DOI: 10.1016 / j.neuint.2010.08.010
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лай, Э., Теодоро, Т., и Волчук, А. (2007). Стресс эндоплазматического ретикулума: сигнал о развернутом белковом ответе. Physiology (Bethesda) 22, 193-201.DOI: 10.1152 / Physiol.00050.2006
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, Х., Но, Дж. Й., О, Й., Ким, Й., Чанг, Дж. У., Чанг, К. У. и др. (2012). IRE1 играет важную роль в ER стресс-опосредованной агрегации мутантного хантингтина посредством ингибирования потока аутофагии. Hum. Мол. Genet. 21, 101-114. DOI: 10.1093 / hmg / ddr445
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, Дж. Й., Чой, Х. Й., Парк, К.С., Джу, Б. Г., Юне, Т. Ю. (2018). Митрамицин А улучшает функциональное восстановление, ингибируя разрушение BSCB и кровотечение после травмы спинного мозга. J. Neurotrauma 35, 508-520. DOI: 10.1089 / neu.2017.5235
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, Дж. Й., Ким, Х. С., Чой, Х. Й., О, Т. Х. и Юн, Т. Ю. (2012). Флуоксетин подавляет активацию матричной металлопротеиназы и предотвращает нарушение гемато-спинномозгового барьера после повреждения спинного мозга. Мозг 135 (Pt 8), 2375-2389. DOI: 10.1093 / brain / aws171
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Li, J., Wang, Q., Wang, H., Wu, Y., Yin, J., Chen, J., et al. (2018). Лентивирус, опосредующий FGF13, усиливает регенерацию аксонов после травмы спинного мозга за счет стабилизации микротрубочек и улучшения функции митохондрий. J. Neurotrauma 35, 548-559. DOI: 10.1089 / neu.2017.5205
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, Т., Zhao, B., Wang, C., Wang, H., Liu, Z., Li, W., et al. (2008). Регуляторные эффекты сероводорода на уровни IL-6, IL-8 и IL-10 в плазме и легочной ткани крыс с острым повреждением легких. Exp Biol Med (Maywood) 233, 1081-1087. DOI: 10.3181 / 0712-RM-354
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, X. Q., Чен, Ф. С., Тан, В. Ф., Фанг, Б., Чжан, З. Л., и Ма, Х. (2017). Повышенный уровень microRNA-129-5p уменьшает нейровоспаление и повреждение гематоэнцефалического барьера после ишемии-реперфузии за счет ингибирования HMGB1 и пути цитокинов TLR3. J Нейровоспаление 14, 205. doi: 10.1186 / s12974-017-0977-4
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Lin, F., Liao, C., Sun, Y., Zhang, J., Lu, W., Bai, Y., et al. (2017). Сероводород подавляет индуцированный сигаретным дымом стресс эндоплазматической сети и апоптоз в клетках бронхиального эпителия. Front Pharmacol 8, 675. doi: 10.3389 / fphar.2017.00675
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Магеровски, М., Magierowska, K., Hubalewska-Mazgaj, M., Surmiak, M., Sliwowski, Z., Wierdak, M., et al. (2017). Взаимосвязь между сероводородом и оксидом углерода в механизме заживления экспериментальных язв желудка, регуляции желудочного кровотока и сопутствующего воспаления. Biochem Pharmacol. DOI: 10.1016 / j.bcp.2017.11.020
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Martelli, A., Testai, L., Breschi, M.C., Blandizzi, C., Virdis, A., Taddei, S., и другие. (2012). Сероводород: новая возможность для открытия лекарств. Med Res Rev 32, 1093-1130. DOI: 10.1002 / med.20234
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Меха, М., Торрао, А. С., Местре, Л., Каррильо-Салинас, Ф. Дж., Мешулам, Р., и Гуаза, К. (2012). Каннабидиол защищает клетки-предшественники олигодендроцитов от апоптоза, вызванного воспалением, ослабляя стресс эндоплазматического ретикулума. Cell Death Dis 3, e331. DOI: 10.1038 / cddis.2012.71
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Меркадо, Г., Кастильо, В., Сото, П., Лопес, Н., Акстен, Дж. М., Сарди, С. П. и др. (2018). Направление передачи сигналов PERK с помощью небольшой молекулы GSK2606414 предотвращает нейродегенерацию в модели болезни Паркинсона. Neurobiol. Дис. 112, 136-148. DOI: 10.1016 / j.nbd.2018.01.004
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Огата, М., Хино, С., Сайто, А., Морикава, К., Кондо, С., Канемото, С., и др. (2006). Аутофагия активируется для выживания клеток после стресса эндоплазматического ретикулума. Мол. Клетка. Биол. 26 (24), 9220-9231. DOI: 10.1128 / MCB.01453-06
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Парк, Б. С., Ким, Х. В., Рю, И. Дж., Парк, К., Йео, С. Г., Ха, Ю. и др. (2015). Сероводород необходим для реакции шванновских клеток на повреждение периферических нервов. J. Neurochem. 132, 230-242. DOI: 10.1111 / JNC.12932
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Penas, C., Guzman, M. S., Verdu, E., Fores, J., Navarro, X., and Casas, C. (2007). Повреждение спинного мозга вызывает стресс эндоплазматического ретикулума с различными клеточными зависимостями. J. Neurochem. 102, 1242-1255. DOI: 10.1111 / j.1471-4159.2007.04671.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ржимски, Т., Милани, М., Пайк, Л., Буффа, Ф., Меллор, Х. Р., Винчестер, Л., и другие. (2010). Регулирование аутофагии с помощью ATF4 в ответ на тяжелую гипоксию. Онкоген 29 (31), 4424-4435. DOI: 10.1038 / onc.2010.191
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шредер М. и Кауфман Р. Дж. (2005). Ответ на развернутый белок у млекопитающих. Annu. Rev. Biochem. 74, 739-789. DOI: 10.1146 / annurev.biochem.73.011303.074134
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Тиг Б., Асиеду С., Мур П.К. (2010). Расслабляющий эффект гладкой мускулатуры сероводорода in vitro: доказательства физиологической роли в контроле сократимости кишечника. Br. J. Pharmacol. 137, 139–145. DOI: 10.1038 / sj.bjp.0704858
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст
Чыонг Д. Х., Эхбал М. А., Хиндмарш В., Рот С. Х., О’Брайен П. Дж. (2006). Молекулярные механизмы токсичности сероводорода. Drug Metab. Ред. 38, 733–744. DOI: 10.1080 / 03602530600959607
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ван, Р.(2002). Двое — компания, трое — толпа: может ли h3S быть третьим эндогенным газовым передатчиком? Faseb Journal Официальное издание Федерации американских обществ экспериментальной биологии 16, 1792. doi: 10.1096 / fj.02-0211hyp
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Wang, S. S., Chen, Y. H., Chen, N., Wang, L. J., Chen, D. X., Weng, H. L., et al. (2017). Сероводород способствует аутофагии клеток гепатоцеллюлярной карциномы через сигнальный путь PI3K / Akt / mTOR. Cell Death Dis 8, e2688. DOI: 10.1038 / cddis.2017.18
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ван, Ю., Цзя, Дж., Ао, Г., Ху, Л., Лю, Х., Сяо, Ю. и др. (2014). Сероводород защищает целостность гематоэнцефалического барьера после церебральной ишемии. J. Neurochem. 129, 827-838. DOI: 10.1111 / jnc.12695
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Whiteman, M., Cheung, N. S., Zhu, Y. Z., Chu, S.Х., Сиау, Дж. Л., Вонг, Б. С. и др. (2005). Сероводород: новый ингибитор окислительного повреждения головного мозга, опосредованного хлорноватистой кислотой? Biochem Biophys Res Commun 326, 794-798. DOI: 10.1016 / j.bbrc.2004.11.110
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Wu, F., Wei, X., Wu, Y., Kong, X., Hu, A., Tong, S., et al. (2018). Хлорохин способствует восстановлению после острого повреждения спинного мозга, подавляя воспаление, связанное с аутофагией, и стресс эндоплазматического ретикулума. J Нейротравма. DOI: 10.1089 / neu.2017.5414
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Wu, J., Zhao, Z., Kumar, A., Lipinski, M. M., Loane, D. J., Stoica, B.A., et al. (2016). Стресс эндоплазматической сети и нарушенный нейрогенез в головном мозге связаны с когнитивными нарушениями и депрессивным поведением после травмы спинного мозга. J. Neurotrauma 33 (21), 1919-1935. DOI: 10.1089 / neu.2015.4348
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сяо, Дж., Zhu, X., Kang, B., Xu, J., Wu, L., Hong, J., et al. (2015). Сероводород ослабляет травмы, вызванные гипоксией-реоксигенацией миокарда, ингибируя аутофагию посредством активации mTOR. Cell Physiol. Biochem 37, 2444–2453. DOI: 10.1159 / 000438597
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сяо, Т., Ло, Дж., Ву, З., Ли, Ф., Цзэн, О., и Ян, Дж. (2016). Влияние сероводорода на фиброз миокарда и регулируемую PI3K / AKT1 аутофагию у крыс с диабетом. Мол Мед Реп 13, 1765–1773. DOI: 10.3892 / mmr.2015.4689
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Xie, L., Yu, S., Wang, Z., Yang, K., Liu, Z., Li, C., et al. (2017a). Никотинамид-аденин-динуклеотид защищает от апоптоза, вызванного реперфузией ишемии спинного мозга, путем блокирования аутофагии. Oxid Med Cell Longev 2017, 7063874. DOI: 10.1155 / 2017/7063874
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Се, Л., Ю, С., Ян, К., Ли, К., и Лян, Ю. (2017b). Сероводород подавляет аутофагическую гибель нейронных клеток за счет снижения окислительного стресса при ишемии и реперфузии спинного мозга. Oxid Med Cell Longev 2017: 8640284. DOI: 10.1155 / 2017/8640284
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Xu, D., Jin, H., Wen, J., Chen, J., Chen, D., Cai, N., et al. (2017). Сероводород защищает от стресса эндоплазматического ретикулума и повреждения митохондрий в клетках пульпозного ядра и облегчает дегенерацию межпозвонкового диска. Pharmacol. Res. 117, 357-369. DOI: 10.1016 / j.phrs.2017.01.005
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Xu, K., Wu, F., Xu, K., Li, Z., Wei, X., Lu, Q., et al. (2018). NaHS восстанавливает функцию митохондрий и ингибирует аутофагию путем активации сигнального пути PI3K / Akt / mTOR для улучшения функционального восстановления после черепно-мозговой травмы. Химико-биологические взаимодействия. DOI: 10.1016 / j.cbi.2018.02.028
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Yu, Q., Ван Б., Чжао Т., Чжан Х., Тао Л., Ши Дж. И др. (2017). NaHS защищает от нарушений, вызванных кислородно-глюкозной недостаточностью в разном возрасте первичных нейронов гиппокампа. Front Cell Neurosci 11, 67. doi: 10.3389 / fncel.2017.00067
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чжао, В., Чжан, Дж., Лу, Ю. и Ван, Р. (2001). Сосудорасширяющий эффект H (2) S как нового открывателя эндогенных газообразных K (АТФ) каналов. EMBO J. 20 (21), 6008-6016.DOI: 10.1093 / emboj / 20.21.6008
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст
Zheng, B., Ye, L., Zhou, Y., Zhu, S., Wang, Q., Shi, H., et al. (2016). Эпидермальный фактор роста ослабляет нарушение гематоэнцефалического барьера через путь PI3K / Akt / Rac1 после острого повреждения спинного мозга. J. Cell Mol. Med. 20, 1062-1075. DOI: 10.1111 / JCMM.12761
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чжэн, Б., Чжоу, Ю., Чжан, Х., Ян, Г., Хун, З., Han, D., et al. (2017). Dl-3-n-бутилфталид предотвращает нарушение гемато-спинномозгового барьера путем ингибирования стресса эндоплазматического ретикулума после повреждения спинного мозга. Int J Biol Sci 13 (12), 1520-1531. DOI: 10.7150 / ijbs.21107
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Разрушение гематоэнцефалического барьера и уменьшение перицитов при боковом амиотрофическом склерозе
1.
Andersen PM, Al-Chalabi A (2011) Клиническая генетика бокового амиотрофического склероза: что мы на самом деле знаем? Nat Rev Neurol 7 (11): 603–615.DOI: 10.1038 / nrneurol.2011.150
PubMed Статья CAS Google ученый
2.
Annunziata P, Volpi N (1985) Высокие уровни C3c в спинномозговой жидкости у пациентов с боковым амиотрофическим склерозом. Acta Neurol Scand 72 (1): 61–64
PubMed Статья CAS Google ученый
3.
Апостольски С., Николич Дж., Бугарски-Прокоплевич С., Милетик В., Павлович С., Филипович С. (1991) Иммунологические данные сыворотки и спинномозговой жидкости при БАС.Acta Neurol Scand 83 (2): 96–98
PubMed Статья CAS Google ученый
4.
Armulik A, Genove G, Mae M, Nisancioglu MH, Wallgard E, Niaudet C, He L, Norlin J, Lindblom P, Strittmatter K, Johansson BR, Betsholtz C (2010) Перициты регулируют кровь-мозг барьер. Nature 468 (7323): 557–561. DOI: 10.1038 / nature09522
PubMed Статья CAS Google ученый
5.
Beers DR, Henkel JS, Xiao Q, Zhao W, Wang J, Yen AA, Siklos L, McKercher SR, Appel SH (2006) Микроглия дикого типа увеличивает выживаемость мышей с нокаутом PU.1 с семейным боковым амиотрофическим склерозом. Proc Natl Acad Sci USA 103 (43): 16021–16026. DOI: 10.1073 / pnas.0607423103
Google ученый
6.
Белл Р.Д., Винклер Э.А., Сагаре А.П., Сингх И., ЛаРю Б., Дин Р., Злокович Б.В. (2010) Перициты контролируют ключевые нервно-сосудистые функции и нейрональный фенотип во взрослом мозге и во время старения мозга.Нейрон 68 (3): 409–427. DOI: 10.1016 / j.neuron.2010.09.043
PubMed Статья CAS Google ученый
7.
Bell RD, Winkler EA, Singh I, Sagare AP, Deane R, Wu Z, Holtzman DM, Betsholtz C, Armulik A, Sallstrom J, Berk BC, Zlokovic BV (2012) Аполипопротеин E контролирует цереброваскулярную целостность циклофилин A. Nature 485 (7399): 512–516. DOI: 10.1038 / nature11087
PubMed CAS Google ученый
8.
Beuche W, Yushchenko M, Mader M, Maliszewska M, Felgenhauer K, Weber F (2000) Матричная металлопротеиназа-9 повышена в сыворотке крови пациентов с боковым амиотрофическим склерозом. NeuroReport 11 (16): 3419–3422
PubMed Статья CAS Google ученый
9.
Boillee S, Yamanaka K, Lobsiger CS, Copeland NG, Jenkins NA, Kassiotis G, Kollias G, Cleveland DW (2006) Начало и прогрессирование наследственного БАС, определяемого двигательными нейронами и микроглией.Science 312 (5778): 1389–1392. DOI: 10.1126 / science.1123511
PubMed Статья CAS Google ученый
10.
Brettschneider J, Petzold A, Sussmuth SD, Ludolph AC, Tumani H (2006) Маркеры повреждения аксонов в спинномозговой жидкости увеличиваются при БАС. Неврология 66 (6): 852–856. DOI: 10.1212 / 01.wnl.0000203120.85850.54
PubMed Статья CAS Google ученый
11.
Chen SY, Wang Y, Telen MJ, Chi JT (2008) Геномный анализ экспрессии микроРНК эритроцитов при серповидно-клеточных заболеваниях. PLoS ONE 3 (6): e2360. DOI: 10.1371 / journal.pone.0002360
PubMed Статья Google ученый
12.
Clement AM, Nguyen MD, Roberts EA, Garcia ML, Boillee S, Rule M, McMahon AP, Doucette W, Siwek D, Ferrante RJ, Brown RH Jr, Julien JP, Goldstein LS, Cleveland DW (2003 г. ) Ненейрональные клетки дикого типа увеличивают выживаемость мутантных мотонейронов SOD1 у мышей с БАС.Наука 302 (5642): 113–117. DOI: 10.1126 / science.1086071
PubMed Статья CAS Google ученый
13.
Каллен К.М., Кочи З., Стоун Дж. (2006) Микрососудистая патология в стареющем мозге человека: доказательства того, что сенильные бляшки являются местами микрокровоизлияний. Neurobiol Aging 27 (12): 1786–1796
PubMed Статья CAS Google ученый
14.
Daneman R, Zhou L, Kebede AA, Barres BA (2010) Перициты необходимы для целостности гематоэнцефалического барьера во время эмбриогенеза. Nature 468 (7323): 562–566. DOI: 10.1038 / nature09513
PubMed Статья CAS Google ученый
15.
DeJesus-Hernandez M, Mackenzie IR, Boeve BF, Boxer AL, Baker M, Rutherford NJ, Nicholson AM, Finch NA, Flynn H, Adamson J, Kouri N, Wojtas A, Sengdy P, Hsiung GY, Каридас А., Сили В.В., Джозефс К.А., Коппола Г., Гешвинд Д.Х., Всзолек З.К., Фельдман Х., Кнопман Д.С., Петерсен Р.К., Миллер Б.Л., Диксон Д.В., Бойлан К.Б., Графф-Рэдфорд Н.Р., Радемакерс Р. (2011) Расширенный гексануклеотидный повтор GGGGCC в некодирующей области C9ORF72 вызывает FTD и ALS, сцепленные с хромосомой 9p.Нейрон 72 (2): 245–256. DOI: 10.1016 / j.neuron.2011.09.011
PubMed Статья CAS Google ученый
16.
Деместре М., Паркин-Смит Г., Петцольд А., Пуллен А.Х. (2005) Про и активная форма матриксной металлопротеиназы-9 повышена в сыворотке крови пациентов с боковым амиотрофическим склерозом. Дж. Нейроиммунол 159 (1-2): 146-154. DOI: 10.1016 / j.jneuroim.2004.09.015
PubMed Статья CAS Google ученый
17.
Donnenfeld H, Kascsak RJ, Bartfeld H (1984) Отложения IgG и C3 в спинном мозге и моторной коре головного мозга пациентов с БАС. J Neuroimmunol 6 (1): 51–57
PubMed Статья CAS Google ученый
18.
Данкли Т., Хуэнтельман М.Дж., Крейг Д.В., Пирсон Дж. В., Селингер С., Джошипура К., Гальперин Р.Ф., Стэмпер С., Дженсен К.Р., Летиция Д., Эстерли С.Е., Пестронк А., Левин Т., Берторини Т., Грейвс М.С. , Mozaffar T, Джексон CE, Bosch P, McVey A, Dick A, Barohn R, Lomen-Hoerth C, Rosenfeld J, O’Connor DT, Zhang K, Crook R, Ryberg H, Hutton M, Katz J, Simpson EP, Mitsumoto H, Bowser R, Miller RG, Appel SH, Stephan DA (2007) Анализ всего генома спорадического бокового амиотрофического склероза.N Engl J Med 357 (8): 775–788. DOI: 10.1056 / NEJMoa070174
PubMed Статья CAS Google ученый
19.
Ebert BL, Galili N, Tamayo P, Bosco J, Mak R, Pretz J, Tanguturi S, Ladd-Acosta C, Stone R, Golub TR, Raza A (2008) Сигнатура дифференциации эритроидов предсказывает реакцию на леналидомид при миелодиспластическом синдроме. PLoS Med 5 (2): e35. DOI: 10.1371 / journal.pmed.0050035
PubMed Статья Google ученый
20.
Энгельгардт JI, Аппель SH (1990) IgG-реактивность в спинном мозге и моторной коре при боковом амиотрофическом склерозе. Arch Neurol 47 (11): 1210–1216
PubMed Статья CAS Google ученый
21.
Энгельгардт JI, Tajti J, Appel SH (1993) Лимфоцитарные инфильтраты в спинном мозге при боковом амиотрофическом склерозе. Arch Neurol 50 (1): 30–36
PubMed Статья CAS Google ученый
22.
Феррайуоло Л., Кирби Дж., Грирсон А.Дж., Сендтнер М., Шоу П.Дж. (2011) Молекулярные пути повреждения двигательных нейронов при боковом амиотрофическом склерозе. Nat Rev Neurol 7 (11): 616–630. DOI: 10.1038 / nrneurol.2011.152
PubMed Статья CAS Google ученый
23.
Gaasch JA, Lockman PR, Geldenhuys WJ, Allen DD, Van der Schyf CJ (2007) Токсичность мозговым железом: дифференциальные ответы астроцитов, нейронов и эндотелиальных клеток.Neurochem Res 32 (7): 1196–1208. DOI: 10.1007 / s11064-007-9290-4
PubMed Статья CAS Google ученый
24.
Гарбузова-Дэвис С., Халлер Э., Сапорта С., Коломей И., Никосия С.В., Санберг П.Р. (2007) Ультраструктура гематоэнцефалического барьера и гематоэнцефалического барьера у мышей SOD1, моделирующих БАС. Brain Res 1157: 126–137. DOI: 10.1016 / j.brainres.2007.04.044
PubMed Статья CAS Google ученый
25.
Гарбузова-Дэвис С., Родригес М.С., Эрнандес-Онтиверос Д.Г., Луи М.К., Виллинг А.Е., Борлонган К.В., Санберг П.Р. (2011) Боковой амиотрофический склероз: сосудисто-нервное заболевание. Brain Res 1398: 113–125. DOI: 10.1016 / j.brainres.2011.04.049
PubMed Статья CAS Google ученый
26.
Гарбузова-Дэвис С., Сапорта С., Халлер Е., Коломей И., Беннетт С.П., Поттер Н., Санберг П.Р. (2007) Доказательства нарушения гематоэнцефалического барьера у мышей SOD1 с ранними и поздними симптомами, моделирующих БАС.PLoS ONE 2 (11): e1205. DOI: 10.1371 / journal.pone.0001205
PubMed Статья Google ученый
27.
Гринберг С.М., Нандигам Р.Н., Дельгадо П., Бетенски Р.А., Розанд Дж., Вишванатан А., Фрош М.П., Смит Э.Е. (2009) Микрокровоизлияние в сравнении с макрокровообразованием: доказательства наличия отдельных сущностей. Ход 40 (7): 2382–2386. DOI: 10.1161 / STROKEAHA.109.548974
PubMed Статья Google ученый
28.
Greenberg SM, Vernooij MW, Cordonnier C, Viswanathan A, Al-Shahi Salman R, Warach S, Launer LJ, Van Buchem MA, Breteler MM (2009) Церебральные микрокровоизлияния: руководство по обнаружению и интерпретации. Lancet Neurol 8 (2): 165–174. DOI: 10.1016 / S1474-4422 (09) 70013-4
PubMed Статья Google ученый
29.
Guiloff RJ, McGregor B, Thompson E, Blackwood W., Paul E (1980) Заболевание двигательных нейронов с повышенным содержанием белка в спинномозговой жидкости.J Neurol Neurosurg Psychiatry 43 (5): 390–396
PubMed Статья CAS Google ученый
30.
Haidet-Phillips AM, Hester ME, Miranda CJ, Meyer K, Braun L, Frakes A, Song S, Likhite S, Murtha MJ, Foust KD, Rao M, Eagle A, Kammesheidt A, Christensen A, Mendell JR, Burghes AH, Kaspar BK (2011) Астроциты от семейных и спорадических пациентов с БАС токсичны для мотонейронов. Nat Biotechnol 29 (9): 824–828. DOI: 10.1038 / NBT.1957
PubMed Статья CAS Google ученый
31.
Henkel JS, Beers DR, Wen S, Bowser R, Appel SH (2009) Снижение экспрессии мРНК белков плотного соединения в поясничном отделе спинного мозга пациентов с БАС. Неврология 72 (18): 1614–1616. DOI: 10.1212 / WNL.0b013e3181a41228
PubMed Статья CAS Google ученый
32.
Henkel JS, Engelhardt JI, Siklos L, Simpson EP, Kim SH, Pan T, Goodman JC, Siddique T, Beers DR, Appel SH (2004) Наличие дендритных клеток, MCP-1 и активированной микроглии / макрофаги в ткани спинного мозга при боковом амиотрофическом склерозе.Энн Нейрол 55 (2): 221–235. DOI: 10.1002 / ana.10805
PubMed Статья CAS Google ученый
33.
Hua Y, Keep RF, Hoff JT, Xi G (2007) Повреждение мозга после внутримозгового кровоизлияния: роль тромбина и железа. Stroke 38 (2 Suppl): 759–762. DOI: 10.1161 / 01.STR.0000247868.97078.10
PubMed Статья CAS Google ученый
34.
Илиева Х., Полимениду М., Кливленд Д.В. (2009) Неклеточная автономная токсичность при нейродегенеративных расстройствах: БАС и другие. J Cell Biol 187 (6): 761–772. DOI: 10.1083 / jcb.200
4
PubMed Статья CAS Google ученый
35.
Имон Й., Ямагути С., Ямамура Ю., Цудзи С., Каджима Т., Ито К., Накамура С. (1995) Области низкой интенсивности, наблюдаемые на Т2-взвешенной магнитно-резонансной томографии коры головного мозга при различных неврологических заболеваниях.J Neurol Sci 134 (Дополнение): 27–32
PubMed Статья Google ученый
36.
Kasarskis EJ, Tandon L, Lovell MA, Ehmann WD (1995) Алюминий, кальций и железо в спинном мозге пациентов со спорадическим боковым амиотрофическим склерозом с использованием лазерной микрозондовой масс-спектроскопии: предварительное исследование. J Neurol Sci 130 (2): 203–208
PubMed Статья CAS Google ученый
37.
Кирнан MC, Вучич S, Cheah BC, Turner MR, Eisen A, Hardiman O, Burrell JR, Zoing MC (2011) Боковой амиотрофический склероз. Ланцет 377 (9769): 942–955. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (10) 61156-7
PubMed Статья CAS Google ученый
38.
Kwan JY, Jeong SY, Van Gelderen P, Deng HX, Quezado MM, Danielian LE, Butman JA, Chen L, Bayat E, Russell J, Siddique T, Duyn JH, Rouault TA, Floeter MK (2012 Накопление железа в глубоких корковых слоях объясняет аномалии сигнала МРТ при БАС: коррелируя МРТ 7 тесла и патологию.PLoS ONE 7 (4): e35241. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035241
PubMed Статья CAS Google ученый
39.
Lauer A, Cianchetti FA, Van Cott EM, Schlunk F, Schulz E, Pfeilschifter W, Steinmetz H, Schaffer CB, Lo EH, Foerch C (2011) Антикоагуляция пероральным прямым ингибитором тромбина дабигатраном не увеличивает объем гематомы при экспериментальном внутримозговом кровоизлиянии. Тираж 124 (15): 1654–1662
PubMed Статья CAS Google ученый
40.
Леонарди А., Аббруззезе Г., Арата Л., Кочито Л., Више М. (1984) Цереброспинальная жидкость (ЦСЖ) при боковом амиотрофическом склерозе. J Neurol 231 (2): 75–78
PubMed Статья CAS Google ученый
41.
Lim GP, Backstrom JR, Cullen MJ, Miller CA, Atkinson RD, Tokes ZA (1996) Матричные металлопротеиназы в неокортексе и спинном мозге пациентов с боковым амиотрофическим склерозом. J Neurochem 67 (1): 251–259
PubMed Статья CAS Google ученый
42.
Lindahl P, Johansson BR, Leveen P, Betsholtz C (1997) Потеря перицитов и образование микроаневризмы у мышей с дефицитом PDGF-B. Наука 277 (5323): 242–245
PubMed Статья CAS Google ученый
43.
Logroscino G, Traynor BJ, Hardiman O, Chio A, Mitchell D, Swingler RJ, Millul A, Benn E, Beghi E (2010) Заболеваемость боковым амиотрофическим склерозом в Европе. J Neurol Neurosurg Psychiatry 81 (4): 385–390. DOI: 10.1136 / jnnp.2009.183525
PubMed Статья Google ученый
44.
Манн Г.Е., Злокович Б.В., Юдилевич Д.Л. (1985) Доказательства системы транспорта лактата в сарколеммальной мембране перфузируемого сердца кролика: кинетика однонаправленного притока, специфичность носителя и эффекты глюкагона. Biochim Biophys Acta 819 (2): 241–248
PubMed Статья CAS Google ученый
45.
Meucci G, Rossi G, Bettini R, Montanaro D, Gironelli L, Voci L, Bianchi F (1993) Лазерная нефелометрическая оценка альбумина, IgG и альфа-2-макроглобулина: приложения для изучения изменений гематоэнцефалического барьера. J Neurol Sci 118 (1): 73–78
PubMed Статья CAS Google ученый
46.
Miyazaki K, Ohta Y, Nagai M, Morimoto N, Kurata T, Takehisa Y, Ikeda Y, Matsuura T., Abe K (2011) Нарушение нервно-сосудистой системы до дегенерации двигательных нейронов при боковом амиотрофическом склерозе.Журнал Neurosci Res 89 (5): 718–728. DOI: 10.1002 / jnr.22594
PubMed Статья CAS Google ученый
47.
Moutouh-de Parseval LA, Verhelle D, Glezer E, Jensen-Pergakes K, Ferguson GD, Corral LG, Morris CL, Muller G, Brady H, Chan K (2008) Помалидомид и леналидомид регулируют эритропоэз и фетропоэз продукция гемоглобина в CD34 + клетках человека. Дж. Клин Инвест 118 (1): 248–258. DOI: 10.1172 / JCI32322
PubMed Статья CAS Google ученый
48.
Nicaise C, Mitrecic D, Demetter P, De Decker R, Authelet M, Boom A, Pochet R (2009) Нарушение барьеров кровь-мозг и кровь-спинной мозг у мутантных SOD1-связанных ALS крыс. Brain Res 1301: 152–162. DOI: 10.1016 / j.brainres.2009.09.018
PubMed Статья CAS Google ученый
49.
Niebroj-Dobosz I, Janik P, Sokolowska B, Kwiecinski H (2010) Матричные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы в сыворотке и спинномозговой жидкости пациентов с боковым амиотрофическим склерозом.Eur J Neurol 17 (2): 226–231. DOI: 10.1111 / j.1468-1331.2009.02775.x
PubMed Статья CAS Google ученый
50.
Oba H, Araki T, Ohtomo K, Monzawa S, Uchiyama G, Koizumi K, Nogata Y, Kachi K, Shiozawa Z, Kobayashi M (1993) Боковой амиотрофический склероз: сокращение T2 в моторной коре при МРТ . Радиология 189 (3): 843–846
PubMed CAS Google ученый
51.
Павлик А., Мареш В. (1992) Спонтанное кровоизлияние в коре головного мозга незрелых крыс. Neurosci Lett 141 (2): 177–180
PubMed Статья CAS Google ученый
52.
Philips T, Robberecht W (2011) Нейровоспаление при боковом амиотрофическом склерозе: роль активации глии в заболевании двигательных нейронов. Lancet Neurol 10 (3): 253–263. DOI: 10.1016 / S1474-4422 (11) 70015-1
PubMed Статья CAS Google ученый
53.
Pirttila T, Vanhatalo S, Turpeinen U, Riikonen R (2004) Инсулиноподобный фактор роста-1 в спинномозговой жидкости, белок-связывающий инсулин фактор роста-2 или оксид азота не увеличиваются при MS или ALS. Acta Neurol Scand 109 (5): 337–341. DOI: 10.1111 / j.1600-0404.2004.00223.x
PubMed Статья CAS Google ученый
54.
Regan RF, Guo Y (1998) Токсическое действие гемоглобина на нейроны спинного мозга в культуре.J Neurotrauma 15 (8): 645–653
PubMed Статья CAS Google ученый
55.
Рентон А.Е., Маджуни Е., Уэйт А., Саймон-Санчес Дж., Роллинсон С., Гиббс Дж. Р., Шимик Дж. К., Лааксовирта Х., ван Свитен Дж. К., Мюллюкангас Л., Калимо Х, Паэтау А., Абрамзон Ю., Ремес А. М. , Kaganovich A, Scholz SW, Duckworth J, Ding J, Harmer DW, Hernandez DG, Johnson JO, Mok K, Ryten M, Trabzuni D, Guerreiro RJ, Orrell RW, Neal J, Murray A, Pearson J, Jansen IE, Sondervan D, Силаар Х., Блейк Д., Янг К., Холливелл Н., Каллистер Дж. Б., Тулсон Дж., Ричардсон А., Герхард А., Сноуден Дж., Манн Д., Нири Д., Наллс М. А., Пералинна Т., Янссон Л., Исовиита В. М., Кайворин А. Л., Хольтта-Вуори М., Иконен Э., Сулкава Р., Бенатар М., Ву Дж., Чио А., Рестагно Г., Боргеро Г., Сабателли М., Хекерман Д., Рогаева Е., Зинман Л., Ротштейн Д. Д., Сендтнер М., Дреппер С., Эйхлер Э. Alkan C, Abdullaev Z, Pack SD, Dutra A, Pak E, Hardy J, Singleton A, Williams NM, Heutink P, Pickering-Brown S, Morris HR, Tienari PJ, Traynor BJ (2011) Расширение гексануклеотидного повтора в C9ORF72 — это причина хромосомного 9p21-сцепленного ALS-F TD.Нейрон 72 (2): 257–268. DOI: 10.1016 / j.neuron.2011.09.010
PubMed Статья CAS Google ученый
56.
Rosidi NL, Zhou J, Pattanaik S, Wang P, Jin W, Brophy M, Olbricht WL, Nishimura N, Schaffer CB (2011) Кортикальные микрокровоизлияния вызывают локальное воспаление, но не вызывают обширную дегенерацию дендритов. PLoS ONE 6 (10): e26612. DOI: 10.1371 / journal.pone.0026612
PubMed Статья CAS Google ученый
57.
Schliep G, Felgenhauer K (1978) Градиенты сывороточного белка CSF, барьер между кровью и GSF и местный иммунный ответ. J Neurol 218 (2): 77–96
PubMed Статья CAS Google ученый
58.
Troost D, Van den Oord JJ, Vianney de Jong JM (1990) Иммуногистохимическая характеристика воспалительного инфильтрата при боковом амиотрофическом склерозе. Neuropathol Appl Neurobiol 16 (5): 401–410
PubMed Статья CAS Google ученый
59.
Verstraete E, Biessels GJ, van Den Heuvel MP, Visser F, Luijten PR, van Den Berg LH (2010) Нет доказательств микрокровоизлияний у пациентов с БАС при МРТ 7 Тесла. Боковой склер амиотрофа 11 (6): 555–557. DOI: 10.3109 / 17482968.2010.513053
PubMed Статья Google ученый
60.
Werring DJ (2011) Церебральные микрокровотечения. Издательство Кембриджского университета, Лондон
Книга Google ученый
61.
Winkler EA, Bell RD, Zlokovic BV (2010) Перицит-специфическая экспрессия рецептора бета PDGF в моделях мышей с нормальной и недостаточной передачей сигналов рецептора бета PDGF. Mol Neurodegener 5:32. DOI: 10.1186 / 1750-1326-5-32
PubMed Статья Google ученый
62.
Винклер Е.А., Белл Р.Д., Злокович Б.В. (2011) Перициты центральной нервной системы в здоровье и болезнях. Nat Neurosci 14 (11): 1398–1405. DOI: 10,1038 / нн.2946
PubMed Статья CAS Google ученый
63.
Winkler EA, Sengillo JD, Bell RD, Wang J, Zlokovic BV (2012) Уменьшение перицитов барьера между кровью и спинным мозгом способствует увеличению проницаемости капилляров. J Cereb Blood Flow Metab. DOI: 10.1038 / jcbfm.2012.113
64.
Xi G, Keep RF, Hoff JT (2006) Механизмы повреждения головного мозга после внутримозгового кровоизлияния. Lancet Neurol 5 (1): 53–63.DOI: 10.1016 / S1474-4422 (05) 70283-0
PubMed Статья Google ученый
65.
Yamanaka K, Chun SJ, Boillee S, Fujimori-Tonou N, Yamashita H, Gutmann DH, Takahashi R, Misawa H, Cleveland DW (2008) Астроциты как детерминанты прогрессирования болезни при наследственном боковом амиотрофическом склерозе. Nat Neurosci 11 (3): 251–253. DOI: 10.1038 / nn2047
PubMed Статья CAS Google ученый
66.
Zhong Z, Deane R, Ali Z, Parisi M, Shapovalov Y, O’Banion MK, Stojanovic K, Sagare A, Boillee S, Cleveland DW, Zlokovic BV (2008) мутанты SOD1, вызывающие БАС, генерируют сосудистые изменения раньше двигательного нейрона перерождение. Nat Neurosci 11 (4): 420–422. DOI: 10.1038 / nn2073
PubMed Статья CAS Google ученый
67.
Чжун З., Илиева Х., Халлаган Л., Белл Р., Сингх И., Пакетт Н., Тиягараджан М., Дин Р., Фернандес Дж. А., Лейн С., Злокович А.Б., Лю Т., Гриффин Дж. Х., Чоу Н., Кастеллино Ф. Дж. , Stojanovic K, Cleveland DW, Zlokovic BV (2009) Терапия активированным протеином C замедляет ALS-подобное заболевание у мышей путем транскрипционного ингибирования SOD1 в двигательных нейронах и клетках микроглии.J Clin Invest 119 (11): 3437–3449. DOI: 10.1172 / JCI38476
PubMed CAS Google ученый
68.
Zhong Z, Winkler EA, Zlokovic BV (2011) Микрокровоизлияния: неопределяемые, но клинически значимые, вопрос остается. Боковой склер амиотрофа 12 (3): 231–232 (ответ автора 233–234). DOI: 10.3109 / 17482968.2011.565776
69.
Zinman L, Cudkowicz M (2011) Новые цели и методы лечения бокового амиотрофического склероза.Lancet Neurol 10 (5): 481–490. DOI: 10.1016 / S1474-4422 (11) 70024-2
PubMed Статья CAS Google ученый
70.
Злокович Б.В. (2011) Нейроваскулярные пути к нейродегенерации при болезни Альцгеймера и других расстройствах. Nat Rev Neurosci 12 (12): 723–738. DOI: 10.1038 / nrn3114
PubMed CAS Google ученый
71.
Злокович Б.В., Апуццо М.Л. (1997) Клеточная и молекулярная нейрохирургия: пути от концепции к реальности — часть I: целевые расстройства и концептуальные подходы к генной терапии центральной нервной системы.Нейрохирургия 40 (4): 789–803 (обсуждение 803–784)
Google ученый
Ранняя радиационно-индуцированная потеря эндотелиальных клеток и разрушение барьеров кровь-спинной мозг в спинном мозге крыс
Li, YQ, Chen, P., Jain, V., Reilly, RM and Wong, CS Ранний радиационно-индуцированный эндотелиальный Потеря клеток и нарушение кровообращения спинного мозга в спинном мозге крыс. Radiat. Res. , 161, 143–152 (2004).
С использованием модели спинного мозга крысы, это исследование было разработано, чтобы охарактеризовать вызванную радиацией потерю эндотелиальных клеток сосудов и ее связь с ранним нарушением гематоэнцефалического барьера в центральной нервной системе.Взрослым крысам вводили однократную дозу 0, 2, 8, 19,5, 22, 30 или 50 Гр в шейный отдел спинного мозга. В разное время до 2 недель после облучения спинной мозг подвергали гистологическому и иммуногистохимическому анализу. Радиационно-индуцированный апоптоз оценивали по морфологии и TdT-опосредованному мечению ник-концов dUTP в сочетании с иммуногистохимическими маркерами эндотелиальных и глиальных клеток. Анализ изображений был выполнен для определения плотности эндотелиальных клеток и микрососудов с использованием иммуногистохимии с использованием эндотелиальных маркеров, а именно антигена эндотелиального барьера, изоформы 1 переносчика глюкозы, ламинина и окклюды 1.Проницаемость гемато-спинномозгового барьера оценивали с помощью иммуногистохимии для альбумина и ^99m Tc-диэтилентриаминпентауксусной кислоты в качестве индикатора сосудов. Пролиферацию эндотелиальных клеток оценивали с использованием метки in vivo BrdU. В течение первых 24 ч после облучения в спинном мозге крысы наблюдались апоптотические эндотелиальные клетки. Снижение плотности эндотелиальных клеток через 24 часа после облучения было связано с усилением иммуноокрашивания альбумина вокруг микрососудов.Уменьшение количества эндотелиальных клеток сохранялось в течение 7 дней, а восстановление плотности эндотелия стало очевидным к 14-му дню. Аналогичная картина разрушения гематоэнцефалического барьера и восстановления проницаемости наблюдалась в течение 2 недель, а увеличение BrdU- меченые эндотелиальные клетки наблюдались на 3 день. Эти результаты согласуются с ассоциацией между гибелью эндотелиальных клеток и острым нарушением гемато-спинномозгового барьера в спинном мозге крысы после облучения.
Нарушение межклеточной молекулы-1 и барьера спинного мозга и крови при лучевом поражении центральной нервной системы | Журнал невропатологии и экспериментальной неврологии
Аннотация
Повреждение центральной нервной системы (ЦНС) представляет собой серьезную ограничивающую дозу токсичность, которая ограничивает эффективность лучевой терапии.Характерными особенностями являются нарушение гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) и некроз белого вещества. Повышенная экспрессия молекулы межклеточной адгезии-1 (ICAM-1) сопровождает и, как полагают, играет важную роль в нарушении ГЭБ при других повреждениях ЦНС. Наша цель состояла в том, чтобы оценить экспрессию ICAM-1 и ее связь с областями нарушения гемато-спинномозгового барьера (BSCB) в облученном спинном мозге крысы. Белок ICAM-1 был обнаружен иммуногистохимическим методом и количественно определен анализом цифровых изображений. Идентифицированы клетки, экспрессирующие ICAM-1.Нарушение BSCB оценивали с помощью иммуногистохимического определения сывороточного альбумина. Экспрессия ICAM-1 локализовалась преимущественно в эндотелии сосудов и увеличивалась в белом веществе, но не в сером веществе, через 24 часа и 17-20 недель после 22 Гр. Дозозависимость наблюдалась от 16 до 20 Гр. Экспрессия ICAM-1 колокализована с участками разрушения BSCB. Экспрессия ICAM-1 также наблюдалась в глии, большинство из которых были астроцитами. Параллельная доза-реакция, временной ход и пространственное распределение экспрессии ICAM-1 и утечки альбумина предполагают роль ICAM-1 в позднем разрушении BSCB после облучения.
Введение
Повреждение центральной нервной системы (ЦНС) после лучевой терапии опухолей внутри или рядом с ней является ключевым препятствием для доставки лечебных доз облучения. Считается, что отек мозга является причиной острых эффектов, наблюдаемых после облучения головного мозга. Некроз белого вещества, происходящий от месяцев до лет после лучевой терапии, может привести к необратимой потере функции. Нарушение гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) наблюдается как при раннем, так и при позднем лучевом поражении.Специализированный эндотелий ЦНС значительно ограничивает прохождение большинства молекул плазмы. Эндотелиальные клетки ЦНС демонстрируют плотные контакты с чрезвычайно высоким электрическим сопротивлением и недостаточным везикулярным транспортом. Находящиеся в непосредственной близости астроциты и перициты модулируют проницаемость эндотелиальных клеток (1, 2). Эти клеточные составляющие и атрибуты составляют ГЭБ.
Дисфункция сосудов может иметь первостепенное значение при лучевом поражении ЦНС, а некроз белого вещества является вторичным эффектом разрушения ГЭБ (3–5).Тот факт, что повреждение воспроизводится с использованием борной нейтронно-захватной терапии для ограничения дозы облучения сосудистой сети, согласуется с ключевой ролью целостности сосудов при лучевом поражении ЦНС (6). В то время как морфологические изменения сосудистой сети ЦНС изменчивы, нарушение ГЭБ является постоянным обнаружением после облучения высокими дозами (5, 7).
Молекулярные механизмы разрушения ГЭБ при лучевом поражении ЦНС не изучены. Возможные механизмы включают гибель эндотелиальных клеток или снижение экспрессии или дисфункцию белков плотных контактов.Уменьшение плотности эндотелиальных клеток было зарегистрировано в течение первых 24 часов после облучения (8, 9). Было обнаружено, что апоптоз эндотелия достигает пика через 8-10 часов после облучения и зависит от передачи сигналов, опосредованной кислой сфингомиелиназой (10). В ЦНС мышей с дефицитом кислой сфингомиелиназы не было обнаружено доказательств нарушения барьера через 24 часа после облучения, что убедительно свидетельствует о том, что апоптоз эндотелиальных клеток инициирует острое нарушение барьера (9).
Повышенная проницаемость сосудов может происходить за счет механизмов, которые изменяют экспрессию или распределение белков, важных для целостности ГЭБ.Два класса белков, которые являются потенциальными мишенями, представляют собой молекулы адгезии, экспрессируемые на эндотелии, такие как молекула межклеточной адгезии-1 (ICAM-1) и белки BBB, которые включают эндотелиальные плотные контакты. Повышенная экспрессия молекул адгезии, включая ICAM-1, наблюдалась в облученных микрососудов других органов, включая почки и кишечник (11). Экспрессия ICAM-1 повышается при различных поражениях ЦНС, при которых происходит нарушение ГЭБ, включая воспалительные, цитотоксические, ишемические и травматические повреждения, что указывает на роль ICAM-1 в потере целостности ГЭБ (12-15).Кроме того, экспрессия ICAM-1, по-видимому, обратно пропорциональна наличию интактного барьера. Экспрессия повышается в некомпетентном ГЭБ плода, снижается по мере созревания ГЭБ крысы в процессе развития (16) и увеличивается в связи с нарушением ГЭБ, связанным с опухолью (17).
Основные белки в плотных контактах эндотелия ЦНС также обнаружены в других органах. Однако в ЦНС плотные соединения непрерывны и не имеют фенестрации. Окклюдин — это трансмембранный белок, который, как полагают, способствует межклеточной адгезии.Zonula-Occludens-1 (ZO-1) связывается с цитоплазматическим хвостом окклюдина и, как полагают, играет роль в организации белков в плотном соединении. Переносчик глюкозы-1 (глют-1) является ключевым транспортным белком, который отвечает за удовлетворение энергетических потребностей нейронов и других клеток ЦНС и используется в качестве маркера эндотелия со свойствами ГЭБ (18). Другой маркер BBB, EBA, был идентифицирован в исследованиях с использованием гомогената головного мозга крысы в качестве иммуногена, дающего антитело, специфически реагирующее с BBB-компетентным эндотелием (19).Потеря иммунореактивности EBA сопровождает потерю целостности BBB после различных повреждений (20). Функция EBA в настоящее время неизвестна.
Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) является важным медиатором изменений проницаемости в ЦНС, как и в других органах (21–23). Экспрессия VEGF сильно индуцируется гипоксией (24) и активируется после облучения в ЦНС (25, 26). Области повышенной экспрессии после облучения соответствуют во времени и пространстве участкам, показывающим разрушение BSCB у крыс (27).Хотя многие эффекты VEGF на культивируемые эндотелиальные клетки были приписаны механизмам, требующим передачи сигналов рецептора VEGF (28), есть доказательства того, что VEGF-опосредованные изменения проницаемости не требуют связывания рецептора (29). Таким образом, хотя повышенная экспрессия VEGF связана с радиационно-индуцированным разрушением ГЭБ, нижестоящие эффекторы в VEGF-опосредованных изменениях проницаемости неясны. Индуцированная радиацией активация VEGF может изменять проницаемость сосудов за счет воздействия на адгезию или белки плотных контактов.VEGF может влиять на экспрессию как ICAM-1, так и белков плотных контактов окклюдина и ZO-1. VEGF активирует ICAM-1 в ЦНС, в эндотелиальных клетках головного мозга в культуре и в эндотелии сетчатки (30–32). В сетчатке индуцированная VEGF экспрессия ICAM-1 связана с повышенной проницаемостью (33). VEGF влияет на проницаемость монослоя эндотелиальных клеток микрососудов головного мозга, изменяя экспрессию, фосфорилирование или распределение белков плотных контактов ZO-1 и окклюдина (34, 35). Данные о влиянии ионизирующего излучения на белки, важные для целостности ГЭБ, отсутствуют (36).Понимание этих реакций может предложить чувствительные к радиации мишени для нейрозащиты.
Наша цель состояла в том, чтобы оценить экспрессию ICAM-1 в облученном спинном мозге крысы, чтобы оценить его роль в разрушении BSCB. Эндотелиальная и неэндотелиальная экспрессия ICAM-1 была исследована и количественно оценена, а также изучены пространственные и временные отношения экспрессии ICAM-1 и нарушения BSCB.
Материалы и методы
Животные и облучение
Самки крысы Fisher 344 (Charles River Laboratories, Уилмингтон, Массачусетс) содержались за 1-2 недели до экспериментов.Возраст животных составлял от 9 до 10 недель, и во время облучения они весили от 150 до 175 г. Они были размещены в помещении для животных Института рака Онтарио в условиях, соответствующих требованиям Канадского совета по уходу за животными. В этой модели радиационной миелопатии паралич передних конечностей, связанный с некрозом белого вещества, происходит примерно через 20 недель после однократных доз 20 Гр или выше в шейный отдел спинного мозга (37). Доза ED100 составляет 22 Гр. Нарушение BSCB наблюдалось уже через 14 недель после облучения и стало обширным к 20 неделям (5).Крысы получали дифференцированные дозы однократной фракции от 0 до 22 Гр через передние и задние параллельные рентгеновские лучи 100 кВ на поле шейного отдела позвоночника длиной 1,8 см, охватывающее C2-T2. Животных иммобилизовали с помощью приспособления для пенополистирола и анестезии галотаном. Положение поля было подтверждено рентгенограммами до начала экспериментов.
Гистопатология и иммуногистохимия
Животных анестезировали внутрибрюшинной инъекцией смеси, содержащей Атравет (Ayerst Laboratories, Гуэлф, Онтарио, Канада) 0.05 мл / 100 г веса тела и кетамина (Vetrepharm Canada, Лондон, Онтарио, Канада) 0,1 мл / 100 г веса тела. За транскардиальной перфузией 0,9% физиологического раствора в течение 1 мин следовала перфузия 10% нейтральным забуференным формалином (парафиновые срезы) или 4% параформальдегидом в фосфатно-солевом буфере (PBS) для замороженных срезов в течение 8 минут. Дальнейшую фиксацию сегментов спинного мозга проводили в формалине в течение 36 ч или в 4% параформальдегиде в PBS в течение 24 ч при 4 ° C. Сегменты спинного мозга погружали в парафин или замораживали над жидким азотом в лотках, содержащих замороженную среду для срезов (Stephens Scientific, Riverdale, NJ).Слайды были приготовлены путем разрезания тканей из средней плоскости облучаемого сегмента толщиной 3 мкм (парафиновые срезы) или толщиной от 5 до 10 мкм (замороженные срезы). Срезы, залитые парафином, депарафинизировали в ксилоле, регидратировали в растворах градуированных спиртов и обрабатывали 3% H ₂ O ₂ в течение 10 минут для подавления активности эндогенной пероксидазы. После процедуры извлечения антигена (особенности каждого маркера описаны ниже) срезы обрабатывали реагентом, блокирующим эндогенный биотин (Vector Laboratories, Burlingame, CA) и блокатором белка (Signet Laboratories, Dedham, MA) в течение 10 минут.Срезы контрастировали гематоксилином и эозином (H&E) после инкубации первичных и вторичных антител, дегидратировали с помощью градуированных спиртов, погружали в толуол и наносили покровные стекла Permount (Fisher Scientific, Nepean, Онтарио, Канада). Нефлуоресцентную иммунореактивность выявляли с помощью цветного реагента диаминобензидин (DAB) или Nova Red (Vector Labs). Замороженные срезы постфиксировали в 2% параформальдегиде в течение 10 минут, промыли PBS и заблокировали реагентом, блокирующим эндогенный биотин (Vector Labs), перед инкубацией антител.
Срезы, использованные для сравнения иммунореактивности или количества положительных клеток или сосудов при разных дозах или в разное время, окрашивали вместе для контроля вариаций в реакции окрашивания. Количественная оценка для каждой серии (временной ход или доза-реакция) проводилась в течение 1-2 дней, чтобы минимизировать отклонения в характеристиках оборудования. Анализ цифровых изображений использовался для количественной оценки участков, иммуноокрашенных ICAM-1 и EBA, с использованием Microcomputer Imaging Device ^TM (MCID, Imaging Research Corporation, St.Кэтрин, Онтарио, Канада). Общее количество окрашенных областей определяли путем установки окон цвета, насыщенности и интенсивности для получения визуальных характеристик иммунореактивных микрососудов и клеток. Чтобы избежать предвзятости оператора, мы использовали единый набор окон параметров при количественной оценке всех слайдов в каждой доза-реакция или временном ряду. Сечения, используемые для установки параметров: ICAM-1: 22 Гр, 20 недель; EBA: 0 Гр, 0 недель. Количественная оценка проводилась на всех срезах спинного мозга, что устраняет предвзятость, присущую выбору областей для анализа.Мы не удаляли участки некроза цифровым способом, потому что большая часть глиальной экспрессии ICAM-1 локализовалась рядом с этими областями.
Белок ICAM-1 был обнаружен в замороженных срезах с использованием антитела против ICAM-1 крысы IA-29 (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота) при разведении 1: 100 в течение 1 ч без извлечения антигена с последующей инкубацией с биотинилированным антигеном. — мышиный IgG, предварительно абсорбированный крысиной сывороткой, в течение 30 мин. Колориметрическое обнаружение проводили с использованием субстрата Streptavidin-HRP и Nova Red (Vector Labs).Для цифровой количественной оценки экспрессии окрашенных ICAM-1 областей использовали минимум 3 среза спинного мозга на животное от 3 животных для каждой дозы и временной точки. Ricinus communis лектин агглютинин-1 (RCA-1) был использован для идентификации микроглии. Комбинированное обнаружение ICAM-1 и RCA-1 выполняли с использованием первичных антител против ICAM-1 в разведении 1: 100, затем следовали антитела против Cy3 мыши (красная флуоресценция) при 1: 100 в течение 30 мин и связанные с биотином RCA- 1 (Vector Labs) в соотношении 1: 1000 в течение 1 часа.Биотинилированный RCA-1 детектировали с использованием флуоресценции стрептавидин-флуоресцеинизотиоцианат-зеленый (FITC) при 1: 100 в течение 1 часа. Окрашивание 4,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) использовали для идентификации ядер клеток. Комбинированное обнаружение ICAM-1 и глиального фибриллярно-кислого белка (GFAP) было выполнено так же, как для ICAM-1 и RCA-1, но с FITC-меченным ICAM-1, и обнаружение GFAP с использованием поликлональных антител кролика (Dako Laboratories, Carpenteria, CA) в соотношении 1: 100 и Cy3-конъюгированные козьи антикроличьи IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Пенсильвания) в соотношении 1: 100.
Целостность
BSCB оценивали путем обнаружения утечки альбумина и исследования экспрессии белков BBB EBA, Glut-1, ZO-1 и окклюдина. Иммуногистохимия использовалась для определения областей утечки альбумина и разрушения BSCB, как описано ранее (26). Была проведена предварительная обработка замороженных срезов в 0,4% пепсине, pH 2, в течение 5 минут с последующей инкубацией с поликлональными первичными антителами овцы против альбумина крысы (Biogenesis, Kingston, NH) при 1: 6400 в течение 1 ч, промывки в PBS, и инкубация с биотином против IgG овцы (Vector Labs) и стрептавидином-HRP (Signet Laboratories, Дедхэм, Массачусетс) в течение 30 минут каждый.Пространственная взаимосвязь между экспрессией ICAM-1 и областями разрушения BSCB была изучена путем обнаружения ICAM-1 и альбумина в соседних срезах размером 5 мкм.
EBA был обнаружен в фиксированных формалином срезах без предварительной обработки для извлечения антигена. После инкубации с мышиным анти-крысиным EBA (Sternberger Monoclonals, Lutherville, MD) при 1/1000 в течение 1 ч следовала 30-минутная инкубация с биотинилированным козьим антимышиным IgM (Vector Labs) при 1: 200 и стрептавидином-HRP. Анализ цифровых изображений использовался для количественной оценки области, иммуноокрашенной EBA.EBA был выбран для количественного исследования, потому что он показал сильную, поддающуюся количественной оценке иммунореактивность. Усредняли площади от 3 животных и от 4 до 6 срезов на животное для каждой дозы и момента времени. Окрашивание Glut-1 проводили на фиксированных формалином срезах с использованием микроволнового извлечения антигена (20 мин при высоких настройках, в 10 мМ цитратном буфере, pH 6,0). Кроличьи поликлональные первичные антитела против Glut-1 (Chemicon International, Temecula, CA) использовали при разведении 1:40 000 в течение 1 часа с последующей инкубацией с биотинилированным козьим антителом против кроличьего IgG при разведении 1: 200 в течение 30 минут и стрептавидином. HRP.Окклюдин и ZO-1 были обнаружены в фиксированных формалином срезах с помощью микроволнового извлечения антигена, инкубации первичных антител при 1: 100 (SC8144 и SC8145 соответственно, Santa Cruz Biotechnology, Санта-Крус, Калифорния), за которыми следовали вторичные антитела против козла и стрептавидин- HRP.
VEGF иммуногистохимия выполнялась на фиксированных формалином срезах с использованием кроличьих поликлональных антител IgG (SC-507, Santa Cruz Biotechnology). Было выполнено извлечение антигена в микроволновой печи с последующим блокированием 5% нормальной козьей сывороткой и инкубацией с первичным антителом в разведении 1: 200.Срезы инкубировали с биотинилированным вторичным антителом, стрептавидином-HRP и диаминобензидином (DAB). Области гипоксии были идентифицированы путем обнаружения нитроимидазол-2- (2-нитро-1H-имидазол-1-ил) -N- (2,2,3,3,3, -пентафторпропилацетамида) (EF5). Внутривенно вводили 1,0 мл 10 мМ раствора EF5 в 0,9% физиологическом растворе на 100 г веса животного. EF5 и моноклональное антитело против EF5 ELK3–51 были любезно предоставлены доктором Кэмероном Кохом (Университет Пенсильвании, Филадельфия, Пенсильвания). Были приготовлены замороженные срезы, и срезы размером 10 мкм были помещены на предметные стекла.Срезы инкубировали с конъюгированным с биотином антителом ELK3–51. Срезы промывали PBS, инкубировали со стрептавидин-щелочной фосфатазой (Dako) в течение 30 минут, снова промывали, инкубировали с New Fuchsin (Dako) в течение 30 минут и контрастировали с H&E.
Статистика
Тест Стьюдента t использовали для сравнения среднего количества ICAM-1-положительных клеток в обработанной и контрольной группах. Односторонний тест ANOVA использовали для оценки различий в средней площади, иммуноокрашенной EBA, в срезах от облученных животных и контрольных животных, как оценивали с помощью анализа цифровых изображений.
Результаты
Гистопатология
На
окрашенных H и E срезах спинного мозга крысы после однократной фракции 20 Гр были обнаружены прогрессирующие области некроза в белом веществе через 19–20 недель. Некротические области были распределены в белом веществе случайным образом, как описано ранее (27).
Выражение ICAM-1
Иммунореактивность
ICAM-1 была обнаружена в необлученном спинном мозге крысы (рис. 1А). Экспрессия эндотелия была заметной.Кроме того, в паренхиме присутствовали некоторые ICAM-1-положительные клетки с глиальной морфологией. Экспрессия ICAM-1 в сосудах и глиях увеличивалась в спинном мозге крыс через 24 часа после 22 Гр (рис. 1B, C) по сравнению с необлученным контролем. Никакого увеличения не наблюдалось через 1, 4 и 16 недель после 22 Гр (рис. 1D – F). Окрашивание снова увеличилось через 17 недель (рис. 1G), и области концентрированной экспрессии присутствовали в сосудистых структурах, глии и нейропиле вокруг областей развития некроза белого вещества через 18-20 недель (рис.1H – J) после 22 Гр. Используемые микроскопические методы не позволяли различать артериолы и венулы. Экспрессия ICAM-1 заметно увеличивалась с увеличением дозы в срезах, полученных через 20 недель после облучения (рис. 1K – O). Это сопровождалось прогрессирующим увеличением разрушения BSCB, что было обнаружено по иммунореактивности альбумина в срезах ткани (Fig. 1P-T). Несосудистые клетки, положительные по ICAM-1, были идентифицированы методом двойной флуоресцентной иммуногистохимии с использованием маркеров GFAP и RCA-1 для обнаружения астроглии и микроглии соответственно (рис.2A – F). Отдельные клетки, экспрессирующие ICAM-1 (фиг. 2A, D), также экспрессировали GFAP (фиг. 2B) или RCA-1 (фиг. 2E).
Рис. 1.
В необлученном спинном мозге крысы имеется скудное иммуноокрашивание ICAM-1 (A) . Через 22 Гр иммуноокрашивание ICAM-1 усиливается через 24 часа и локализуется преимущественно в эндотелии сосудов, но экспрессия также определяется в глии (низкая и высокая мощность, B и C ; стрелка C, ICAM-положительные глиальные клетки) . Экспрессия ICAM-1 возвращается к норме через 1 неделю (D) после 22 Гр, но снова увеличивается через 17-20 недель (G – J) с иммунореактивностью, наблюдаемой вокруг участков некроза в белом веществе.По сравнению с контролем (K) , не наблюдается явного увеличения экспрессии ICAM-1 после 12 Гр на 20 неделе (L) , но доза-ответ для экспрессии ICAM-1 наблюдается после 16-20 Гр (M –O) . Иммуногистохимический анализ альбумина не показывает окрашивания в необлученном спинном мозге (P) или после 12 Гр (Q) . Повышенное окрашивание альбумина в белом веществе, соответствующее разрушению BSCB, очевидно через 20 недель после 16 Гр (R) , 18 Гр (S) и 20 Гр (T) .Исходные увеличения: A – T, × 200, кроме C, × 650.
Рис. 1.
В необлученном спинном мозге крысы имеется скудное иммуноокрашивание ICAM-1 (A) . Через 22 Гр иммуноокрашивание ICAM-1 усиливается через 24 часа и локализуется преимущественно в эндотелии сосудов, но экспрессия также определяется в глии (низкая и высокая мощность, B и C ; стрелка C, ICAM-положительные глиальные клетки) . Экспрессия ICAM-1 возвращается к норме через 1 неделю (D) после 22 Гр, но снова увеличивается через 17-20 недель (G – J) с иммунореактивностью, наблюдаемой вокруг участков некроза в белом веществе.По сравнению с контролем (K) , не наблюдается явного увеличения экспрессии ICAM-1 после 12 Гр на 20 неделе (L) , но доза-ответ для экспрессии ICAM-1 наблюдается после 16-20 Гр (M –O) . Иммуногистохимический анализ альбумина не показывает окрашивания в необлученном спинном мозге (P) или после 12 Гр (Q) . Повышенное окрашивание альбумина в белом веществе, соответствующее разрушению BSCB, очевидно через 20 недель после 16 Гр (R) , 18 Гр (S) и 20 Гр (T) .Исходные увеличения: A – T, × 200, кроме C, × 650.
Рис. 2.
Глиальные клетки, экспрессирующие ICAM-1, в спинном мозге крысы через 20 недель после 22 Гр. Глиальная клетка, экспрессирующая ICAM-1 (FITC, стрелка в A ), также демонстрирует иммунореактивность в отношении астроглиального маркера GFAP (Cy3, стрелка в B ). Окрашивание DAPI идентифицирует ядра клеток (C, F) . ICAM-1-положительная клетка (Cy3, D ) проявляет иммунореактивность в отношении микроглиального маркера RCA-1 (FITC, E ).Оригинальное увеличение: × 1000.
Рис. 2.
Глиальные клетки, экспрессирующие ICAM-1, в спинном мозге крысы через 20 недель после 22 Гр. Глиальная клетка, экспрессирующая ICAM-1 (FITC, стрелка в A ), также демонстрирует иммунореактивность в отношении астроглиального маркера GFAP (Cy3, стрелка в B ). Окрашивание DAPI идентифицирует ядра клеток (C, F) . ICAM-1-положительная клетка (Cy3, D ) проявляет иммунореактивность в отношении микроглиального маркера RCA-1 (FITC, E ). Оригинальное увеличение: × 1000.
Общая площадь, иммуноокрашенная ICAM-1, была определена количественно с использованием анализа цифровых изображений. Как микрососудистая, так и глиальная экспрессия ICAM-1 вносила вклад в общую площадь окрашивания. ICAM-1-положительные микрососуды составляли основной компонент окрашивания и, таким образом, вносили основной вклад (оцениваемый более чем в 90%) в общую площадь окрашивания. Площадь окрашивания увеличилась в 2,7 раза в белом веществе через 20 недель после 22 Гр по сравнению с контролем (рис. 3А). Не было изменений в ICAM-1-положительной зоне в сером веществе (рис.3Б). В необлученных срезах 52% ICAM-1-положительных клеток были астроглией (фиг. 3C). Общее количество ICAM-1-положительных клеток увеличилось в 2,6 раза после 22 Гр по сравнению с контролем, а количество ICAM-1-положительных астроглии увеличилось в 2,7 раза (фиг. 3C, D). Доля ICAM-1-положительных глиальных клеток, экспрессирующих GFAP, составляла 55% в облученных срезах, что сравнимо с очень похожей долей в 52%, наблюдаемой в необлученных срезах. В необлученном и облученном спинном мозге менее 5% ICAM-1-положительных клеток на срез спинного мозга были положительными по маркеру микроглии RCA-1.
Рис. 3.
В спинном мозге крысы через 20 недель после 22 Гр иммунореактивная площадь ICAM-1 увеличивается в 2,7 раза в белом веществе (A) , но не в сером веществе (B) по сравнению с контролирует. Пятьдесят два процента неэндотелиальных клеток, экспрессирующих ICAM-1, экспрессируют астроглиальный маркер GFAP в необлученном спинном мозге крысы (C) . На срезах облученных животных (22 Гр) через 20 недель 55% ICAM-1-положительных клеток являются GFAP-положительными (D) .Каждая точка данных представляет собой среднее значение от 3 до 4 животных и от 3 до 4 поперечных срезов спинного мозга на каждое животное. Планки погрешностей представляют ± SEM
Рис. 3.
В спинном мозге крысы через 20 недель после 22 Гр иммунореактивная площадь ICAM-1 увеличивается в 2,7 раза в белом веществе (A) , но не в сером веществе (B) по сравнению с контролями. Пятьдесят два процента неэндотелиальных клеток, экспрессирующих ICAM-1, экспрессируют астроглиальный маркер GFAP в необлученном спинном мозге крысы (C) .На срезах облученных животных (22 Гр) через 20 недель 55% ICAM-1-положительных клеток являются GFAP-положительными (D) . Каждая точка данных представляет собой среднее значение от 3 до 4 животных и от 3 до 4 поперечных срезов спинного мозга на каждое животное. Планки погрешностей представляют ± SEM
Экспрессия ICAM-1 и нарушение BSCB
Области концентрированной экспрессии ICAM-1 (фиг. 4A) присутствовали в областях с утечкой альбумина (смежный участок, фиг. 4B). Таким образом, взаимосвязь между экспрессией ICAM-1 и нарушением BSCB, наблюдаемая во времени и данных доза-ответ, также пространственно отражалась в спинном мозге.Чтобы оценить паттерны и ответы экспрессии белка BSCB в спинном мозге крысы, мы изучили экспрессию EBA, Glut-1, окклюдина и ZO-1 в контроле и в срезах с радиационно-индуцированным разрушением BSCB. Все 4 белка были обнаружены как полное или частичное периферическое окрашивание поперечных срезов микрососудов. Окрашивание микрососудов Glut-1 (фиг. 4C) было аналогичным окрашиванию для EBA (фиг. 4D), но было более слабым по интенсивности и окрашенной области. Окклюдин и ZO-1 были обнаружены как тонкие прерывистые окрашивающие нити в стенках сосудов (данные не показаны).
Рис. 4.
Повышенная экспрессия ICAM-1 наблюдается в областях с нарушением BSCB. Области, окрашенные альбумином (A) и ICAM-1 (B) , локализуются в белом веществе через 20 недель после 22 Гр. Антитела, специфичные к Glut-1 (C) и EBA (D) , окрашивают микрососуды в спинном мозге крысы. В соседних срезах спинного мозга крысы через 20 недель после 20 Гр область гипоксии, продемонстрированная иммуногистохимическим обнаружением EF5 (E) , совместно локализуется с экспрессией продуктов чувствительного к гипоксии гена Glut-1 (F) и VEGF . (G) , и где наблюдается иммунореактивность ICAM-1 (H) .Исходные увеличения: A, B, E – H, × 100; C, D, × 400
Рис. 4.
Повышенная экспрессия ICAM-1 наблюдается в областях с нарушением BSCB. Области, окрашенные альбумином (A) и ICAM-1 (B) , локализуются в белом веществе через 20 недель после 22 Гр. Антитела, специфичные к Glut-1 (C) и EBA (D) , окрашивают микрососуды в спинном мозге крысы. В соседних срезах спинного мозга крысы через 20 недель после 20 Гр область гипоксии, продемонстрированная иммуногистохимическим обнаружением EF5 (E) , совместно локализуется с экспрессией продуктов чувствительного к гипоксии гена Glut-1 (F) и VEGF . (G) , и где наблюдается иммунореактивность ICAM-1 (H) .Исходные увеличения: A, B, E – H, × 100; C, D, × 400
Экспрессия генов, чувствительных к ICAM-1, гипоксии и гипоксии
Поскольку Glut-1 является классическим геном, чувствительным к гипоксии (38), наличие гипоксии было исследовано в прилегающих срезах спинного мозга с использованием иммуногистохимического окрашивания на нитроимидазол EF5 (27) (рис. 4E). Последовательные соседние срезы показали пространственную коэкспрессию Glut-1 (фиг.4F) и экспрессию другого продукта гена, чувствительного к гипоксии, VEGF (фиг.4G). В отличие от экспрессии Glut-1, наблюдаемой в профилях микрососудов (фиг. 4C), этот второй образец иммунореактивности Glut-1 проявлял диффузное и точечное окрашивание вблизи некротических областей. Экспрессия VEGF причинно связана с индукцией ICAM-1 в ЦНС (31), взаимосвязь подтверждается обнаружением пространственной совместной локализации VEGF (рис. 4G) и ICAM-1 (рис. 4H).
Выражение EBA
EBA был выбран для более подробной количественной оценки, поскольку он показал сильное, поддающееся количественной оценке окрашивание.Для серого вещества была получена большая EBA-положительная площадь на мм ², что отражает большую плотность сосудов этого отсека. Было высказано предположение о снижении иммунореактивности EBA при увеличении доз ≥18 Гр как в белом, так и в сером веществе (рис. 5A). Площадь иммунореактивности EBA на мм ² также, по-видимому, уменьшилась через 19 недель в белом и сером веществе после дозы ED100 22 Гр (фиг. 5B). Однако для каждого сосуда EBA-положительная площадь на мм ² через 20 недель после 17 и 22 Гр была снижена по сравнению с контролем только в белом веществе (рис.5С). EBA-положительная площадь на сосуд, по-видимому, уменьшалась с увеличением времени через 16 недель после 22 Гр, но снова только в белом веществе (рис. 5D).
Рис. 5.
EBA-окрашенная площадь (мм ²) в микрососудах (MV) на мм ² через 20 недель после однократных доз 8, 17, 18, 19, 20 и 22 Гр (A ) , и через различные промежутки времени после однократного приема 22 Гр (B) . EBA-окрашенная площадь (мм ²) на микрососуд на мм ² через 20 недель после различных доз (C) , и временные интервалы после 22 Гр (D) .Каждая точка данных представляет собой среднее значение от 3 до 4 животных и от 3 до 4 секций на животное. Планки погрешностей представляют ± SEM. * p <0,05
Рис. 5.
EBA-окрашенная область (мм ²) в микрососудах (MV) на мм ² через 20 недель после однократных доз 8, 17, 18, 19, 20 и 22 Гр (A) , и через различные промежутки времени после однократной дозы 22 Гр (B) . EBA-окрашенная площадь (мм ²) на микрососуд на мм ² через 20 недель после различных доз (C) , и временные интервалы после 22 Гр (D) .Каждая точка данных представляет собой среднее значение от 3 до 4 животных и от 3 до 4 секций на животное. Планки погрешностей представляют ± SEM. * p <0,05
Обсуждение
Лучевое поражение ЦНС является основным препятствием для доставки эффективных доз лучевой терапии и, как правило, необратимо. Нарушение ГЭБ — постоянная находка после облучения ЦНС высокими дозами. Предыдущие исследования продемонстрировали морфологические изменения эндотелиальных клеток и микрососудов, которые были связаны с радиационным разрушением ГЭБ (5).Однако механизмы радиационно-индуцированных изменений проницаемости ЦНС не изучены. Чтобы идентифицировать мишени, которые могут быть вовлечены в радиационно-индуцированное разрушение ГЭБ и повреждение ЦНС, мы оценили экспрессию белков, которые, как полагают, важны для целостности ГЭБ.
Мы обнаружили увеличение экспрессии ICAM-1 после облучения в спинном мозге, которое было выражено в более поздние интервалы времени, когда наиболее очевидны разрушение BSCB и повреждение тканей. Экспрессия ICAM-1 локализована преимущественно в эндотелиальных клетках, но как эндотелиальная, так и глиальная экспрессия увеличиваются после облучения.Раннее увеличение экспрессии ICAM-1 через 24 часа также соответствует моменту времени, когда обнаруживается нарушение BSCB (5, 9, 39). Кроме того, повышенная экспрессия ICAM-1 наблюдалась в регионах с признаками нарушения BSCB. Эта пространственная ассоциация между ICAM-1 и нарушением барьера возникает при других повреждениях ЦНС, где присутствует нарушение ГЭБ, и согласуется с ролью ICAM-1 в разрушении ГЭБ. В предыдущих исследованиях мы изучали взаимосвязь между областями разрушения BSCB и некрозом тканей (26, 27).Разрушение BSCB предшествовало и сопровождало некроз в областях спинного мозга с развивающимся повреждением тканей. Это также было связано с региональной гипоксией и экспрессией генов, чувствительных к гипоксии.
Мы обнаружили сходную базовую интенсивность окрашивания микрососудов в сером и белом веществе. Индукция ICAM-1 не наблюдалась в сером веществе в этой модели, поэтому механизмы, которые приводят к дисфункции в сером веществе, могут отличаться от тех, которые лежат в основе некроза в белом веществе. Причины такой разницы в сером и белом веществе неизвестны, но различия в микросреде в двух компартментах могут модулировать эту стрессовую реакцию.
Эти данные о спинном мозге крыс согласуются с предыдущими данными, полученными на мышах. Данные одного исследования, в котором использовался анализ защиты от РНКазы, продемонстрировали увеличение мРНК ICAM-1 в мозге мышей через 1 день после облучения, но экспрессия не увеличивалась в поздней фазе через 2 месяца после облучения (40). В другом исследовании воспаления ЦНС иммуногистохимия продемонстрировала, что повышенный уровень белка ICAM-1 сохраняется от 1 до 7 дней после 10 Гр в мозге мышей (41). Эти исследования не оценивали взаимосвязь между экспрессией ICAM-1 и нарушением BSCB, а экспрессия глиального ICAM-1 не изучалась.В более позднем исследовании было обнаружено, что системное введение моноклонального антитела ICAM-1 снижает вызванное излучением увеличение проницаемости в сосудах пиальной оболочки через 24 часа (42). На сегодняшний день полученные данные указывают на то, что ICAM-1 является подходящим объектом для дальнейшего исследования механизмов разрушения барьера после облучения.
Учитывая доказательства того, что повышенная экспрессия ICAM-1 сопровождает распад BBB, было бы очень интересно изучить реакцию мышей с направленной делецией ICAM-1 на облучение спинного мозга.Мыши с нокаутом ICAM-1 жизнеспособны и плодовиты, у них снижена респираторная недостаточность и легочный фиброз после облучения всего легкого по сравнению с контрольной группой (43, 44). В модели церебральной малярии на мышах разрушение ГЭБ не происходило у мышей ICAM-1 — / — после инфицирования Plasmodium (12).
ICAM-1 играет центральную роль в связывании лейкоцитов и инфильтрации при воспалительных процессах. Моноклональные антитела против ICAM-1 ингибируют связывание лейкоцитов с эндотелиальными клетками и их миграцию через эндотелиальные монослои (45).Ряд других систем повреждения ЦНС с повышенной экспрессией ICAM-1 являются моделями воспалительных процессов (12, 13). Воспалительные цитокины TNFα и IL1-β индуцируют экспрессию ICAM-1, и было показано, что оба они активируются после облучения ЦНС (40, 46, 47). Необходимы дальнейшие исследования взаимосвязи между экспрессией ICAM-1 и воспалительными реакциями при лучевом поражении ЦНС. Если они окажутся важными, противовоспалительная терапия может быть рассмотрена в стратегиях нейрозащиты.
Механизмы активации ICAM-1 после облучения не изучены. ICAM-1 не является геном раннего ответа, но он может находиться ниже других генов, индуцированных радиацией в ЦНС. К ним относятся факторы роста, цитокины и факторы транскрипции, такие как VEGF, TNFα и NFκB (27, 40). VEGF стимулирует повышенную экспрессию ICAM-1 в ЦНС (22, 31). NFκB активирует IL1-β, а IL1-β и TNFα являются ключевыми индукторами экспрессии ICAM-1 (48). Сообщалось, что TNFα имеет двухфазный ответ после облучения в ЦНС, с увеличением мРНК через 24 часа и повышением снова через 2-6 месяцев (40).Это может вносить вклад в паттерн, наблюдаемый для белка ICAM-1, который увеличивался как в ранние, так и в поздние интервалы в связи с нарушением барьера. Также возможно, что нарушение работы BSCB каким-то образом ведет к усилению регуляции ICAM-1.
Хотя его функция неизвестна, EBA использовался в качестве маркера эндотелия с компетенцией BBB, а снижение экспрессии EBA сопровождает нарушение BBB при ряде повреждений ЦНС (49–51). Кроме того, за разрушением ГЭБ следует иммунологическое нацеливание на ЕВА путем системной инъекции моноклонального антитела против ЕВА (20).Электронно-микроскопический анализ после этого лечения показал, что увеличение проницаемости сосудов, по-видимому, происходит как за счет увеличения везикулярного транспорта, так и за счет расширения соединений эндотелиальных клеток (52). Это говорит о том, что потеря EBA может быть важной в механизмах нарушения BBB.
Площадь сосудов, иммунореактивная для EBA на мм ², по-видимому, уменьшалась с увеличением дозы облучения ≥17 Гр через 20 недель и уменьшалась через 18 недель после 22 Гр. В модели лучевой миелопатии крыс разрушение BSCB наблюдается при дозах более 18 Гр, и эти изменения прогрессируют через 18-20 недель после облучения (5, 37).Таким образом, наблюдаемое время и дозозависимое снижение экспрессии EBA согласуется с нарушением BSCB, наблюдаемым в этой модели. Наши предыдущие исследования показали, что количество микрососудов в поперечных срезах спинного мозга крыс постепенно уменьшалось через 90 дней после облучения (5). В этом исследовании значительное уменьшение EBA-положительной площади на микрососуд по сравнению с контролем произошло только в белом веществе. Это согласуется с более сильным нарушением BSCB, наблюдаемым в белом веществе (5, 27).Уменьшение EBA-иммунореактивной площади на микрососуд может быть связано с уменьшением количества белка. Это также может отражать изменение распределения белка в сторону более компактной конформации. Если бы последнее было верно, можно было бы ожидать увеличения интенсивности окрашенных поперечных срезов. Это не было очевидным при микроскопической оценке срезов, но это трудно исключить из-за ограничений доступных инструментов анализа изображений при количественной оценке интенсивности.
Вместе с доказательствами участия ICAM-1 в других повреждениях ЦНС и нарушении ГЭБ, настоящие результаты предполагают его включение в модель лучевого поражения ЦНС.Процессы с участием ICAM-1, которые, как предполагается, вносят вклад в нарушение барьера, включают ICAM-1-опосредованное связывание лейкоцитов, перестройки цитоскелета, передачу сигналов к плотным контактам или эффекты цитокинов, высвобождаемых астроцитами, экспрессирующими ICAM-1 (33, 53). Экспрессия ICAM-1 может участвовать во взаимодействии активированных астроцитов с другими стимулирующими факторами, которые вызывают высвобождение цитокинов или других молекул, которые вносят вклад в токсическое микроокружение в облученной ЦНС. Астроциты также являются источником VEGF, который связан с нарушением BSCB при лучевом поражении (26, 27, 53).Эти сигналы от ICAM-1-положительных клеток могут добавить к репертуару астроцитарных влияний при лучевом поражении ЦНС.
Благодарности
Благодарим Ю-Цин Ли и Джеймса Хо за техническую помощь в подготовке тканей и иммуногистохимии. Антитела EF5 и ELK3–51 были подарены доктором К. Кохом, Университет Пенсильвании, Филадельфия, Пенсильвания.
Список литературы
1.
.
Астроциты вызывают свойства гематоэнцефалического барьера в эндотелиальных клетках
.
Nature
1987
;
325
:
253
—
57
2.
.
Роль перицита микрососудов ЦНС в гематоэнцефалическом барьере
.
J Neurosci Res
1998
;
53
:
637
—
44
3.
.
Радиационно-индуцированные изменения гематоэнцефалического барьера: патофизиологические механизмы и клинические последствия
.
Acta Neurochir Suppl (Wien)
1998
;
71
:
282
—
84
4.
.
Нарушение гематоэнцефалического барьера как первичный эффект облучения ЦНС
.
Radiother Oncol
1994
;
31
:
51
–
60
5.
.
Барьерная функция крови и спинного мозга и морфометрия спинного мозга крыс после однократного рентгеновского облучения
.
Int J Radiat Oncol Biol Phys
1995
;
32
:
703
–
11
6.
.
Борное нейтронное облучение спинного мозга крысы: гистопатологические доказательства сосудисто-опосредованного патогенеза
.
Radiat Res
1996
;
146
:
313
—
20
7.
.
Зависимые от времени и дозы изменения белого вещества мозга крысы после однократного облучения
.
Br J Radiol
1988
;
61
:
1043
–
52
8.
.
Динамика популяции эндотелиальных клеток головного мозга крысы после локального облучения
.
Br J Radiol
1991
;
64
:
934
—
40
9.
.
Апоптоз эндотелия вызывает острое нарушение гематоэнцефалического барьера после ионизирующего излучения
.
Cancer Research
2003
;
63
:
5950
—
56
10.
.
Радиационно-индуцированный апоптоз эндотелиальных клеток в центральной нервной системе мышей: защита с помощью фактора роста фибробластов и недостаточности сфингомиелиназы
.
Cancer Res
2000
;
60
:
321
—
27
11.
.
Радиационно-индуцированное повреждение нормальной ткани Роль адгезионных молекул во взаимодействиях лейкоцитов и эндотелиальных клеток
.
Int J Cancer
1999
;
82
:
385
—
95
12.
et al. .
Роль ICAM-1 (CD54) в развитии церебральной малярии мышей
.
Микробы заражают
1999
;
1
:
961
–
68
13.
.
Характеристика инфильтрирующих мононуклеарных клеток в спинной мозг крыс Lewis с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом [EAE]
.
Ареруги
1994
;
43
:
1345
—
50
14.
.
Динамика экспрессии ICAM-1 и инфильтрации субпопуляции лейкоцитов при ишемии переднего мозга крыс
.
Mol Chem Neuropathol
1995
;
26
:
213
—
30
15.
.
Экспрессия молекул адгезии эндотелия и рекрутирование нейтрофилов после черепно-мозговой травмы у крыс
.
J Leukoc Biol
1997
;
61
:
279
—
85
16.
.
Иммуноультраструктурная экспрессия молекулы межклеточной адгезии-1 в везикулотубулярных структурах эндотелиальных клеток и везикуловакуолярных органеллах при развитии и повреждении гематоэнцефалического барьера
.
Cell Tissue Res
1999
;
295
:
77
—
88
17.
.
Активизация молекулы межклеточной адгезии-1 (ICAM-1) в опухолях головного мозга человека как выражение повышенной проницаемости гематоэнцефалического барьера
.
Brain Pathol
1995
;
5
:
339
—
44
18.
.
Сравнение маркеров эндотелиальных клеток гематоэнцефалического барьера и гематоэнцефалического барьера
.
Анат Эмбриол (Берл)
1999
;
199
:
509
—
17
19.
.
Белок гематоэнцефалического барьера, распознаваемый моноклональными антителами
.
Proc Natl Acad Sci USA
1987
;
84
:
8169
—
73
20.
.
Иммунологическое воздействие на антиген эндотелиального барьера (EBA) in vivo приводит к открытию гематоэнцефалического барьера
.
Brain Res
2000
;
878
:
127
—
35
21.
.
Повышающая регуляция фактора роста эндотелия сосудов и его родственных рецепторов в модели опухолевого ангиогенеза глиомы крысы
.
Cancer Res
1993
;
53
:
5822
—
27
22.
.
VEGF увеличивает проницаемость гематоэнцефалического барьера посредством синтазы оксида азота / cGMP-зависимого пути
.
Am J Physiol
1999
;
276
:
C1148
—
53
23.
et al. .
Антагонизм VEGF снижает образование отеков и повреждение тканей после ишемического / реперфузионного повреждения в головном мозге мыши
.
Дж. Клин Инвест
1999
;
104
:
1613
—
20
24.
.
Индукция индуцируемого гипоксией фактора-1 (HIF-1) и его генов-мишеней после очаговой ишемии в головном мозге крысы
.
евро J Neurosci
1999
;
11
:
4159
—
70
25.
.
Индукция мРНК VEGF коррелирует с изменениями в архитектуре сосудов при повреждении спинного мозга у крыс
.
евро J Neurosci
1997
;
9
:
2549
—
60
26.
.
Повышенная регуляция фактора роста эндотелия сосудов связана с радиационным разрушением гематоэнцефалического барьера
.
J Neuropathol Exp Neurol
1999
;
58
:
1051
—
60
27.
.
Гипоксия при радиационном разрушении гематоэнцефалического барьера
.
Cancer Res
2001
;
61
:
3348
—
54
28.
.
Механизмы передачи сигналов, опосредующие биологическое действие семейства сосудистых эндотелиальных факторов роста
.
Cardiovasc Res
2001
;
49
:
568
—
81
29.
et al. .
Мутантная форма фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), у которой отсутствует активация рецептора-2 VEGF, сохраняет способность индуцировать проницаемость сосудов
.
J Biol Chem
1999
;
274
:
34884
—
92
30.
et al. .
VEGF увеличивает экспрессию ICAM-1 в сосудах сетчатки in vivo
.
Инвест офтальмол Vis Sci
1999
;
40
:
1808
—
12
31.
et al. .
Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) модулирует проницаемость сосудов и воспаление в головном мозге крысы
.
J Neuropathol Exp Neurol
1999
;
58
:
613
—
27
32.
.
Фактор роста эндотелия сосудов усиливает экспрессию ICAM-1 посредством пути фосфатидилинозитол 3 OH-киназы / AKT / оксида азота и модулирует миграцию эндотелиальных клеток микрососудов головного мозга
.
J Biol Chem
2000
;
275
:
20770
—
74
33.
et al. .
Индуцированная фактором роста эндотелия сосудов (VEGF) проницаемость сосудов сетчатки опосредуется молекулой межклеточной адгезии-1 (ICAM-1)
.
Am J Pathol
2000
;
156
:
1733
—
39
34.
.
Фактор проницаемости сосудов / проницаемость, опосредованная фактором роста эндотелиальных клеток сосудов, происходит из-за дезорганизации белков эндотелиальных соединений
.
J Biol Chem
1998
;
273
:
15099
—
103
35.
.
VEGF увеличивает проницаемость монослоя BMEC, влияя на экспрессию окклюдина и сборку плотных контактов
.
Am J Physiol Heart Circ Physiol
2001
;
280
:
h534
—
40
36.
.
Молекулярная структура и сборка плотного контакта
.
Am J Physiol
1998
;
274
:
F1
—
9
37.
.
Линейно-квадратичная модель недооценивает щадящий эффект малых доз на фракцию в спинном мозге крысы
.
Radiother Oncol
1992
;
23
:
176
—
84
38.
.
Динамика и обратимость вызванных гипоксией изменений церебральной васкуляризации и плотности переносчиков глюкозы в церебральные капилляры
.
Brain Res
1996
;
737
:
335
—
38
39.
.
Радиационно-индуцированные изменения профиля серотонина спинного мозга, синтеза простагландинов и проницаемости сосудов
.
Int J Radiat Oncol Biol Phys
1995
;
31
:
57
—
64
40.
.
Индукция экспрессии генов острой фазы облучением головного мозга
.
Int J Radiat Oncol Biol Phys
1995
;
33
:
619
–
26
41.
et al. .
Индукция ICAM-1 в ЦНС мыши после облучения
.
Brain Behav Immun
1997
;
11
:
273
—
85
42.
.
Радиационно-индуцированная проницаемость и адгезия лейкоцитов в гематоэнцефалическом барьере крыс: модуляция с помощью антител против ICAM-1
.
Brain Res
2003
;
969
:
59
—
69
43.
.
Нокаут молекулы межклеточной адгезии 1 устраняет радиационно-индуцированное воспаление легких
.
Proc Natl Acad Sci USA
1997
;
94
:
6432
—
37
44.
.
Влияние нулевой мутации молекулы межклеточной адгезии 1 (ICAM-1) на радиационно-индуцированный фиброз легких и дыхательную недостаточность у мышей
.
J Natl Cancer Inst
2002
;
94
:
733
—
41
45.
.
In vitro адгезия и миграция Т-лимфоцитов через монослои эндотелиальных клеток микрососудов головного мозга человека: регулирование с помощью ICAM-1, VCAM-1, E-селектина и PECAM-1
.
J Neuropathol Exp Neurol
1999
;
58
:
138
—
52
46.
.
Повышающая регуляция экспрессии молекулы-1 межклеточной адгезии на человеческих эндотелиальных клетках с помощью фактора некроза опухоли альфа в модели гематоэнцефалического барьера in vitro
.
Brain Res
1999
;
830
:
330
—
36
47.
.
Активность NF каппа B и экспрессия целевого гена в головном мозге крысы после одного и двух воздействий ионизирующего излучения
.
Radiat Oncol Investig
1999
;
7
:
145
—
52
48.
.
TNF альфа и IL-1beta опосредуют индукцию молекулы-1 межклеточной адгезии через взаимодействие микроглии и астроцитов при лучевом поражении ЦНС
.
J Neuroimmunol
1999
;
95
:
95
—
106
49.
.
Белки эндотелия клеточной поверхности, измененные при экспериментальном аллергическом энцефаломиелите
.
J Neuroimmunol
1989
;
21
:
241
—
48
50.
.
Иммуноцитохимическая экспрессия антигена эндотелиального барьера (EBA) во время ангиогенеза головного мозга
.
Brain Res Dev Brain Res
1992
;
66
:
47
—
54
51.
.
Экспрессия иммунореактивности антигена эндотелиального барьера в кровеносных сосудах после компрессионной травмы спинного мозга крысы Временная эволюция и зависимость от степени воздействия
.
Acta Neuropathol (Berl)
1998
;
96
:
8
—
12
52.
.
Исследование под электронным микроскопом открытия гематоэнцефалического барьера, индуцированного иммунологическим воздействием на антиген эндотелиального барьера. Экспрессия антигена, специфичного для гематоэнцефалического барьера, в репродуктивном тракте самца крысы
.
Brain Res
2002
;
934
:
140
—
51
53.
.
Миграция лимфоцитов в центральную нервную систему: влияние передачи сигналов ICAM-1 на гематоэнцефалический барьер
.
Vascul Pharmacol
2002
;
38
:
315
—
22
Заметки автора
Авторские права © 2004 Американской ассоциации невропатологов, Inc.
Серый эластичный барьерный шнур 50 футов
Серый эластичный барьерный шнур 50 футов | Диаметр 0,2 дюйма
Эл. адрес Приколи это Делиться Твитнуть
Длина ремня: 50 ‘
50 ‘ 100 ‘
21 доллар.89 / каждый (долл. США)

Этот 50-футовый серый эластичный барьерный шнур создает изысканный внешний вид и упорядоченное формирование очереди. Перегородка была разработана для работы с нашей серией музейных стоек, а также с нашими стенными рецепторами из нержавеющей стали. Этот стильный серый эластичный барьерный шнур идеального цвета и толщины для создания тонкой линии безопасности вокруг произведений искусства или создания дизайнерской очереди на вход.Просто отвинтите верхнюю часть одной из наших музейных стоек или стенных рецепторов и закрепите на длине, которая наилучшим образом соответствует вашим потребностям. Каждая леска сделана из латекса и текстильного полиэстера, чтобы растягиваться между стойками и оставаться прочной на месте. Длина дает вам возможность создать бесшовную линию безопасности в вашем сувенирном магазине, вокруг драгоценных произведений искусства или у входа в ваш высококлассный бизнес. Этот барьерный шнур дает вам свободу использования и гарантирует, что внешний вид вашего заведения будет продуман до мелочей.
Артикул FGMSC50SV
Марка Полюс очереди
Диаметр x длина 0,20 x 600,0 дюйма
Линия или серия Тонкий
Масса 0.5 фунтов
Материал Полиэстер, Латекс
Цвет Серый
штук в единице 1
Длина ремня 50.0 ‘
Всего 3 из 5 | 2 Отзывов
5/5
Люблю эти стойки
Милисса Б.8 июля 2020 г. Подтвержденная покупка
Это больше о стойках 16 дюймов, для которых я купил шнуры — они великолепны! Легко собрать. Они действительно хороши, потому что верхняя часть прикручивается (не прилегает к трению). Эластичный шнур прочный и хорошо работает.
1/5
Я не могу просмотреть то, что вы не доставляете
Дженнифер М.20 августа 2020 г. Подтвержденная покупка
Я бы хотел оставить отзыв, но я не получил всю посылку. В пятницу я связался со службой поддержки клиентов, и мне сказали, что ваши компьютеры не работают, и что нужно повторить попытку в понедельник. В понедельник я связался со службой поддержки клиентов, и они сказали, что пришлют замену. Я только что получил подтверждение того, что вы отправили замену на наш адрес для выставления счетов в Калифорнии, а не на исходный адрес доставки в Филадельфии.
Вопросы и ответы

расширяющийся шнур БАРЬЕР, гидрошнур, саморасширяющийся шнур, ООО Геотехнологии, Санкт-Петербург

Рис.2.1 Установка расширяющегося шнура «БАРЬЕР» в монолитных бетонных конструкциях

Саморасширяющийся шнур «Барьер» (гидрошнур). Технические характеристики

Бентонитовый шнур Барьер

Рис.2.1 Установка расширяющегося шнура «БАРЬЕР» в монолитных бетонных конструкциях

Саморасширяющийся шнур «Барьер» (гидрошнур). Технические характеристики

Бентонитовый шнур «Барьер»

гернит.com — Бентонитовый шнур «Барьер»

Бентонитовый шнур ((гидропрокладка) Барьер. Описание, технические характеристики, подбор аналогов.

Противопожарный шнур-барьер «ОГНЕКОНТУР-ПШ» — Деформационный шов. Москва

Противопожарный шнур-барьер «ОГНЕКОНТУР-ПШ»

Бентонитовый шнур. Цены. Характеристики. Консультация.

Гематоэнцефалический барьер и спинной мозг — Блог

Нарушение гематоэнцефалического / спинномозгового барьера у пациентов с БАС

Резюме

Основные моменты

Аббревиатуры

поздний склерозовый эндотелиальный кадгерин

поздний склерозирующий сердечник

латентный спарившийся мозг

шнур барьер

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Введение

Материалы и методы

Управление по делам животных и лекарств

Индукция травмы спинного мозга Крыса Модель

Анализ синего красителя Эванса

Оценка восстановления двигательной активности

Культура клеток и кислородно-глюкозная депривация

Вестерн-блоттинг-анализ

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Тест TUNEL

Статистический анализ

Результаты

SCI активирует стресс ER и аутофагию

Введение NaHS значительно снижает стресс ER и аутофагию, вызванный SCI

SCI вызывает потерю белков TJ и AJ

Введение NaHS предотвращает потерю белков TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии после SCI

ER стресс запускает аутофагию после SCI

Введение NaHS снижает проницаемость BSCB и улучшает функциональное восстановление за счет ингибирования стресса ER и аутофагии после SCI

Введение NaHS подавляет стресс ER и аутофагию в ECs, обработанных OGD

Введение NaHS снижает потерю белков TJ и AJ путем ингибирования стресса ER и аутофагии

Обсуждение

Авторские взносы

Финансирование

Заявление о конфликте интересов

Ссылки

Разрушение гематоэнцефалического барьера и уменьшение перицитов при боковом амиотрофическом склерозе

Ранняя радиационно-индуцированная потеря эндотелиальных клеток и разрушение барьеров кровь-спинной мозг в спинном мозге крыс

Аннотация

Введение

Материалы и методы

Животные и облучение

Гистопатология и иммуногистохимия

Статистика

Результаты

Гистопатология

Выражение ICAM-1

Экспрессия ICAM-1 и нарушение BSCB

Экспрессия генов, чувствительных к ICAM-1, гипоксии и гипоксии

Выражение EBA

Обсуждение

Благодарности

Список литературы

Заметки автора

Серый эластичный барьерный шнур 50 футов

Длина ремня: 50 ‘

Описание

Серый эластичный барьерный шнур длиной 50 футов для музейной баррикадной системы

Технические характеристики

Информация для заказа

Отзывы

Я не могу просмотреть то, что вы не доставляете

Вопросы и ответы

Published by alexxlab

Добавить комментарий Отменить ответ